1、实实 验验 一一 细菌的形态与染色细菌的形态与染色 一.录像：微生物学发展史 二.实验室规则介绍（生物安全）三.细菌形态示教及示教操作 四.学生操作：革兰染色法（Gram stain)五.作业 实验室规则介绍（生物安全）牢固树立“有菌观念”严格执行“无菌操作”严防“杂菌污染”实验室规则介绍（生物安全）一.安全使用水、电、煤 二.保持实验室安静有序、爱护实验器材 三.培养良好习惯，树立自我保护意识 穿实验服 不在实验室内吃东西 不将任何实验材料（如细菌涂片、细菌培养物）携带出实验室 实验室规则介绍（生物安全）若有传染性材料污染桌面、地面、书、衣物或人体，应立即报告教师，并在教师指导下进行消毒处理
2、 实验用过的物品归还原处，带有传染性的吸管、玻片等，必须放在指定地点 实验结束后，清洗消毒（0.1%新洁尔灭溶液中浸泡）双手后方可离开 四.做好实验室清洁卫生工作 细菌形态示教及示教操作 1.细菌的形态结构 细菌的大小及排列 细菌的基本结构 2.细菌的特殊结构 荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢 3.细菌的染色检查法 细细 菌菌 形形 态态 示示 教教 荚膜荚膜 肺肺 炎炎 球球 菌菌 荚荚 膜膜 （capsulecapsule）细菌形态示教细菌形态示教 鞭毛、菌毛鞭毛、菌毛 菌毛 pilus 电镜下 变形杆菌周身鞭毛flagellum 光学显微镜下 细细 菌菌 形形 态态 示示 教教 芽孢芽孢 破伤风杆
3、菌芽孢破伤风杆菌芽孢 endospore of C.tetaniendospore of C.tetani 光学显微镜下形态 电子显微镜下形态 G+菌菌 G-菌菌 等电点等电点 PI 23 PI 45 带负电荷多带负电荷多 带负电荷少带负电荷少 通透性通透性 低低 高高 肽聚糖多肽聚糖多，脂质少脂质少 肽聚糖少肽聚糖少，脂质多脂质多 酒精不易进入酒精不易进入 酒精易进入酒精易进入 Gram stain 原 理 Gram stain Gram stain 意意 义义 1.鉴别细菌：分成G+菌和G菌 2.选择药物：G+菌和G菌对抗菌药物 敏感性不一样 3.与致病性有关：G+菌产生外毒素 G菌产生内
4、毒素 革兰染色法 Gram stain 学生操作：两人一组 材料：两人一组 菌种：表皮葡萄球菌及大肠杆菌斜面各一支 玻片每人1张 革兰染色液一套 接种环每人一支 革兰染色法 Gram stain 基本过程：1.涂片 2.干燥 3.固定 4.染色 接种棒冷却接种棒冷却 事先加好NS 量少 革兰染色法 Gram stain 1.涂片制备：按下图分别加生理盐水各一滴，再按下图分别加菌研匀 菌 1 菌 1+菌 2 菌 2 革兰染色法 Gram stainGram stain 制备一张好涂片的基本要素：1.玻片不含油脂(若有油脂可用卷筒纸蘸95%酒精擦干净)。2.生理盐水应尽量少加。3.取菌不宜过多。2
5、.干燥：自然干燥或烘干（标本面朝上）3.固定：热固定（火焰上来回通过3次固定）目的：目的：1.1.使细胞质凝固使细胞质凝固,以固定细胞形态以固定细胞形态,并使并使之牢固附着在载玻片上。之牢固附着在载玻片上。2.2.杀死细菌，操作更安全杀死细菌，操作更安全 涂片 结晶紫初染1min 碘液媒染1min 95%酒精脱色30s 复红复染30s 水洗，干水洗，干 革革 兰兰 染染 色色 全全 过过 程程 示示 意意 图图 （紫（紫 碘碘 酒酒 红，红，1 1 半半，每次水洗，阳紫阴红。）半半，每次水洗，阳紫阴红。）水洗，干水洗，干 烘干烘干,油镜检油镜检 水洗，干水洗，干 水洗，干水洗，干 水洗，干水洗
6、，干 实实 验验 报报 告（告（格格 式式）一一.目的目的 二二.材料与方法材料与方法 三三.结果（需用彩笔画示意图）结果（需用彩笔画示意图）四四.分析与讨论分析与讨论 作为平时成绩记入总成绩 革兰染色影响因素分析 1.脱色是关键 2.菌液涂片不能太厚 3.细菌生长周期的影响 细细 菌菌 形形 态态 示示 教（教（革兰染色革兰染色）Streptococcus 链球菌链球菌 streptococcus 链球菌链球菌 Staphylococcus 葡萄球菌葡萄球菌 E.Coli 大肠杆菌大肠杆菌 细细 菌菌 形形 态态 示示 教教 美 蓝 染 色 奈 瑟 染 色 脑脊液标本涂片中的脑膜炎双球菌 1
7、.1.分成分成1010组，每组组，每组2323人，每组成员参与讨论人，每组成员参与讨论1 1次，次，以小组计成绩，占总成绩的以小组计成绩，占总成绩的10%10%。2.2.评价指标包括以下评价指标包括以下5 5个方面（每个指标个方面（每个指标2 2分）：分）：A.A.主题明确，讲解思路清晰并能即兴回答提问主题明确，讲解思路清晰并能即兴回答提问 B.B.口头表达能力强，语言生动流畅，能吸引学生口头表达能力强，语言生动流畅，能吸引学生的注意力的注意力 C.PPTC.PPT制作精美，重点突出并与讲解内容协调制作精美，重点突出并与讲解内容协调 D.D.资料准备翔实，数据可靠资料准备翔实，数据可靠 E.E
8、.有良好的团队协作精神有良好的团队协作精神 讨论课基本要求 讨论课安排 1.1.消毒与灭菌消毒与灭菌 （实验二）（实验二）2.2.奈瑟菌（实验三）奈瑟菌（实验三）3.3.细菌感染的实验室诊断（实验四）细菌感染的实验室诊断（实验四）4.4.微小杆菌等（实验七）微小杆菌等（实验七）5.5.梅毒螺旋体（实验八）梅毒螺旋体（实验八）6.6.钩端螺旋体（实验八）钩端螺旋体（实验八）7.7.立克次体（实验八）立克次体（实验八）8.8.支原体（实验八）支原体（实验八）9.9.衣原体（实验八）衣原体（实验八）10.10.真菌（实验九）真菌（实验九）由专人负责安由专人负责安排讨论课排讨论课 讨论课提纲：消毒与灭
9、菌 1、何为何为消毒、灭菌、防腐、无菌消毒、灭菌、防腐、无菌？2、你认为在哪些情况下常会使用到消毒与灭菌技术？、你认为在哪些情况下常会使用到消毒与灭菌技术？3、消毒与灭菌通常可使用哪些方法？、消毒与灭菌通常可使用哪些方法？4、湿热的灭菌效果为什么比干热要好？、湿热的灭菌效果为什么比干热要好？5、当对某一件器物既可用物理方法也可用化学方法、当对某一件器物既可用物理方法也可用化学方法 进行消毒进行消毒灭菌时，你认为应该优先选哪一种方法灭菌时，你认为应该优先选哪一种方法 较好？为什么？较好？为什么？6、你认为物理或化学方法可导致微生物或感染因子、你认为物理或化学方法可导致微生物或感染因子 灭灭 活或死活或死亡的机理是什么？亡的机理是什么？注：讲解时间必须控制在注：讲解时间必须控制在20min之内，留之内，留5min 让其他同学或老师提问？要求讲解者及其同小组同学答疑。让其他同学或老师提问？要求讲解者及其同小组同学答疑。实验二 细菌培养与消毒灭菌 实验内容：实验内容：1.录像：消毒与灭菌 2.讨论课：消毒与灭菌 3.培养基与细菌生长状况示教 4.学生操作：细菌接种平板分区划线法
