1、实验四、水稻苗期稻瘟病抗性鉴定实验四、水稻苗期稻瘟病抗性鉴定 1 1、熟悉水稻苗期稻瘟病的症状特征。、熟悉水稻苗期稻瘟病的症状特征。2 2、学习水稻苗期稻瘟病的鉴定方法。、学习水稻苗期稻瘟病的鉴定方法。一、目的 实验四、水稻苗期稻瘟病抗性鉴定实验四、水稻苗期稻瘟病抗性鉴定 二、内容说明 水稻稻瘟病水稻稻瘟病（Pyricularia oryzae）是是水稻生产上的主要病害之一水稻生产上的主要病害之一。它是一种它是一种真菌病害真菌病害，分布范围及广分布范围及广，遍及世界及遍及世界及我国各个稻区我国各个稻区，流行速度极快流行速度极快，对水稻对水稻的危害极大的危害极大。根据稻瘟病发生的时期和根据稻瘟病
2、发生的时期和部位部位，可分为苗瘟可分为苗瘟、叶瘟叶瘟、节瘟节瘟、颈瘟颈瘟和粒瘟和粒瘟。以叶瘟发生最早以叶瘟发生最早，在秧苗时期在秧苗时期就可以发生就可以发生，并可以进行鉴定并可以进行鉴定。实验四、水稻苗期稻瘟病抗性鉴定实验四、水稻苗期稻瘟病抗性鉴定 虽然有些品种具有高度抗稻瘟病的特虽然有些品种具有高度抗稻瘟病的特性性，但是由于病源菌的生理小种变异频但是由于病源菌的生理小种变异频繁繁，抗病品种的抗性容易丧失抗病品种的抗性容易丧失，很快会很快会变为感病型变为感病型。这些并非是品种抗病性的这些并非是品种抗病性的改变改变，而是由于病源菌生理小种的频繁而是由于病源菌生理小种的频繁变化所致变化所致。必须不
3、断了解病原菌的变化必须不断了解病原菌的变化，并不断选育出新的抗病品种用于生产并不断选育出新的抗病品种用于生产，才能有效地控制病害才能有效地控制病害。实验四、水稻苗期稻瘟病抗性鉴定实验四、水稻苗期稻瘟病抗性鉴定 稻瘟病发生和流行的环境条件，温度以稻瘟病发生和流行的环境条件，温度以25-28最为适宜，空气相对湿度为最为适宜，空气相对湿度为96%以上最为以上最为适宜。这时菌丝发育和分生孢子形成均有利。适宜。这时菌丝发育和分生孢子形成均有利。分生孢子的萌发还要求有水滴存在。光照对孢分生孢子的萌发还要求有水滴存在。光照对孢子的形成、萌发、浸入都有抑制作用。分生孢子的形成、萌发、浸入都有抑制作用。分生孢子
4、萌发后，浸入组织，经四天的潜育期就可出子萌发后，浸入组织，经四天的潜育期就可出现病班，稻株易感病的生育时期是四叶期、分现病班，稻株易感病的生育时期是四叶期、分蘖期和穗期。偏施氮肥和排灌不良易导至稻瘟蘖期和穗期。偏施氮肥和排灌不良易导至稻瘟病的发生和流行。稻瘟病的鉴定方法分为人工病的发生和流行。稻瘟病的鉴定方法分为人工接种鉴定和自然鉴定两种。前者常用于苗瘟和接种鉴定和自然鉴定两种。前者常用于苗瘟和叶瘟的鉴定，后者可用于苗瘟、叶瘟、枝梗瘟叶瘟的鉴定，后者可用于苗瘟、叶瘟、枝梗瘟和颈病等的鉴定。和颈病等的鉴定。实验四、水稻苗期稻瘟病抗性鉴定实验四、水稻苗期稻瘟病抗性鉴定 三、所需用品和操作方法三、所
5、需用品和操作方法 （一一）所需用品所需用品 1、材料：材料：（1）抗感稻瘟病特性不同的水稻品种材料数个抗感稻瘟病特性不同的水稻品种材料数个。（2）供试稻瘟病菌种供试稻瘟病菌种。从当地收集分布广从当地收集分布广、致致病力强的主要稻瘟菌代表性生理小种病力强的主要稻瘟菌代表性生理小种，将不同将不同小种分别进行培养繁殖小种分别进行培养繁殖，接种时混合使用接种时混合使用。实验四、水稻苗期稻瘟病抗性鉴定实验四、水稻苗期稻瘟病抗性鉴定 2、仪器和用品仪器和用品 高压灭菌锅高压灭菌锅、超净工作台超净工作台，酒精灯酒精灯、恒温培恒温培养箱养箱，三角瓶三角瓶、培养皿培养皿、接种环接种环、搪瓷盘搪瓷盘、显显微镜微镜
6、、载玻片载玻片、盖玻片盖玻片、纱布纱布、普通喷雾器或普通喷雾器或医用喷头喷雾器医用喷头喷雾器、注射器注射器、橡胶管橡胶管、保温保湿保温保湿遮阳用品等遮阳用品等。3、药品药品 可溶性淀粉、酵母、琼脂、大麦或高梁种可溶性淀粉、酵母、琼脂、大麦或高梁种子、无菌水等。子、无菌水等。本实验将涉及到以下的器具本实验将涉及到以下的器具:实验四、水稻苗期稻瘟病抗性鉴定实验四、水稻苗期稻瘟病抗性鉴定 （二）操作方法（二）操作方法 1 1、人工接种鉴定法人工接种鉴定法 （1）制备菌种制备菌种采用酵母淀粉琼脂培养基采用酵母淀粉琼脂培养基 将琼脂将琼脂10-15g放入放入1000ml水中加热溶化水中加热溶化，再加入可
7、容性淀粉再加入可容性淀粉（或蔗糖或蔗糖）10g，酵母酵母2g，分装入试管中分装入试管中，进行高压灭菌进行高压灭菌。取出取出后制成斜面后制成斜面，接入所采集的稻瘟菌菌种接入所采集的稻瘟菌菌种，放在放在26-28恒温箱中恒温箱中培养培养3-4天后天后，摇动三角瓶中的大麦粒摇动三角瓶中的大麦粒，使菌丝均匀生长使菌丝均匀生长。待菌待菌丝体长满大麦粒并变黑时丝体长满大麦粒并变黑时，用自来水冲洗大麦粒上的菌丝用自来水冲洗大麦粒上的菌丝，再再将大麦粒薄摊于搪瓷盘中将大麦粒薄摊于搪瓷盘中，用用1-2层纱布覆盖以保湿层纱布覆盖以保湿，置于置于25-28下培养下培养48小时小时，即可产生出大量孢子即可产生出大量孢
8、子，可供接种之用可供接种之用。应应注意在扩大繁殖时搪瓷盘内的湿度不宜保持过高注意在扩大繁殖时搪瓷盘内的湿度不宜保持过高，否则只长大否则只长大量菌丝量菌丝，而产孢子很少而产孢子很少。实验四、水稻苗期稻瘟病抗性鉴定实验四、水稻苗期稻瘟病抗性鉴定 病病原原菌菌的的一一级级培培养养繁繁殖殖 实验四、水稻苗期稻瘟病抗性鉴定实验四、水稻苗期稻瘟病抗性鉴定 病病原原菌菌的的二二级级培培养养繁繁殖殖 实验四、水稻苗期稻瘟病抗性鉴定实验四、水稻苗期稻瘟病抗性鉴定 （2 2）育秧育秧 将各供试水稻材料的种子进行粒选将各供试水稻材料的种子进行粒选，各取各取3030-4040粒种子粒种子，经消毒经消毒、冲洗冲洗、催芽
9、后催芽后，在盛在盛有肥沃泥土的搪瓷盘中育秧有肥沃泥土的搪瓷盘中育秧。每个盘中最好同每个盘中最好同时安排有感病和抗病品种作对照时安排有感病和抗病品种作对照。在幼苗在幼苗2 2叶叶期定株期定株，每个材料选留每个材料选留1010株生长一致的秧苗株生长一致的秧苗。定株后酌施定株后酌施2 2-3 3次氮肥次氮肥，最后一次施氮肥应在最后一次施氮肥应在接种前接种前3 3-4 4天施用天施用，使幼苗生长嫩绿使幼苗生长嫩绿。一般在一般在3 3-4 4叶期接种叶期接种。如采用注射接种鉴定法如采用注射接种鉴定法，可在可在秧田中育秧秧田中育秧，移植于大田后进行接种鉴定移植于大田后进行接种鉴定。要注意以下几点：要注意以
10、下几点：实验四、水稻苗期稻瘟病抗性鉴定实验四、水稻苗期稻瘟病抗性鉴定 适时播种适时播种 既要考虑到在自然条件下的湿度和温度，最利既要考虑到在自然条件下的湿度和温度，最利于病菌的浸入，发病与流行，又要使供试材料正是最易于病菌的浸入，发病与流行，又要使供试材料正是最易感病的生育时期，一般在感病的生育时期，一般在3 34 4叶期，日平均气温叶期，日平均气温252528 28 和阴雨高湿，叶面长时间（和阴雨高湿，叶面长时间（1212小时以上）常有水小时以上）常有水珠的时期，最有利于发病。珠的时期，最有利于发病。育秧方式育秧方式 采用育秧盘育秧，每盘中最好都安排感病品种采用育秧盘育秧，每盘中最好都安排感
11、病品种对照，整个鉴定材料中还应安排品种对照。采用注射接对照，整个鉴定材料中还应安排品种对照。采用注射接种方法，可以在秧田育秧，后移植于本田。种方法，可以在秧田育秧，后移植于本田。苗床要增施氮肥苗床要增施氮肥（接种前（接种前4 45 5天），以利于发病。天），以利于发病。实验四、水稻苗期稻瘟病抗性鉴定实验四、水稻苗期稻瘟病抗性鉴定 （3 3）接种接种 喷雾接种：喷雾接种：当秧苗达当秧苗达3 3-4 4叶期时叶期时，先按病菌小种分别先按病菌小种分别配制孢子悬浮液配制孢子悬浮液，用用100100倍显微镜检孢子密度倍显微镜检孢子密度，平平均每个视野应有孢子均每个视野应有孢子2020-2525个个（孢密
12、度则为孢密度则为2020-2525万个万个/ml/ml）。然后将不同生理小种的孢子悬浮液混然后将不同生理小种的孢子悬浮液混合合，用于接种用于接种。采用专用喷雾器喷雾接种采用专用喷雾器喷雾接种。喷雾喷雾时要将叶片充分均匀湿润时要将叶片充分均匀湿润。接种后接种后，在在2626-2828下下，用薄膜覆盖保湿用薄膜覆盖保湿2424小时小时。然后移至室外然后移至室外，在在2020-3030下保持高湿下保持高湿，培养培养7 7天天，进行病情鉴定进行病情鉴定。实验四、水稻苗期稻瘟病抗性鉴定实验四、水稻苗期稻瘟病抗性鉴定 【孢子悬浮液的配制孢子悬浮液的配制】将上述产生孢子的大麦粒放入盛将上述产生孢子的大麦粒放
13、入盛有自来水的烧杯中经搅拌制成孢子悬浮液，其孢子浓有自来水的烧杯中经搅拌制成孢子悬浮液，其孢子浓度在度在100100倍显微镜下观察，平均每个视野倍显微镜下观察，平均每个视野20202525个个mlml，随后将不同小种的孢子悬浮液混合成混合孢子悬浮液。随后将不同小种的孢子悬浮液混合成混合孢子悬浮液。【接种接种】用专用的普通喷雾器或医用喉头喷雾器喷雾接用专用的普通喷雾器或医用喉头喷雾器喷雾接种。喷雾时要使叶片上布满均匀的雾点。接种最好是种。喷雾时要使叶片上布满均匀的雾点。接种最好是在专用接种室内进行，便于保湿保温。在专用接种室内进行，便于保湿保温。【保温、保湿和遮强光保温、保湿和遮强光 】喷雾接种
14、后，秧苗应在喷雾接种后，秧苗应在26262828和保持叶片上有水珠的湿度条件下和保持叶片上有水珠的湿度条件下2424小时，而后小时，而后移于室外移于室外,在在20203030下，经下，经4 4天左右即可见发病。天左右即可见发病。实验四、水稻苗期稻瘟病抗性鉴定实验四、水稻苗期稻瘟病抗性鉴定 注射接种：注射接种：【孢子悬浮液的配制】与“喷雾接种”相同。【接种】一般在水稻67叶期分蘖进行，接种的分蘖必须有一张未展开的嫩心叶，使用医用皮下注射器从叶鞘外侧注入孢子悬浮液，直到多余菌液从心叶中冒出为止。接种后7天调查植株的发病情况。【注意】这种方法把菌液直接注射到叶鞘内，使心叶较长时间处于浸渍状态，保证了
15、湿度，因此，发病往往较喷雾法重，一般条件的情况下采用。实验四、水稻苗期稻瘟病抗性鉴定实验四、水稻苗期稻瘟病抗性鉴定 2、自然诱发法自然诱发法 选择稻瘟病重病区选择稻瘟病重病区，在多雾天气和阴在多雾天气和阴雨的条件下雨的条件下，种植鉴定材料种植鉴定材料，采用自发诱采用自发诱发抗病鉴定发抗病鉴定。实验四、水稻苗期稻瘟病抗性鉴定实验四、水稻苗期稻瘟病抗性鉴定 将鉴定材料种植在重病区肥沃土壤上将鉴定材料种植在重病区肥沃土壤上，施氮施氮水平略高于当地丰产田水平略高于当地丰产田。如有必要可进行人工如有必要可进行人工田间接种田间接种，以诱导发病以诱导发病。每个鉴定材料一般栽每个鉴定材料一般栽植植10-20丛
16、丛，可移栽或直播可移栽或直播，重复三次重复三次。以当以当地抗地抗、感品种作对照感品种作对照。在鉴定区周围应种植若在鉴定区周围应种植若干行咸感病的品种作诱发行干行咸感病的品种作诱发行，以增加感染强度以增加感染强度。保持高湿条件保持高湿条件。实验四、水稻苗期稻瘟病抗性鉴定实验四、水稻苗期稻瘟病抗性鉴定 对于数量较大的世代材料，每个株系对于数量较大的世代材料，每个株系种植种植2-5行，每行行，每行10株（丛），每隔株（丛），每隔10个株个株系种植一个抗、感病品种作对照。当感病系种植一个抗、感病品种作对照。当感病品种达到高度发病时，即可进行病情鉴定。品种达到高度发病时，即可进行病情鉴定。实验四、水稻苗期稻瘟病抗性鉴定实验四、水稻苗期稻瘟病抗性鉴定 3 3、病情鉴定病情鉴定 一般在接种后一般在接种后7 7天左右进行病情鉴定天左右进行病情鉴定。病情鉴定的方法可按全国稻瘟病鉴定分级标准病情鉴定的方法可按全国稻瘟病鉴定分级标准（下表下表）逐株进行逐株进行，分别记录每株鉴定的结果分别记录每株鉴定的结果，然然后计算各品种的病情指数后计算各品种的病情指数。最高病级数鉴定总株数各相应病级数各级病株数病情指数
