1、1 河科大二附院检验科河科大二附院检验科 王善龙王善龙 2 概述概述 红细胞计数红细胞计数 血红蛋白测定血红蛋白测定 红细胞形态检查红细胞形态检查 血细胞比容测定血细胞比容测定 红细胞平均指数红细胞平均指数 红细胞体积分布宽度红细胞体积分布宽度 3 血液是由血细胞和血浆组成的红色粘稠混悬血液是由血细胞和血浆组成的红色粘稠混悬液，不停的循环于心血管系统。成人平均血量液，不停的循环于心血管系统。成人平均血量5L左右，约占体重的左右，约占体重的8%，婴幼儿比例略高。，婴幼儿比例略高。血液的组成血液的组成 血液的主要理化性质血液的主要理化性质 血液的功能血液的功能 红细胞的生长发育红细胞的生长发育 4
2、 血液的组成：血液由有形成分和血浆血液的组成：血液由有形成分和血浆组成组成 有形成分有形成分 血细胞、血小板血细胞、血小板 血浆血浆 5 血液的主要理化性质血液的主要理化性质 1.颜色 静脉血暗红色 2.红细胞在血浆中的悬浮稳定性 细胞膜上带负电荷的唾液酸 3.粘滞性 血流变检测血液粘滞性和血细胞变形性 4.比密和渗透浓度 5.Ph值 7.35-7.45 6 血液的功能血液的功能 作为呼吸载体携带氧气至全身各组织作为呼吸载体携带氧气至全身各组织,并协同并协同维持酸碱平衡维持酸碱平衡 血液通过循环系统与全身各组织器官密切联系，参与机体呼吸、运输、防御、调节体液渗透液和酸碱平衡等各项生理活动，维持
3、机体正常新陈代谢和内外环境的平衡。7 红细胞的生长发育红细胞的生长发育 骨髓造血干细胞（细胞生成素）原红细胞（有丝分裂）早幼、中幼、晚幼 红网织红细胞 成熟细胞 （脾）铁、珠蛋白、胆红素。8 一、红细胞计数一、红细胞计数 检测原理检测原理 1.手工显微镜法手工显微镜法：用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，充入血细胞计数池，在显微镜下计数一定体积内的红细胞数，经换算求出每升血液中红细胞数量。2.血液分析仪法血液分析仪法：利用电阻抗和(或)光散射原理 9 稀释液稀释液(Hayem液液):氯化钠、结晶硫酸钠、氯化高汞溶于蒸馏水。氯化钠作用调节渗透压；硫酸钠作用是提高比密防止细胞粘链；氯化高汞为防腐剂。1
4、0 方法学评价方法学评价 1.手工显微镜法手工显微镜法（异常标本校正）（异常标本校正）血液分析仪的校正 白细胞减少时的对照核实。血小板计数受小红细胞干扰时的校正 2血液分析仪法血液分析仪法（大量样本的普查）（大量样本的普查）方法精确，且操作简便、快速，已广泛应用。11 质量控制质量控制 1手工法手工法 误差来源：标本(末梢血或EDTA抗凝的静脉血）、操作、器材（牛鲍氏计数板）、固有误差（方法学误差)2仪器法仪器法 严格按照操作规程（有些仪器要求静置一段时间）、定期进行室内和室间质控（质控品较贵）12 参考值 成年男性(45.5)X1012L；女性(3.55.0)X1012L 新生儿(6.57.
5、0)X1012L 13 临床意义临床意义 1生理性变化(1)年龄与性别的差异 新生儿高、老年人低(2)精神因素 应激情况下肾上腺皮质激素增多时 (3)剧烈体力运动和劳动 (4)气压降低 高山居民、登山运动员(5)妊娠中、后期 血容量增加 14 2病理性变化病理性变化 (1)红细胞和血红蛋白量减少 1)急性、慢性红细胞丢失过多 2)红细胞寿命缩短 膜缺陷 球形、椭圆形、PNH 3)造血原料不足 铁，维生素B12，叶酸等缺乏 4)骨髓造血功能减退 中毒、放射线、再障、自身免疫病等(2)红细胞增多 1)原发性红细胞增多 真性红细胞增多症 2)继发性红细胞增多 缺氧（慢性心、肺疾病，异常血红蛋白病、肾
6、上腺皮质亢进）刺激使EPO增加 3)相对性红细胞增多 见于呕吐、高热、腹泻、多尿、多汗、大面积烧伤等使血液浓缩 15 红细胞计数红细胞计数医学决定水平医学决定水平：高于6.8l012/L，应采取相应的治疗措施。低于3.51012/L为诊断贫血的界限，应继续寻找原因。低于1.5l012L应考虑输血 16 医学决定水平医学决定水平 指该项目结果如高于或低于某一个值时就应指该项目结果如高于或低于某一个值时就应该采取一定的措施。此检测结果所产生的价该采取一定的措施。此检测结果所产生的价值在于能为患者处理起提供依据的作用。值在于能为患者处理起提供依据的作用。医学决定水平把实验结果分为三个程度：应医学决定
7、水平把实验结果分为三个程度：应进一步检查，采取治疗措施，对预后进行评进一步检查，采取治疗措施，对预后进行评估。估。17 二、血红蛋白测定二、血红蛋白测定 血红蛋白(Hb或HGB)是一种微红色的胶体物质，其相对分子质量为64458。它是一种呼吸载体，每克血红蛋白可携带氧134mL。成人红细胞总量约有600g血红蛋白，可携氧800ml.(一一)血红蛋白分子结构及成分血红蛋白分子结构及成分 (二二)血红蛋白的合成血红蛋白的合成 (三三)血红蛋白的代谢血红蛋白的代谢 18 一一)血红蛋白分子结构及成分血红蛋白分子结构及成分 血红蛋白是珠蛋白与血红素相结合的球形大分子化合物。每个Hb分子含有4条珠蛋白肽
8、链，每条折叠的珠蛋白肽链包裹（结合）一个亚铁血红素，形成具有四级空间结构的四聚体，即完整的Hb分子。只有这种四聚体结构才具有结合O2和CO2 的生理功能。19 珠蛋白具有种属特异性。每个珠蛋白分子含有两条链和两条非链（、）。成人为两条链和两条 链，胎儿为两条链和两条 链。（链在胎儿和成人期合成均较低）亚铁血红素由2价铁原子和原卟啉组成 在正常状态，机体有99%Hb的铁原子呈Fe2+状态，称为还原Hb，l%的Fe3+为高铁血红蛋白，只有亚铁状态的Hb才能与氧结合，此时称氧合血红蛋白。血红素与氧分子的结合有协同效应。解离曲线呈S形。20 21 (二二)血红蛋白的合成血红蛋白的合成 影响Hb合成的激
9、素有2种；一是红细胞生成素（EPO），可促进-氨基-酮戊酸(ALA)的生成与铁的利用从而促进血红素和Hb的合成；二是雄激素，睾酮在肝脏内由5-还原酶转变为5-氢睾酮，它能促进-氨基-酮戊酸合成酶的生成。22(三三)血红蛋白的代谢血红蛋白的代谢 血红蛋白分子降解为珠蛋白和血红素血红 素中大部分铁由单核-吞噬细胞系统细胞加工处理后，再重新回到循环血液中，与运铁蛋白结合进入铁代谢库。珠蛋白由一系列蛋白酶和肽酶作用分解为氨基酸组分(内源性氨基酸)，与外源性氨基醒混在一起，进入氨基酸代谢，可再参与合成蛋白质和多肽或转变成其他含氮物质。23 检测原理检测原理 1氰化高铁血红蛋白氰化高铁血红蛋白(HiCN)
10、测定法测定法 2其他测定法其他测定法 有十二烷基硫酸钠血红蛋白（SDS-Hb）法、叠氮高铁血红蛋白(HiN3)法、碱羟血红蛋白法、沙利(Sahli)酸化血红蛋白法、溴代十六烷基三甲胺血红蛋白测定法（CTAB）等 24 1氰化高铁血红蛋白氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法测定法 血液中，除了硫化血红蛋白外各种血红蛋白均可被高铁氰化钾氧化为高铁血红蛋白，再和CN-结合生成稳定的棕红色复合物氰化高铁血红蛋白。氰化高铁血红蛋白在540nm处有一吸收波峰，用分光光度计测定该处的吸光度，再换算成每升血液中的血红蛋白浓度，或制备标准曲线供查阅。25 将标本稀释将标本稀释251倍，倍，Hb的摩尔消光系数为的摩
11、尔消光系数为44000（mmolcm），分子量为），分子量为64458，540nm波长比色得吸光度值波长比色得吸光度值A。比色杯光径。比色杯光径 为为1cm。血红蛋白浓度计算公式：。血红蛋白浓度计算公式：Hb(g/L)=A045HiCNX64458/44000X251 =AX367.7 26 方法学评价方法学评价 Hb测定方法大致分为4大类：根据Hb分子组成测定总Hb法(全血铁法)。根据血液物理特性测定Hb(比重法、折射仪法)。根据Hb与O2可逆性结合的物性测Hb(血气分析法)。根据Hb衍生物光谱特点 定量测定Hb（最常用）。27 方法 优点 缺点 HiCN 操作简便、快速(5min)，结果稳
12、定可靠，试剂容易保存，便于质控，为参考方法 KCN有剧毒 高白细胞和高球蛋白可致浑浊。HbCO转化慢 SDS-Hb 十二烷基硫酸钠血红蛋白 不用剧毒试剂、无公害，操作简便，呈色稳定，准确度和精度高 SDS-Hb消光系数未确定 SDS质量差异性大。SDS溶血活力大，不适于同时进行自动化分析 AHD575 同HiCN法，不用剧毒试剂 不便于自动检测、氯化血红素纯度达不到标准 HiN3 准确度和精密度高，试剂毒性低 HbCO转化慢 CTAB 溶血活力强，但不破坏白细胞，适合自动化分析 精密度和准确性低 28 质量控制质量控制 1.血标本 采血顺利、高脂血症、高球蛋白血症、高白细胞 2.方法 HiCN
13、测定为WHO和ICSH推荐的参考方法 十二烷基月桂酰硫酸钠法结果稳定可靠，准确，以用于部分CBC。3.器材 定期校准721分光光度计（镨钕滤光片）4.采血部位 静脉血与毛细管血 5.结果分析 质控分析 29 参考值参考值 成年：成年：男性120160gL；女性：110150gL（临床常用）。新生儿：新生儿：170200gL。老年老年(70岁以上岁以上)：男性：94122gL；女性87112gL。30 临床意义：临床意义：HGB、HCT和红细胞计数是贫血、红细胞增多和真性红细胞增多症的诊断和分类的重要指标。HGB和红细胞计数的意义基本相同，HGB低于参考值的下限可确定为贫血，但HGB在参考值范围
14、内也不能排除贫血，如急性失血或慢性失血的进展期HGB可不减低。31 根据血红蛋白减低程度可将贫血分为轻度、中度重度、极度四级：轻度贫血，成年男性Hb120g/L，女性100g/L；中度贫血90g/L；重度贫血60g/L；极度贫血30g/L。32 手工法计数红细胞计算公式 N=25/5n10 10 201 =n10 =n/10010 n为五个中方格内计数的红细胞总数。为五个中方格内计数的红细胞总数。25/5为一个大方格内的红细胞总数。为一个大方格内的红细胞总数。10为换算成为换算成1l血的红细胞数。血的红细胞数。10 为换算成为换算成1L血中红细胞总数。血中红细胞总数。201为红细胞稀释倍数为红
15、细胞稀释倍数 报告时以报告时以10 /L报告报告 6 10 12 6 12 33 三、红细胞形态检查三、红细胞形态检查 检测原理检测原理 将细胞分布均匀的血涂片，进行染色将细胞分布均匀的血涂片，进行染色(如如瑞氏染色瑞氏染色)，由于不同的细胞及其不同成分，由于不同的细胞及其不同成分对酸性及碱性染料的结合的多少不同，从对酸性及碱性染料的结合的多少不同，从而使各种细胞呈现出各自的染色特点。而使各种细胞呈现出各自的染色特点。34 方法学评价方法学评价 血细胞分析仪广泛用于全血细胞计数，显微镜细胞数量和形态的观察现常作为对仪器分析质控的参考对照.尤其是出现异常结果或仪器报警时，更应该对标本进行人工检查
16、及细胞分类。仪器再先进也永远代替不了人工对细胞形态的检查！35 质量控制质量控制（需要丰富的临床经验）（需要丰富的临床经验）选择细胞分布均匀的区域 注意完整的检查顺序 先低倍后高倍并注意对异常细胞的识别 参考值参考值 瑞氏染色血涂片成熟红细胞形态：双凹圆盘形，细胞大小相似，平均直径72m(直径范围69.5m)；淡粉红色，中央13为生理性淡染区；胞质内无异常结构 36 37 临床意义临床意义 1.红细胞大小不一红细胞大小不一 (1)小红细胞小红细胞(microcyte)指直径小于6m的红细胞.出现较多染色过浅、淡染区扩大的小红细胞时，提示血红蛋白合成障碍，见于缺铁性贫血（IDA）、珠蛋白生成障碍性贫血。长期慢性感染（炎症）继发的单纯小细胞性贫血，仅有胞体偏小而无淡染区增大。38 正常红细胞 小细胞低色素 39(2)大红细胞大红细胞(macrocyte)：指直径大于l0m的红细胞常见于叶酸、维生素B12缺乏所致的巨幼细胞性贫血（MA），表现为幼红细胞内的DNA合成不足，不能按时序分裂。也可见于溶血性贫血、MDS、恶性贫血等。40(3)巨红细胞巨红细胞(rnegalocyte)，指直径大于1
