1、临床研究 型糖尿病合并白内障患者晶状体上皮细胞中 和 的表达及意义胡亚茹，陈 悦，韩 雪，陈亚茹，马竹宇，王剑锋引用：胡亚茹，陈悦，韩雪，等 型糖尿病合并白内障患者晶状体上皮细胞中 和 的表达及意义 国际眼科杂志；（）：基金 项 目：安 徽 省 大 学 生 创 新 创 业 计 划 项 目（）；蚌埠医学院科技项目（）作者单位：（）中国安徽省蚌埠市，蚌埠医学院第一附属医院眼科；（）中国安徽省蚌埠市，蚌埠医学院作者简介：胡亚茹，女，在读硕士研究生，研究方向：白内障。通讯作者：王剑锋，女，硕士，主任医师，副教授，硕士研究生导师，研究方向：白内障 收稿日期：修回日期：摘要目的：观察糖尿病合并年龄相关性白
2、内障患者晶状体上皮细胞（）中色素上皮衍生因子（）、血管内皮细胞生长因子（）的表达水平，探讨糖尿病合并年龄相关性白内障的发病机制。方法：回顾性研究。收集 在蚌埠医学院第一附属医院眼科就诊的年龄相关性白内障和 型糖尿病合并年龄相关性白内障患者各 例。所有患者白内障超声乳化术中收取术眼晶状体中央区 直径的前囊膜标本，采用蛋白免疫印迹法（）检测 中、蛋白表达水平。实时荧光定量（）方法检测、的相对表达量。结果：两组患者 中均存在、的表达，型糖尿病合并年龄相关性白内障组患者 相对表达量为 ，高于年龄相关性白内障组的（），的相对表达量为，明显低于年龄相关性白内障组的（）。型糖尿病合并年龄相关性白内障组患者
3、中 和 蛋白表达量为 、，年龄相关性白内障组为、（均）。结论：型糖尿病合并年龄相关性白内障患者 中 和 表达水平发生变化，可能与糖尿病患者白内障的发生和发展有关。关键词：糖尿病合并白内障；晶状体上皮细胞（）；色素上皮 衍 生 因 子（）；血 管 内 皮 细 胞 生 长 因 子（）：，：（）；（），；，：，：（）（）（），：（）（）（）：，（；），（），：，（）：；（）；（）；（）：，（）；（）：引言白内障的发病机制复杂，目前仍未完全明确。年龄相关性白内障被认为是晶状体衰老过程，同时伴随晶状体上皮细胞（，）功能性状改变和多种细胞因子的表达异常。研究表明色素上皮细胞衍生因子（，）表达与衰老有密切的
4、关系。刘恬等研究发现 岁以下的先天性白内障 中 的表达水平远高于 岁以上年龄相关性白内障，提示 的表达下调可能导致晶状体的老化，下调程度随着晶状体的混浊程度加重进一步加重。糖尿病患者更容易发生白内障，具体机制尚不确切，本研究通过检测 型糖尿病合并年龄相关性白内障患者 中血管 内 皮 生 长 因 子（，）和 表达水平，探讨 型糖尿病合并年龄相关性白内障的发病机制，为预防和减缓糖尿病患者发生白内障提供新的途径。对象和方法 对象回顾性研究。选择 在蚌埠医学院第一附属医院眼科就诊并实施手术的 型糖尿病合并年龄相关性白内障和年龄相关性白内障患者各 例 眼。纳入标准：（）年龄 岁；（）白内障病史大于；（）
5、均符合白内障诊断标准，并且均有手术指征，无影响视力的严重并发症；（）白内障核硬度分级级；（）手术均顺利；（）晶状体后囊膜完整；（）型糖尿病合并年龄相关性白内障患者糖尿病病史大于，血糖水平控制平稳，术前未发现糖尿病视网膜病变。排除标准：（）合并增殖性糖尿病视网膜血管疾病、视神经炎、葡萄膜炎、高度近视、青光眼等病史；（）合并除糖尿病之外的其它系统性疾病；（）合并严重干眼；（）过熟期白内障；（）有眼部外伤、手术及眼底激光史；（）临床资料不完整。所有患者均知情同意，并已通过蚌埠医学院第一附属医院伦理委员会审批。方法 主要试剂和仪器 试剂（购自 公司）、（公司）、化学发光试剂盒（公司）、逆转录试剂（公司
6、）、蛋白浓度检测试剂盒（碧云天公司）；和 抗体（公司），标记抗体（公司）；多功能酶标仪（美国 公司）、组织研磨仪（武汉塞维尔生物科技有限公司）、仪（）（美国 公司）、超微量核酸蛋白浓度测定仪（公司）。标本采集 常规白内障超声乳化吸除术中连续环形撕囊，撕除晶状体中央 的前囊膜（含），将切口处的血擦干净，再将囊膜从切口取出，然后用生理盐水冲洗，清除囊膜表面残留的黏弹剂、血迹、房水；将囊膜分为 份，两份大小尽量相似，一份立即放入无菌 管中，冰箱保存，用于蛋白检测。另一份放入含 的 管冰箱保存以进行 的检测。检测 中 和 的表达 因单个囊膜中蛋白和 含量较少，根据预实验统计处理结果，标本按相近原则将
7、例囊膜标本（每例为半个囊膜）合并为 组样本。使用组织碾磨机对两组样本进行粉碎性碾磨，用 法提取两组标本的总，的 液进行溶解，然后测量两组 的浓度及纯度，纯度较好时根据不同的 浓度逆转录成 对应的第一链。逆转录完成后按照相同比例对其进行适当稀释，同时按照引物说明书将引物浓度稀释至 ，震荡混匀之后进行 加样和上机，检测 和 的相对表达量。独立重复实验 次。检测 中 和 蛋白的含量 标本按相近原则将 例囊膜标本（每例为半个囊膜）合并为 组样本。使用组织碾磨机对两组样本进行粉碎性碾磨，加入裂解液对组织进行裂解，提取总蛋白，然后以标准 蛋白试剂盒进行蛋白定量。按照 标准程序进行制胶、上样、电泳、转膜和显
8、色，最后等体积混合 液和 液（：）配制成 发光液并以凝胶成像系统进行曝光成像，用 软件对条带进行灰度分析，观察 和 蛋白的表达情况。晶状体囊膜标本按相近原则将 例合并为 组样本，独立重复实验 次。统计学分析：应用 统计软件对数据进行统计学分析，计量资料以均数标准差（?）表示，采用独立样本 检验，计数资料以 表示，采用检验，等级资料采用秩和检验，为差异有统计学意义。结果 两组患者一般资料比较本研究共纳入年龄相关性白内障和 型糖尿病合并年龄相关性白内障患者各 例。两组患者性别及晶状体核硬度，差异均无统计学意义（），两组患者年龄比较差异有统计学意义（），见表。两组患者 中 和 表达情况 两组患者 中
9、均存在、的表达。型糖尿病合并年龄相关性白内障组中 表达水平高于年龄相关性白内障组，差异有统计学意义（）；而 型糖尿病合并年龄相关性白内障组中 水平低于年龄相关性白内障组患者，差异有统计学意义（），见表。国际眼科杂志 年 月 第 卷第 期 ：电话：电子信箱：表 两组患者一般资料比较分组例数 眼数平均年龄（?，岁）性别（例）男女核硬度分级（眼）级级级年龄相关性白内障组 型糖尿病合并年龄相关性白内障组 表 两组患者 中 和 及蛋白的表达情况?分组眼数 表达蛋白表达年龄相关性白内障组 型糖尿病合并年龄相关性白内障组 两组患者 中 和 蛋白表达情况 型糖尿病合并年龄相关性白内障组患者 中 蛋白的表达量高
10、于年龄相关性白内障组患者，差异有统计学意义（）；型糖尿病合并年龄相关性白内障组患者 中 的蛋白表达量低于年龄相关性白内障组，差异有统计学意义（），见表。讨论与年龄相关性白内障相比，糖尿病患者白内障发生早，进展快，是糖尿病主要并发症之一，发病机制目前尚不清楚，近年研究其与多种细胞因子的表达异常有关。是新生血管形成的强效诱导因子，可由多种细胞分泌，刺激新生血管生长，大量研究主要聚焦在糖尿病视网膜病变、湿性年龄相关性黄斑变性等眼部新生血管性疾病，呈高表达状态。是一种多效能多肽因子，分布于全身多种组织并参与其生理 病理过程，年 等首次发现 具有很强的血管抑制作用，对多种血管生成刺激因子具有活性。已在眼
11、内多种组织中检测到，调节正常血管状态及视网膜分化，角膜、玻璃体等眼内无血管组织透明非血管状态的维持可能与 有关。与 被公认为是一对新生血管生成调控因子，大量研究证明这一对因子在视网膜新生血管相关疾病中发挥着重要作用。与 具有相反的作用，当 表达下降时，表达水平升高，二者之间相互制约，相互调节，在正常视网膜组织中、的表达维持在一定的水平，参与视网膜某些正常生理功能，两者保持着平衡，相互制约。当患者由于高血糖、血管阻塞等原因，使视网膜微循环障碍，导致视网膜缺血，两者之间的平衡关系被打破，视网膜组织中 表达升高，表达减少，在非增殖期和临床前期视网膜血管病变中发挥了重要的作用，并促进了糖尿病视网膜病变
12、的发展。汪浩等观察 型糖尿病患者房水中 水平升高，表达水平明显降低，提示糖尿病患者房水中存在 与 的失衡，可能与糖尿病视网膜病变的发生、发展有关。陈艳文观察糖尿病合并白内障患者房水中 及炎性因子、的表达明显升高，我们以前的研究结果也显示糖尿病合并白内障患者房水中、的表达升高，并与术后黄斑水肿有一定的相关性，提示炎症反应及眼内 水平的变化与糖尿病患者白内障的发生有密切相关性。年 等利用 微阵列技术发现人晶状体前囊下的 中存在。进一步研究发现 的表达位于 胞浆内。根据在其它组织细胞中 生物学特性的研究结果，可反映细胞增殖潜能，而且在细胞周期复杂的调控网络中起负性效应，是表达广泛的细胞生存 保护因子
13、。晶状体作为一个无血管组织，认为晶状体中合成与表达 是为了维持无血管化，推测 的存在可能是晶状体在进化过程中获得的血管生成抵御机制。刘恬等检测到 岁以下的先天性白内障 中 的表达水平远高于 岁以上年龄相关性白内障，提示 的表达下调可能导致晶状体的老化。进一步研究发现年龄相关性白内障前囊下 中 的蛋白和基因表达及其水平随着晶状体混浊程度的增加呈下降趋势。糖尿病患者更容易发生白内障，具体机制尚不确切，既往研究结果显示糖尿病患者房水中存在 与 的失衡，糖尿病白内障患者晶状体上皮细胞中、的表达水平是否存在同样的变化，尚未见报道。本研究结果显示与年龄相关性白内障患者相比，型糖尿病合并白内障患者 中的 的
14、表达水平升高，相反 的表达水平明显降低，与以往研究的糖尿病患者视网膜组织、房水中的变化趋势一致，因此我们推测 型糖尿病合并白内障患者 中也同样存在、表达的失衡，并且比年龄相关性白内障的平衡失调更明显，这种平衡的明显失调可能导致了糖尿病患者更早发生白内障、并且进展更快。干预眼内、水平可能为预防和减缓糖尿病患者发生白内障提供新的途径，也为糖尿病视网膜病变的治疗提供更长的时间窗。，：参考文献 ，；（）：刘恬，刘奕志，钟惟德，等 色素上皮衍生因子对晶状体上皮细胞生长的促进作用及其机制 中华实验眼科杂志；（）：谢坦 手术治疗晶状体核硬度 级年龄相关性白内障效果分析 深圳中西医结合杂志；（）：胡春玲，张晓
15、农，惠延年 老年性白内障晶状体核硬度及相关因素研究 中华眼科杂志；（）：，；（）：，：；（）：，（）；：李艳，李筱荣，袁佳琴，等 糖尿病大鼠视网膜中、的表达与血视网膜屏障损伤 眼科新进展；（）：汪浩，张伟英，赵庆宁，等 型糖尿病患者房水中 及 水平的研究 同济大学学报（医学版）；（）：，陈艳文 糖尿病性白内障患者血清与房水中细胞因子表达的变化 国际眼科杂志；（）：余芝红，李娜，赵思婕，等 糖尿病性白内障患者房水中、水平及其与术后黄斑水肿的相关性分析 齐齐哈尔医学院学报；（）：，：；（）：胡昕滢，栾洁 色素上皮衍生因子在人晶状体上皮细胞中的表达东南大学学报（医学版）；（）：，：；（）：；（）：刘恬，刘奕志，项道满 色素上皮衍生因子在人晶状体上皮细胞表达的意义 国际眼科杂志；（）：国际眼科杂志 年 月 第 卷第 期 ：电话：电子信箱：
