1、第 卷 第期 年 月广西大学学报（自然科学版）（）收稿日期：；修订日期：基金资助：国家自然科学基金项目（）通讯作者：韦万兴（），男，广西隆安人，广西大学教授；：。引文格式：杨冬，梁正诚，谢梓悦，等苯异噁唑基莽草酰胺衍生物的合成与体外抗乙肝病毒活性研究广西大学学报（自然科学版），（）：苯异噁唑基莽草酰胺衍生物的合成与体外抗乙肝病毒活性研究杨冬，梁正诚，谢梓悦，韦万兴，梁桃源，王勉（广西大学 化学化工学院，广西 南宁 ）摘要：针对市场上的抗乙肝病毒药物存在毒副作用、耐药性等问题，为进一步研发新的抗乙肝病毒有效药物，以莽草酸为原料设计合成了 个苯异噁唑基莽草酰胺类化合物，用 、和 方法对化合物的结构
2、进行表征，并对合成得到的化合物进行抗乙肝病毒体外活性实验。结果表明：苯异噁唑基莽草酰胺衍生物的毒性低，化合物、较好地抑制乙肝病毒 和 的分泌。活性化合物的分子对接结果显示，化合物与核心蛋白片段（）具有较好的相互作用。关键词：莽草酰胺；异噁唑衍生物；合成；抗乙肝病毒活性；分子对接中图分类号：文献标识码：文章编号：（），（，）：，、（）：；第期杨冬，等：苯异噁唑基莽草酰胺衍生物的合成与体外抗乙肝病毒活性研究引言乙型肝炎是一种全球 性传染 病，约有 超 过 亿 人 是 慢性 乙肝 病 毒 感 染者。乙 型 肝 炎病毒（，）是一种包膜 病毒，它感染肝脏后，会引起肝细胞坏死和炎症，严重的将导致肝纤维化、
3、肝硬化和肝细胞癌，每年造成约 万人死亡。我国乙肝病毒携带者约占全球的，约 亿人，是乙肝表面抗原携带人数最多的国家。目前，种以皮下干扰素（，）为基础的药物和种口服核苷类似物（，）已被批准用于慢性乙型肝炎的治疗。干扰素需皮下注射，并且耐受性差和具有显著的副作用，因此使用一直受到限制。可以抑制 ，但对 感染肝细胞的 没有直接作用，因此通常需要长期持续 治疗以维持病毒学应答。终身 治疗的经济问题和耐药性等问题可能会使病情随着治疗时间的延长而恶化。为了进一步提高抗 治疗水平，迫切需要开发新的抗 药物。异噁唑是含有一个氮原子和一个氧原子的五元杂环化合物，广泛存在于天然产物之中。研究表明，这类化合物具有很多
4、很好的生物活性，在抗糖尿病、抗炎、抗菌、抗肿瘤、抗病毒、免疫调节等方面起到很大作用。另外，一些异噁唑衍生物能够抑制杂草和土壤细菌，因此在农药和杀虫剂领域也有着广泛应用。由于异噁唑环的合成相对容易，且异噁唑衍生物通常具有较低的细胞毒性，因此它们仍是开发具有不同生物活性的新化合物的流行骨架结构。莽草酸是植物和微生物的生物过程中一种极其重要的天然产物，主要用于工业合成抗流感病毒药物奥司他韦。实验表明莽草酸通过影响花生四烯酸代谢，抑制血小板聚集，抑制动、静脉血栓及脑血栓形成，具有抗菌、抗肿瘤、抗禽流感的作用。莽草酸还因其特有的碳主链和固有的手性结构在有机合成中作为一种多用途的手性前体得到广泛应用，因此
5、莽草酸在合成新的化学药物、开发新的生物活性等方面具有广阔的应用前景。本文以莽草酸为原料，经酰胺化、肟化、环加成反应等过程得到 个未见报道的化合物，并用 、和对其化学结构进行表征，同时，以 细胞株为模型，测试 个化合物的体外抗乙肝病毒活性，并对结果进行分析，旨在为抗乙肝病毒药物的发展提供一定的理论依据。实验 仪器与试剂核磁共振仪（）；质谱仪（）；型酶联免疫检测仪（美国 公司）；显微熔点仪（上海易测仪器设备有限公司）；莽草酸（上海泰坦科技股份有限公司）；炔丙基胺（上海泰坦科技股份有限公司）；二甲氨基吡啶（）（上海泰坦科技股份有限公司）；羟基苯并三唑（）（上海泰坦科技股份有限公司）；氯代丁二酰亚胺（
6、）（上海泰坦科技股份有限公司）；，羰基二咪唑（）（上海泰坦科技股份有限公司）；盐酸羟胺（上海泰坦科技股份有限公司）；乙基（二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺盐酸盐（）（上海泰坦科技股份有限公司）；薄层色谱硅胶（青岛海洋化工有限公司）；胎牛血清（公司）；、试剂盒（上海科华生物工程股份有限公司）；拉米夫定（，葛兰素史克制药有限公司）；其他试剂均为分析纯。化合物的合成莽草酸合成莽草酰炔 烯丙胺，然后与各种醛形成的氧化氰反应，得到苯异噁唑基莽草酰胺类衍生物。合成方法如图、所示。广西大学学报（自然科学版）第 卷试剂与条件：（）乙酸酐，浓硫酸，；（），炔丙基胺，室温，；（），烯丙基胺盐酸盐，室温，；（）氨水，甲醇
7、，室温，。图莽草酰炔丙胺和莽草酰烯丙胺合成 试剂与条件：（），室温，；（）盐酸羟胺，室温，；（），室温，。图苯异噁唑基莽草酰胺化合物的合成 莽草酰炔烯丙胺合成在 反应瓶中，加入 莽草酸、乙酸酐溶液，室温搅拌条件下加入 浓硫酸。反应升温至，在 下搅拌 。薄层色谱检测反应完成后降至室温。用 二氯甲烷萃取次，饱和食盐水溶液洗涤次，无水硫酸钠干燥，减压蒸干备用。得化合物（产率约 ）。化合物：（，），：（，），（，），（，），（，第期杨冬，等：苯异噁唑基莽草酰胺衍生物的合成与体外抗乙肝病毒活性研究），（，），（，），（，），（，）。（，），：（）（，），（），（），（），（），（），（），（），（），（
8、）（，）。在 反应瓶中，加入 、的炔丙基胺、，二甲基甲酰胺溶液，室温搅拌。薄层色谱检测反应完成后，用 乙酸乙酯萃取次，饱和食盐水溶液洗涤次，无水硫酸钠干燥，减压蒸干备用。经硅胶柱层析分离提纯（乙酸乙酯）（石油醚）。得化合物（产率约）。在 反应瓶中，加入 ，烯丙基胺盐酸盐，二甲基甲酰胺溶液，室温搅拌。薄层色谱检测反应完成后，用 乙酸乙酯萃取次，饱和食盐水溶液洗涤次，无水硫酸钠干燥，减压蒸干备用。经硅胶柱层析分离提纯（乙酸乙酯）（石油醚），得化合物（产率约）。化合物：（，），：（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，）。（，），：（）（，），（），（），
9、（），（），（），（），（），（），（），（），（），（）（，）。在 反应瓶中，加入 化合物（或）、氨水、甲醇溶液。室温搅拌。薄层色谱检测反应完成后，减压蒸干备用。得化合物（或）（产率约）。化合物：（，），：（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，）。化合物：（，），：（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，）。（，），：（），（），（），（），（），（），（），（），（），（）。取代苯甲醛肟的合成在 反应瓶中，加入 苯甲醛、盐酸羟胺、碳酸钠、水、乙醇。室温搅拌。薄层色谱检测反应完成后，用稀盐酸中和至中性偏碱性，乙
10、酸乙酯萃取，饱和食盐水溶液洗涤次，无水硫酸钠干燥，减压蒸干备用。得化合物（产率约）。目标化合物苯异噁唑基莽草酰胺的制备在 反应瓶中，加入 、，二甲基甲酰胺溶液，在冰浴条件将 分次加入，每次间隔 ，薄层色谱检测反应完成。升至室温，加入 化合物（或广西大学学报（自然科学版）第 卷）和 。氮气保护下室温搅拌。薄层色谱检测反应完成后，减压蒸干溶剂，经硅胶柱层析分离提纯（甲醇）（二氯甲烷），得目标化合物，。化合物：，三羟基（苯基异噁唑 基）甲基）环己 烯 甲酰胺，白色固体（，产率），熔点：；（，），：（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），
11、（，）。（，），：（），（），（），（），（），（），（），（，），（，），（），（），（），（），（），（）。：，理论值为 ，实测值为 。化合物：，三羟基（对甲苯基）异噁唑 基）甲基）环己 烯 甲酰胺，白色固体（，产率），熔点：；（，），：（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，）。（，），：（），（），（），（），（），（），（，），（，），（），（），（），（），（），（），（），（）。：，理论值为 ，实测值为 。化合物：，三羟基（异丙基苯基）异噁唑基）甲基）环己烯甲酰胺，白色固体（，产率），熔点：；（，），：（
12、，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，）。（，），：（），（），（），（），（），（），（，），（，），（），（），（），（），（），（），（），（），（，）。：，理 论 值 为 ，实测值为 。化合物：（叔丁基）苯基）异噁唑基）甲基），三羟基环己烯甲酰胺，白色固体（，产率），熔点：；（，），：（，），（，），（，第期杨冬，等：苯异噁唑基莽草酰胺衍生物的合成与体外抗乙肝病毒活性研究），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，）。（，），：（），（），（），（），（），（），（，），（），（，）
13、，（），（），（），（），（），（），（），（，）。：，理论值为 ，实测值为 。化合物：（氟苯基）异噁唑 基）甲基），三羟基环己 烯 甲酰胺，白色固体（，产 率），熔 点：；（，），：（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，）。（，），：（），（），（，），（），（），（），（，），（，），（，），（），（），（），（），（），（）。（，），：，理论值为 ，实测值为 。化合物：（氯苯基）异噁唑 基）甲基），三羟基环己 烯 甲酰胺，白色固体（，产率），熔点：；（，），：（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，
14、），（，），（，）。（，），：（），（），（），（），（），（），（，），（，），（），（），（），（），（），（），（）。：，理论为值 ，实测值为 。化合物：（溴苯基）异噁唑 基）甲基），三羟基环己 烯 甲酰胺，白色固体（，产率），熔点：；（，），：（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，）。（，），：（），（），（），（），（，），（），（，），（），（），（），（），（），（），（广西大学学报（自然科学版）第 卷），（）。：，理论为值 ，实测值为 。化合物：（，二氟苯基）异噁唑基）甲基），三羟基环己烯甲酰胺，白色固体（，
15、产率），熔点：；（，），：（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，）。（，），：（），（），（），（，），（，）（），（，），（，）（），（），（），（，），（，），（，），（，），（），（），（），（），（），（）。（，），：（，），（，）：，理论值为 ，实测值为 。化合物：，三羟基（三氟甲基）苯基）异噁唑基）甲基）环己烯甲酰胺，白色固体（，产率），熔点：；（，），：（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，）。（，），：（），（），（），（），（），（），（，），（，），（，），（，），（），（），（），（），（
16、），（）。（，），：。：，理论值为 ，实测值为 。化合物：（氯 甲氧基苯基）异噁唑 基）甲基），三羟基环己 烯 甲酰胺，白色固体（，产率），熔点：；（，），：（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，）（，），：（），（），（），（），（），（），（），（），（，），（），（），（），（），（），（），（），（），（）。：，理论值为 ，实测值为 。化合物：（，二氯，三甲氧基苯基）异噁唑 基）甲基），三羟基环己 烯 羧酰胺，白色固体（，产率），熔点：；（，），：（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），第期杨冬，等：苯异噁唑基莽草酰胺衍生物的合成与体外抗乙肝病毒活性研究（，），（，），（，），（，），（，）（，），：（），（），（），（，），（），（），（），（），（，），（），（），（），（），（），（，），（），（）。：，理论值为 ，实测值为 。化合物：，三羟基（苯基，二氢异噁唑 基）甲基）环己 烯 甲酰胺，白色固体（，产率 ），熔点：；（，），：（，），（，），（，），（，），（，），（，），（，），（
