1、安徽农学通报2023年03期畜禽 水产 饲料 兽药HPLC 法测定安痛定注射液 3 种组分的含量丁阳冯超林陈向丹董书香王峻*（湖北省兽药监察所，湖北武汉 430070）摘要本文建立了安痛定注射液中巴比妥、安替比林、氨基比林含量的HPLC测定方法：采用Agilent EclipsePlus C18色谱柱（4.6 mm250 mm，5 m），流动相为乙腈-磷酸盐缓冲液（pH 7.88.0）（20 80）（用磷酸调节pH至8.0），检测波长240 nm，流速1.0 mL/min。结果表明，巴比妥在4.567.5 g/mL的浓度范围内呈线性关系，r=0.999 7，平均回收率 96.2%；安替比林在
2、10150 g/mL 的浓度范围内呈线性关系，r=0.999 9，平均回收率100.1%；氨基比林在25375 g/mL的浓度范围内呈线性关系，r=0.999 9，平均回收率97.1%；该方法简便、准确、快速、重现性好，可用于该制剂的含量测定。关键词安痛定注射液；含量测定；HPLC中图分类号O657.72文献标识码A文章编号1007-7731（2023）03-0092-03Determination of Three Components in Antondine Injection by HPLC MethodDING Yang FENG Chaolin CHEN Xiangdan DONG
3、 Shuxiang WANG Jun*（Hubei Provincial Institute of Veterinary Drug Supervision,Wuhan Hubei 430070）AbstractA method for the determination of Barbital,Phenazone and Aminophenazone in Antondine Injection byHPLC was established.The experiment used Agilent Eclipse Plus C18column（4.6 mm250 mm,5 m）,acetonit
4、rile-phosphate buffer（pH7.8-8.0）（20 80）（the pH value was adjusted to 8.0 with phosphoric acid）as the mobile phase,thedetection wavelength was 240 nm with the flow rate of 1.0 mL/min.Results showed that linear range of Barbital was 4.5-67.5 g/mL with r of 0.999 7,average recovery was 96.2%.Linear ran
5、ge of Phenazone was10-150 g/mL with r of0.999 9,average recovery was 100.1%.Linear range of Aminophenazone was 25-375 g/mL with r of 0.999 9,averagerecovery was 97.1%.The method is simple,accurate,rapid and reproducible,and can be used for the contentdetermination of the preparation.Keywordsantondin
6、einjection;content determination;HPLC安痛定注射液是广泛应用的解热镇痛药，含巴比妥、安替比林和氨基比林3种成分。中国兽药典2015年版一部均采用高效液相色谱法及容量分析进行含量测定1，此方法操作烦琐费时，误差较大。笔者参考相关文献2-4，采用高效液相色谱法同时测定巴比妥、安替比林和氨基比林的含量，该方法具有简易、快速、高效、重复性好等特点。1材料与方法1.1仪器岛津 20AD 高效液相色谱仪；Agilent EclipsePlus C18色谱柱，4.6 mm250 mm（i.d.），粒径5 m；Mettler AE240电子天平；MILIPORE超纯水处理器
7、等。1.2试剂与材料氨基比林对照品由中国食品药品检定研究院提供，安替比林对照品由中国兽医药品监察所提供，巴比妥暂时为工作用对照品。甲醇、乙腈、磷酸盐均为色谱纯，水为超纯水，其他试剂为分析纯；原料、辅料，安痛定注射液样品（批号为 20171101、20171102、20171201）均由成都某兽药公司提供。1.3试验方法1.3.1溶液的配制。精密称取巴比妥对照品11.25mg，作者简介丁阳（1992），男，河南信阳人，从事兽药检验检测工作。*通信作者收稿日期2022-04-02-92DOI:10.16377/ki.issn1007-7731.2023.03.040安替比林对照品25 mg、氨基比
8、林对照品62.5 mg置于25 mL量瓶中，加流动相10 mL，超声使其溶解，放至室温，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取上述对照液2 mL置于50 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，作为对照品溶液。精密量取安痛定注射液供试品5 mL置于100 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取上述供试品溶液2 mL置50 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。1.3.2色谱条件。色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈 磷酸盐缓冲液（pH 7.88.0）（20 80）用磷酸调节pH至8.0，流速1.0 mL/min；检测波长240 nm；进样量20 L
9、。1.3.3线性试验。精密称取巴比妥对照品45 mg，安替比林对照品 100 mg，氨基比林对照品 250 mg置于100 mL量瓶中，加流动相40 mL，超声使其溶解，加流动相稀释至刻度，摇匀，取上述稀释液1.00、2.00、4.00、5.00、10.00、15.00 mL 置于 100 mL量瓶中，加流动相稀释成巴比妥浓度为 4.5、9.0、18.0、22.5、45.0、67.5 g/mL的标准工作液，安替比林浓度为 10、20、40、50、100、150 g/mL 的标准工作液，氨基比林浓度为 25、50、100、125、250、375g/mL 的标准工作液，各取 20 L 进样，记录色
10、谱图，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线方程。1.3.4专属性试验。在1.3.2色谱条件下，分别取供试品辅料空白溶液、对照品溶液以及供试品溶液注入液相色谱仪，考察其专属性。1.3.5回收率试验。精密量取已知含量的安痛定注射液（批号20171101）5 mL 9份，按照各主成分80%、100%、120%3个水平进行添加，分别按1.3.1项下制备方法进行处理，按1.3.2色谱条件进行测定，按外标法计算巴比妥、安替比林、氨基比林的含量，计算回收率。1.3.6精密度试验。取1.3.1项下制备的对照品溶液，按1.3.2色谱条件测定峰面积，连续进样6次，计算相对标准偏差RSD，考察精密度。1.
11、3.7稳定性试验。取1.3.1项下制备的对照品溶液，按1.3.2色谱条件测定峰面积，在不同时间0、2、4、6、8、10、12、24 h分别进行测定，计算相对标准偏差RSD，考察对照品稳定性。2结果与分析2.1线性试验以浓度为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵坐标进行线性回归（结果见图 1），得巴比妥回归方程 Y=25 261 x-10 613（r=0.999 7）；安替比林回归方程 Y=116 289 x-42 515（r=0.999 9）；氨基比林回归方程 Y=23 212 x-15 750（r=0.999 9）。可见在此色谱条件下巴比妥在 4.567.5 范围内线性良好，安替比林在10150
12、g/mL范围内线性良好，氨基比林在 25375 g/mL 范围内线性良好，结果见图13。y=25 261x-10 613r=0.999 70 500 000 1 000 000 1 500 000 2 000 000 01020304050607080浓度/(gmL-1)峰面积图1巴比妥标准曲线y=116 289x-42 5150 5 000 000 10 000 000 15 000 000 20 000 000 020406080100120140160r=0.999 9浓度/(gmL-1)峰面积图2安替比林标准曲线8 000 000 y=23 212x-15 7500 2 000 000
13、 4 000 000 6 000 000 10 000 000 0100200300400r=0.999 9浓度/(gmL-1)峰面积图3氨基比林标准曲线2.2专属性试验在1.3.2色谱条件下，色谱图中巴比妥、安替比林与氨基比林峰分离效果好，含量测定不受其他杂质峰的干扰，图谱见图46。丁阳等：HPLC法测定安痛定注射液3种组分的含量-93安徽农学通报2023年03期畜禽 水产 饲料 兽药min时间mV0.02.55.07.510.012.515.001-123456789101 检测器A 240 nm图4安痛定注射液空白溶液色谱图minmV0.02.55.07.510.012.515.0050
14、1001502002503003504004505005501 检测器A 240 nm 4.402 5.311 9.369 时间图5巴比妥、安替比林、氨基比林对照品混合溶液色谱图minmV02.55.07.510.012.515.00501001502002503003504004505005501 检测器A 240 nm 4.399 5.307 8.323 9.363 时间图6安痛定注射液样品色谱图2.3回收率试验加样回收率考察结果见表13。巴比妥平均回收率为100.5%，RSD为0.9%；安替比林平均回收率为 100.5%，RSD 为 0.9%；氨基比林平均回收率为100.5%，RSD为0
15、.9%，表明该法符合试验分析要求，准确度高。表1巴比妥的回收率试验结果（n=9）1236.2136.2136.2145.2645.2645.2634.9234.7534.3443.6143.7043.4096.4495.9794.8496.3596.5595.8996.20.6测定批次添加量/mg测得量/mg回收率/%平均回收率/%RSD/%354.3154.3154.3152.6552.3952.2496.9496.4696.19续表1巴比妥的回收率试验结果（n=9）测定批次添加量/mg测得量/mg回收率/%平均回收率/%RSD/%表2安替比林的回收率试验结果（n=9）测定批次123添加量/
16、mg81.9881.9881.98102.48102.48102.48122.98122.98122.98测得量/mg82.1081.9781.94102.00102.70103.49123.49122.34123.02回收率/%100.1599.9999.9599.53100.21100.99100.4199.48100.03平均回收率/%100.1RSD/%0.5表3氨基比林的回收率试验结果（n=9）测定批次123添加量/mg200.40200.40200.40250.50250.50250.50300.60300.60300.60测得量/mg195.12194.70194.21242.84244.71241.77291.21291.89293.69回收率/%97.3797.1696.9196.9497.6996.5196.8897.1097.70平均回收率/%97.1RSD/%0.42.4精密度试验连续进样 6 次，测得巴比妥峰面积平均值为562 696，RSD 为 0.2%，安替比林峰面积平均值为2 896 340，RSD 为 0.1%，氨基比林峰面积平均值为 5 800 11
