1、基于 UPLC-MS/MS 同时定量分析半夏不同炮制品中 8 种潜在毒性成分吕 悦1,2,3,4,张颖慧1,2,3,孙宇婷1,2,3,张 良5,张 琳1,2,3,4,祖元刚1,3(1.东北林业大学化学化工与资源利用学院森林植物生态学教育部重点实验室,黑龙江哈尔滨 150040;2.东北林业大学化学化工与资源利用学院林业生物制剂教育部工程研究中心,黑龙江哈尔滨 150040;3.东北林业大学化学化工与资源利用学院生物资源生态利用国家地方工程中心,黑龙江哈尔滨 150040;4.黑龙江省林源活性物质生态利用重点实验室,黑龙江哈尔滨 150040;5.黑龙江中医药大学附属第二医院南院,黑龙江哈尔滨
2、150060)摘要 目的建立超高效液相串联质谱(UPLC-MS/MS)法同时测定半夏生品及其炮制品中 8 种潜在毒性成分的含量,并分析其潜在毒性成分的差异。方法采用 UPLC-MS/MS 法测定半夏生品及其炮制品中 8 种潜在毒性成分的含量并进行方法学考察。流动相为甲醇-水溶液,梯度洗脱,流速为 0.3 mL/min,质谱离子源为电喷雾离子源(ESI),检测模式为多反应监测(MRM),以苦参碱(正离子)和野黄芩苷(负离子)作为内标物。采用多元统计分析方法对 8 种潜在毒性成分的含量与炮制方法的相关性进行评价。结果8 种潜在毒性成分在各自范围内线性关系良好(R20.999)。经多元统计分析,样品
3、被聚集为 4 类,并通过变量权重重要性排序(VIP)发现胆碱、盐酸麻黄碱和原儿茶酸为 4 类样品间的主要差异成分。结论该方法快速、准确、灵敏度高、重现性好,可用于半夏生品及其炮制品中 8种潜在毒性成分的含量测定,为后续分析提供参考。关键词 半夏;UPLC-MS/MS;炮制品;毒性成分;含量测定中图分类号 R283 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2023)03-0192-05doi:10.3969/j.issn.0517-6611.2023.03.044 开放科学(资源服务)标识码(OSID):Simultaneous Quantitative Analysis of 8 Pot
4、ential Toxic Components in Different Processed Products of Pinellia ternata Based on UP-LC-MS/MSL Yue1,2,3,4,ZHANG Ying-hui1,2,3,SUN Yu-ting1,2,3 et al(1.Key Laboratory of Forest Plant Ecology,Ministry of Education,School of Chemistry,Chemical Engineering and Eesource Utilization,Northeast Forestry
5、University,Harbin,Heilongjiang 150040;2.Engineering Re-search Center of Forestry Biological Agents,Ministry of Education,School of Chemistry,Chemical Engineering and Resource Utilization,Northeast Forestry University,Harbin,Heilongjiang 150040;3.National Local Engineering Center for Ecological Utili
6、zation of Biological Re-sources,School of Chemistry,Chemical Engineering and Resource Utilization,Northeast Forestry University,Harbin,Heilongjiang 150040;4.Heilongjiang Provincial Key Laboratory of Ecological Utilization of Forestry-based Active Substances,Harbin,Heilongjiang 150040)Abstract Object
7、iveTo establish an ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry(UPLC-MS/MS)method for the simultaneous determination of eight potentially toxic components in Pinellia ternata and its processed products,and to analyze the differences of their potentially toxic components.MethodThe
8、 UPLC-MS/MS method was used to determine 8 poential toxic components in different pro-cessed products of Pinellia ternata and to conduct a methodological investigation.The mobile phase was methanol-water solution,gradient elu-tion,flow rate was 0.3 mL/min,mass spectrometry ion source was electrospra
9、y ionization source(ESI),detection mode was multiple reaction monitoring(MRM),matrine(positive ion)and scutellarin(negative ion)was used as the internal standard.The multivariate statistical anal-ysis method was used to evaluate the correlation between the contents of the 8 toxic components and the
10、processing methods.ResultsThe 8 poential toxic components had a good linear relationship within their respective ranges(R20.999).After multivariate statistical analysis,the samples were clustered into 4 categories,and through variable weighted importance ranking(VIP),choline,ephedrine hydrochloride
11、and protocatechuic acid were found to be the main differences among the 4 types of samples.ConclusionThe method is rapid,accurate,sensitive and reproducible.It can be used for the determination of 8 potential toxic components in Pinellia ternata and its processed products,and pro-vide reference for
12、subsequent analysis.Key words Pinellia ternata;UPLC-MS/MS;Processed products;Toxic component;Content determination基金项目 中央高校基本科研业务费专项基金项目(2572015CA06);林业公益性行业科研专项(201504701)。作者简介 吕悦(1997),女,黑龙江哈尔滨人,硕士研究生,研究方向:药用植物资源的开发与利用。通信作者,副教授,博士,硕士生导师,从事药用植物资源的开发与利用研究。收稿日期 2022-03-13;修回日期 2022-05-05 半夏为天南星科植物半夏P
13、inellia ternata(Thunb.)Berit.的干燥块茎,具有镇咳、祛痰、止呕等作用1。有研究报道半夏是有毒的,主要表现为强烈的黏膜刺激性(胃、肠道及咽喉)和肝脏损伤。王丽2将半夏总生物碱富集物提取出来,发现可导致小鼠肝损伤。中医药研究发现通过炮制可实现中药的减毒增效3。因此半夏生品多外用,临床上以炮制品(清半夏、姜半夏和法半夏)为主。清半夏为生半夏经白矾溶液浸泡所得,毒性低,增强化痰作用;姜半夏为生半夏与生姜、白矾同煮晾干所得,毒性已减,止呕作用增强;法半夏为生半夏用甘草、石灰和白矾制后得到,燥性较为和缓,常用于消食化痰4-5。经过不同方法炮制后,半夏毒性明显降低,但其主要毒性成
14、分及含量还不是很明确。半夏中所含化学成分种类很多,其中生物碱类化合物被认为是主要有效成分之一,但部分生物碱是有毒性的6。Zhai 等7采用 UPLC/Q-TOF-MS/MS 对 16 份生半夏、制半夏进行分析,初步鉴定了溶血磷脂酰胆碱为特征标记物,溶血磷脂酰胆碱可诱导炎症反应,因此半夏中溶血磷脂酰胆碱的降低是解毒的主要原因之一。据文献报道,尿黑酸8、原儿茶酸和原儿茶醛9被认为是半夏辛辣味本质,对黏膜具有强烈刺激性。大黄酚是大黄中蒽醌类化合物,有肝脏毒性以及致癌的风险10。有研究表明,半夏经炮制后毒性会减弱,这可能与在炮制过程中半夏毒性成分的含量变化密切相关5。目前,半夏的毒性研究主要集中在毒性
15、成分的探析上,但比较炮制前后半夏毒性成分含量变化的研究报道较少。安徽农业科学,J.Anhui Agric.Sci.2023,51(3):192-196,245生物碱类成分紫外吸收较弱11,常规方法往往难以达到检测目的,因此液质联用法是生物碱类成分测定的首选。该研究通过查阅文献对半夏炮制品的化学成分进行筛选,筛选得到溶血磷脂酰胆碱、盐酸麻黄碱、葫芦巴碱、胆碱、原儿茶酸、原儿茶醛、尿黑酸和大黄酚这 8 种潜在毒性成分,采用超高效液相串联质谱(UPLC-MS/MS)同时测定半夏中 8 种潜在的毒性成分,并测定其在半夏不同炮制品中的含量,利用主成分分析(PCA)和偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)1
16、2对炮制前后半夏中毒性成分含量进行分析,探讨这些潜在毒性成分含量变化与半夏不同炮制方法之间的相关性,为半夏炮制品的毒性评价和质量控制提供科学依据。1 材料与方法1.1 仪器 1290-QQQ6460 型超高效液相色谱串联三重四极杆质谱仪(美国 Agilent 公司);UP-400S 超声波细胞破碎仪(上海熙扬仪器有限公司);ME104 电子天平(梅特勒公司);SUS 304 中药粉碎机(圣顺公司)。1.2 药材与试剂 生半夏、姜半夏、法半夏、清半夏均购自四川成都康巴高原山珍中药材基地,经国药集团黑龙江省药材公司中药师张军鉴定均为正品。溶血磷脂酰胆碱(纯度98%)、苦参碱(纯度98%,内标物)均购自成都德思特生物有限公司;盐酸麻黄碱(纯度99%)、野黄芩苷(纯度98%,内标物)均购自中国食品药品检定研究院;葫芦巴碱(纯度98%)、胆碱(纯度90%)、原儿茶酸(纯度98%)、原儿茶醛(纯度98%)、尿黑酸(纯度98%)、大黄酚(纯度98%)均购自上海源叶生物有限公司;甲醇购自 J&K Scien-tific;水为娃哈哈纯净水。1.3 试验方法1.3.1 标准品溶液制备。分别精密称取溶血磷脂
