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腐烂茎线虫检疫鉴定方法 GBT 29577-2013.pdf

上传人:sc****y 文档编号:2445659 上传时间:2023-06-23 格式:PDF 页数:16 大小:2.47MB
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资源描述

1、GB/T29577-2013的第3章所列的用具。6试剂6.1形态学鉴定用试剂参见SN/T1141一2002中的第4章所列试剂.6.2分子检测试剂WLB(500mmol/L氯化钾、10mmol/L Tris-盐酸、pH8.0、15mmol/L氯化镁、1.0mmol/LDTT,4.5%吐温20)、蛋白酶K(600mg/mL)、10PCR级冲液(-20保存)、25mmol/L氯化钙溶液(一20保存)、dNTP(10mmol/L)、Tag将(5U/L,一20保存)、6载样缓冲液、TAE或TBE电泳缓冲液、琼脂糖、溴酚蓝载样缓冲液(6TAE缓冲液,60%甘油,0.3%溴酚蓝,4保存)、溴化乙锭(EB,避

2、光保存),DNA ladder marker(一20保存)、DNA凝胶回收试剂盒(室温保存)、EcoR I酶(一20保存)、大肠杆菌DH5a感受态细胞(一70保存)、质粒提取试剂盒(室温保存)。7现场检测7.1检查对植物进行检查,注意植物地上部分是否有生长不良,叶色失绿、黄化,植株矮化等症状:块茎、鳞茎,球根等是否有干腐,变黑等症状。收集上述有为害症状的可疑植物材料及其夹带的介质或土壤,做好记录,写上标签,带回实验室检验,7.2抽样应有针对性地抽取具有可疑症状的样品,分别用塑料袋装好,加贴标识:带回实验室后,打开袋口透气,适当保温,放在2025室内待检。对于无可疑症状的样品则按要求随机抽样,具休抽样比例按照SN/T1157、SN/T1158和SN/T2122中的规定进行抽样。8实验室检验8.1线虫分离采用两种方法进行分离:浅盘分离法按照SN/T1141一2002中B.2中对对线虫分离的要求进行,改进型漏斗法参见附录B。8.2标本制作见SN/T1141一2002中的附录C。8.3显微观察、描述和测计在显微镜下,对线虫进行形态观察、描述和测计。8.4分子生物学检测对形态特征观察可疑的线虫进行双重PCR分子生物学检测则(见附录C)。

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