1、GB/T12491-905仪器5.1称量瓶。5.2分析天平：精度为0.0002g。5.3鼓风烘箱：105士2C及70士2C。5.4干燥器.5.5棕色容量瓶：5,100,1000mL。5.6移液管：1,5,10,20mL。5.7微量进样器：0.01mL。5.8梨形烧瓶：100mL。5.9烧杯：100,250mL。5.10索氏萃取器。5.11旋转蒸发器。5.12电泳仪：输出电压为300V,电泳室能容纳至少30cm长的纸条。5.13回流冷凝管。5.14微量吸液器：0.05mL。5.15有塞量筒：10mL.5.16分光光度计：分光光度计或吸收波长400-800nm的滤色光度计，吸光度读数精度为0.01
2、。5.17电泳滤纸条：6cm30cm。5.18玻璃皿。5.19玻璃砂芯漏斗：容量35mL,滤板平均滤孔40一80um。5.20刻度吸管：1mL。6试样制备6.1除去试样中所有的植物性物质和其他杂物，织物拆成纱线，将纱线剪成1cm长度，毡类则剪成小块，用滤纸包好放入索氏茶取器中，用二氯甲烷萃取1（至少循环6次），取出试样，待试样中二氯甲烷挥发后，再将试样放在温度20士2C及相对湿度(65士上2)%条件下平衡24h后称量。6.2称1.0000士0.0002g试样两份(6.1)，用以测定干燥重量。6.3称1.0000士0.0002g试样一份(6.1)，为生成水解物用以测定磺基丙氨酸含量。7操作步骤7
3、.1绝干重量测定：把试样(6,2)分别放入已知重量的称量瓶中(5.1)，放入105土2的数风烘箱中干燥2h后，盖好称量瓶盖放入干燥器(5.4)中，自然冷却0.5h后称量，重复上述操作直至恒重.算出平均千重W。7.2水解7.2.1将试样(6.3)放入100mL梨形烧瓶中(5.8)，加入20mL5.7mol/L盐酸溶液(4.2)，装上回流冷凝管。于油浴中105土2C回流4h。7.2.2如试样是由未经碳化羊毛组成，则按7.2.1操作得到的水解物直接借助旋转蒸发器浓缩。7.2.3如试样是碳化羊毛，则将水解物移入250mL烧杯中，用水清洗梨形烧瓶，清洗液也倒入烧杯中，并煮沸，在煮沸过程中，用吸管逐滴加入
4、L氯化钡溶液(4.6)，同时不新搅拌，冷却后放置过夜，用砂芯漏斗(5.19)过滤于梨形烧瓶中，然后用水清洗漏斗，清洗液也倒入烧瓶中。7.2.4将7.2.2或7.2.3烧瓶中的水解物借助旋转式蒸发器在50C水浴中浓缩，为了除去残余盐酸，每次加入10mL水，并在旋转式蒸发器上浓缩，重复三次。然后将浆状浓缩物用微量吸液器(5.14)移入GB/T12491-905mL容量瓶中，少量多次用水清洗烧瓶，将清洗液移入5mL容量瓶中，用水稀释至刻度。7.3电泳7.3.1在纸条(5.17)的中间用铅笔画一条垂直线，然后用微量进样器(5.7)移取0.01mL水解物点样在垂直线中间（需平行试样两份），再在另一张纸条
5、上点样0.01L标准磺基丙氨酸溶液，点样区域应远离纸条边缘0.5m以上，把三张纸条两端插入装有缓冲溶液(4.4)的电泳槽，使滤纸均匀地吸收缓冲溶液，也可将缓冲溶液喷洒于纸条上（五次电泳后缓冲溶液必须调换）。7.3.2纸条充分吸收缓冲溶液后，施于纸条58V/cm的电压（电泳仪电压约300V)。45h后电泳结束，然后将滤纸以阳极纸端朝上悬挂于烘箱内，在70C干燥30min。7.4显色和洗脱7.4.1烘干的纸条用茚三酮镉溶液(4.3)喷洒显色，或放入少量茚三酮镉溶液仅覆盖玻璃皿(5.18)的底部，使纸条吸收显色液，而不浸入显色液内。然后将纸条悬挂烘箱中（阳极端向上），在70C干燥30mn。磺基丙氨酸
6、晶带位置根据电泳电压和时间约在从起始位性向阳极方向移动46cm处。7.4.2面积相同地剪下水解物和标准溶液的磺基丙氨酸斑点区域，并进一步剪成小块分别放入3个有塞量筒(5.15)。7.4.3选用任一电泳纸，在磺基丙氨酸斑点区域与阳极端之间（见下图）剪下面积相同的纸条，并经同样次数剪切后，放入有塞量筒中。0010003参比值色区一1.起始战一2.碳基两氨酸色区7.4.4在4个有塞量筒中分别用移液管移入5mL甲醇，轻轻摇动，在30min内纸上红色斑点溶于甲醇中，然后过滤除去杂质，取滤液进行比色。7.5比色7.5.1采用10mm比色池，波长为50010nm.7.5.2以7.4.3纸条的洗脱液作为参比液。7.5.3测定吸光度吸光度在0.20.7范围内，如大于0.7，则将水解液稀释或减少水解试样的量，如吸光度小于0.2，则可增加水解试样量。8分析结果的计算磺基丙氨酸含量C(以重量百分比表示)计算如下：0%10Xgm100（1)式中：C一一磺基丙氨酸含量，%：m一标准溶液点样量中磺基丙氨酸的质量，g:V,一水解物稀释液体积，mL:4一一水解物的点样量，mL:B一水解物的吸光度；
