1、GB/T16294-2010前言本标准参考了IS014698-1洁净间以及相关环境控制第1部分：微生物控制、ISO/TS11133-1:2000(英文版)食品和动物饲料的微生物学培养基制备和生产指南第1部分：实验室培养基制备的质量保证通用指南。本标准代替GB/T16294一1996医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法。本标准与GB/T16294一1996的主要区别为：一增加了确定最少采样点数目的方法；一修改了原标准4.8.3.2，改为“4.10.2采用大豆格蛋白琼脂培养基(TSA)配制的培养皿经采样后，在30一35培养箱中培养，时间不少于2d:采用沙氏培养基(SDA)配制的培养皿经采样后，在2
2、025培养箱中培养，时间不少于5d。”;一本标准增加了5.8“日常监控”的内容，增加了洁净室（区）空气微生物浓度控制的纠偏限度和警戒限度的设立和如何确定取样频次的内容。本标准的附录A、附录B是规范性附录。本标准的附录C是资料性附录。本标准由国家食品药品监督管理局提出并归口。本标准起草单位：上海市食品药品包装材料测试所、中国食品药品检定研究院医疗器械检验中心。本标准主要起草人：陆维怡、徐敏凤、冯晓明、王志敏。本标准所代替标准的历次标本发布情况为：GB/T16294一1996。GB/T16294-2010d)高压蒸汽灭菌器。4.3.1培养皿一般采用p90mm15mm规格的培养皿，4.3.2培养基大
3、豆路蛋白琼脂培养基(TSA)或沙氏培养基(SDA)或用户认可并经验证了的培养基。其配制方法见附录B。4.3.3恒温培养箱必须定期对恒温培养箱进行校险。4.4测试步骤4.4.1测试前培养皿表面必须严格消毒。4.4.2将已制备好的培养皿按采样点布置图逐个放置，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养基表面基露在空气中。4.4.3静态测试时，培养茶露时间为30mi以上；动态测试时，培养皿暴露时间为不大于4h。4.4.4全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。4.4.5采用大豆酪蛋白琼脂培养基(TSA)配制的培养皿经采样后，在3035培养箱中培养，时间不少于2d;采用沙氏培养基(SDA)配制的培养
4、皿经采样后，在2025培养箱中培养，时间不少于5d。4.4.6每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作对照培养。4.5菌落计数4.5.1用肉眼对培养皿上所有的菌落直接计数、标记或在菌落计数器上点计，然后用510倍放大镜检查，有否遗漏。4.5.2若平板上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。4.6注意事项4.6.1测试用具要作灭茵处理，以确保测试的可靠性、正确性。4.6.2采取一切措施防止人为对样本的污染。4.6.3对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。4.6.4由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察不
5、要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。4.6.5采样前应仔细检查每个培养的质量，如发现变质、破损或污染的应别除。5测试规则5.1测试条件在测试之前，要对洁净室（区）相关参数进行预先测试，这类测试将会提供测试沉降菌的环境条件，例如：这种预先测试或可包括：)温度和相对湿度的测试。洁净室（区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应（无特殊要求时，温度在1826，相对湿度在45%65%为宜)，同时应满足测试仪器的使用范围：b)室内送风量或风速的测试，或压差的测试：)高效过滤器的世漏测试。5.2测试状态静态和动态两种状态均可进行测试。静态测试时，室内测试人员不得多于2人。沉降菌测试前，被测洁净室（区）由使用者决定是否需要预先消毒。2
