1、3 种子(zhng zi)健康检验,3.1 种传病害(bnghi)检验的意义3.2 种传病害检验的方法,第一页，共五十六页。,3.1 种传病害(bnghi)检验的意义,3.1.1 播种无病种子（1）检疫性病害禁止进境；（2）国内检疫性病害，调运种子时要做好检疫工作。（3）对于普通病害，寄主携带(xidi)病原体超过一定限度，不能用作种子繁殖和推广,第二页，共五十六页。,3.1 种传病害检验(jinyn)的意义,3.1.2 提高种子消毒的效果 种子所带病原物的种类、数量、潜伏部位等，处理与否，选择药剂和方法都会不一样。（1）种子表面与内部(nib)带菌；（2）种子带菌作为唯一初侵染来源；（3）种
2、子带菌，土壤或粪肥带菌，种传和土传（4）初侵染来源多，再侵染频繁的病害,第三页，共五十六页。,3.1.3 防止检疫性病原生物的传播与为害（1）一旦发现带有危险性病原生物，禁止调运和作种子；发现传进新区，销毁或防除(fngch)（2）有些病原物的不同生理小种或病毒的不同株系问题，也应进行检验,3.1 种传病害(bnghi)检验的意义,第四页，共五十六页。,3.2 种传病害检验(jinyn)的方法,3.2.1 种传病害的产地检验(jinyn)3.2.2 种传病害的室内检验,第五页，共五十六页。,3.2.1 种传病害的产地(chnd)检验,确定种子是否带病或带何种病，首先要进行田间检验（产地检验），
3、尤其是对于种子上不表现症状(zhngzhung)，室内无快速、准确、有效的检验方法。产地检验的开展：,第六页，共五十六页。,3.2.1 种传病害(bnghi)的产地检验,3.2.1.1 搞好病情调查和疫情普查（1）检测有无检疫性对象如有，目前发生种类、地区和为害面积；检疫性对象的发生规律，销毁或防除 划为疫区封锁(fn su)（2）普通病害为害的时期及受害的程度，造成的损失,第七页，共五十六页。,3.2.1 种传病害(bnghi)的产地检验,3.2.1.2 建立优质种子繁育基地（1）基地所采用的种子来源于无病区，保证不带任何(rnh)检疫对象（2）所有种子要进行消毒处理（3）产地检验存在检疫对
4、象，应撤消基地,第八页，共五十六页。,3.2.1 种传病害(bnghi)的产地检验,我国：（1）基地无检疫对象；（2）种子来自非疫区；（3）专人负责，防止(fngzh)检疫性或危险性病害传入；（4）一旦传入，就地销毁,第九页，共五十六页。,3.2.1 种传病害的产地(chnd)检验,3.2.1.3 隔离试种检验1）不易发现症状或病原体；2）国外引种；3）减少(jinsho)病害初侵染来源，保证生产上的安全，先进行隔离试种，观察发病率隔离种植区在相对封闭或严密的地区进行试种（隔虫，土壤消毒），保证植株发病只能来源于种子,第十页，共五十六页。,3.2.1 种传病害(bnghi)的产地检验,3.2.
5、1.4 实施产地田间检验（1）检疫性病害，发生流行季节，病情症状较明确阶段进行普查；（2）非检疫性病害，分期进行系统调查，查看各生育期的发病程度，了解(lioji)种子带菌情况。田间检验为无病或轻病的会不会变成重病种？,第十一页，共五十六页。,3.2 种传病害检验(jinyn)的方法,3.2.2 种传病害(bnghi)的室内检验3.2.2.1 取样3.2.2.2 室内检验方法,第十二页，共五十六页。,3.2.2.1 取样(qyng),一批种子，全部检验是不可能的；只能取其中一部分进行检验分析。如果抽取的样品不能代表(dibio)全部种子实际情况，即便检验过程精细，也不能反映该批种子正确的结果。
6、（1）取样的基本原则：样品必须具有代表性 A 确定取样点；B 样点必须全面均匀；C 各点所取样品数量应该基本一致。,第十三页，共五十六页。,3.2.2.1 取样(qyng),（2）样品的种类小样：整批的种子堆或仓库中，用扦样器或徒手从不同部位、不同样点每次取出来的小量样品原始样品：把由一批或部分(b fen)种子所扦取出来的小样全部混合起来组成。平均样品：原始样品分样器混合，再从中取出相当数量的样品。代表性强。,第十四页，共五十六页。,3.2.2.1 取样(qyng),试样：平均样品经过混合，称出一定量种子，供室内检验使用的样品 抽取小样和原始(yunsh)样品是取样工作中最重要的一环。如果数
7、量与部位抽取不恰当，会影响样品的代表性。,第十五页，共五十六页。,3.2.2.1 取样(qyng),（3）取样(qyng)的方法 划批：作物、品种、年度、来源、国家、运输工具、时间A 袋装种子取样法B 散装种子取样法,第十六页，共五十六页。,3.2.2.1 取样(qyng),A 袋装种子(zhng zi)取样法10袋以下扦取总袋数的1/211-20袋扦取6袋21-40袋扦取7袋41-60袋扦取8袋61-80袋扦取9袋81-100袋扦取10袋101袋以上每增加20袋多扦取1袋,第十七页，共五十六页。,3.2.2.1 取样(qyng),样袋分布均匀：样袋呈堆积(duj)状态，在堆桩的上、中、下各部
8、分别取样；且每袋取样时，不能局限在某一部位扦样：小粒种子用单管扦样器，大粒种子用双管扦样器,第十八页，共五十六页。,B 散装种子(zhng zi)取样法分区设点：25平方米，5点取样；相邻区域，实行取样点合并设在各区界限上按堆分层：不足2米，分上下2层；2-3米，分上、中、下3层；3米以上增加1层扦取小样：分层定点后，按上、中、下的顺序取样。,第十九页，共五十六页。,第二十页，共五十六页。,3.2.2.1 取样(qyng),（4）取样重量：40000粒（平均样品）：依据千粒重来计算最低重量实验室定量样品的扦取：如果平均样品数量(shling)还太多，可采用正方形四分法：样品倒在平板，厚度不超过
9、1cm，用正方形四分法扦取所需要的份数和数量(shling)（粒数）,第二十一页，共五十六页。,3.2.2.1 取样(qyng),（5）取样注意事项:A 取样器、分样器、容器、用具等要灭菌B 棉花、花生等种子不能用扦样器取样原因：防止(fngzh)病菌污染，保证检验结果的正确性；防止(fngzh)伤种，影响结果的准确性,第二十二页，共五十六页。,3.2.2 种传病害(bnghi)的室内检验,3.2.2.2 室内检验方法 肉眼检验；过筛检验；比重检验；解剖检验；洗涤检验；漏斗分离检验；保湿萌芽检验；分离培养检验；整胚检验；接种检验；化学染色检验；荧光反应检验；噬菌体检验；血清学检验；病毒电子显微
10、镜检验；分子杂交分析(fnx)；PCR体外扩增DNA种子健康检测的6个要求：特异性、灵敏性、快速性、简单性、成本效率性、可靠性,第二十三页，共五十六页。,3.2.2.2 室内(sh ni)检验方法,（1）肉眼检验 应用于具有明显症状的种子，或者病原物容易识别，个体(gt)较大的种传病害。混杂于种子间的虫瘿，菌瘿，菌核或菟丝子；种子表面孢子量大的（腥黑穗）；感病后有明显症状的病粒，小麦黑胚病（胚部有病变）,第二十四页，共五十六页。,3.2.2.2 室内检验(jinyn)方法,方法：从平均样品中取出一半种子作试样，放在白纸或玻璃板上，用肉眼或5-10倍的扩大镜检查，取出病原体或病粒，称其重或计其粒
11、数，计算病害感染率。注意：无症状表现的不一定是无病种子；不同病害相似症状，同一病害不同或多种症状；无法判断(pndun)有无活力或致病性。,第二十五页，共五十六页。,大豆(ddu)灰斑病,大豆(ddu)紫斑病,第二十六页，共五十六页。,小麦粒(mi l)线虫病,第二十七页，共五十六页。,3.2.2.2 室内检验(jinyn)方法,（2）过筛检验 适用于较大病原体，其形状、大小与种子不同。如菌瘿、病核、虫瘿及赤霉病粒等。方法：从平均样品中取出一半种子作试样，用规定孔径的筛子过筛，不同作物种子所用筛孔不同，最后计算(j sun)病害感染率。一般采用圆孔筛。每千克样品的检验对象含量=（检验对象数量/
12、试样重量）1000,第二十八页，共五十六页。,3.2.2.2 室内(sh ni)检验方法,（3）比重检验 病原体与种子大小相仿，但比重存在差异，如菌核、菌瘿、虫瘿(chngyng)小麦粒线虫的虫瘿，用20%盐水进行悬浮。,第二十九页，共五十六页。,3.2.2.2 室内(sh ni)检验方法,（4）解剖检验 适用于表面(biomin)无明显症状，诊断比较困难的种子，可以了解病菌的潜伏场所。方法：切片、染色、观察马铃薯环腐病，切开，用手挤压，维管束部分有菌脓溢出，制片高倍镜下观察。小麦线虫病的虫瘿和腥黑穗病的菌瘿（黑粉，冬孢子，腥味）,第三十页，共五十六页。,3.2.2.2 室内检验(jinyn)
13、方法,（5）洗涤检验适用(shyng)于种子表面带病而肉眼看不见的种子病害。方法：取样，洗涤，振荡，离心，悬浮，记载病原体种类及每视野的孢子数，并计算每粒种子孢子负荷量。,第三十一页，共五十六页。,3.2.2.2 室内(sh ni)检验方法,（6）漏斗分离检验此法专门用于种子(zhng zi)携带线虫的检验。具体方法（贝尔曼漏斗法）：将样品放在漏斗内的过滤纸上，在漏斗的排水口处套一像皮管，其上装有螺旋节流夹，将种子用恒温细喷雾24小时，多余的水会自种子与漏斗的边缘流掉，这样线虫通过滤纸下沉到螺旋夹以上的橡皮管内，然后打开螺旋节流夹搜集下沿液，便可检验出线虫并计算出含量。,第三十二页，共五十六页
14、。,第三十三页，共五十六页。,3.2.2.2 室内检验(jinyn)方法,（7）保湿萌芽检验 适用于种子携带病菌在种子萌芽阶段开始为害，萌发期或幼苗早期表现症状，或种子未萌芽，种表长出病菌的种传病害。可以检测种子的带菌情况，发芽(f y)情况，种内感染情况。,第三十四页，共五十六页。,3.2.2.2 室内检验(jinyn)方法,A 保湿培养(piyng)检验（吸水纸，冷冻吸水纸，琼脂平皿法）吸水纸法：吸水纸吸足无菌水，放入培养皿，种子排放在吸水纸上，放入20-28培养，12小时光照/黑暗，有时加入0.1-0.2%的2，4-D溶液代替水冷冻吸水纸法：103天，202天，-20冷冻过夜，然后20，
15、12小时光照/黑暗，形成孢子，避免伸长琼脂平皿法：1.5-1.7%的琼脂液，制成平板，将种子放入,第三十五页，共五十六页。,3.2.2.2 室内检验(jinyn)方法,B 砂内萌芽检验法 河砂（1mm筛孔）及容器灭菌（干热灭菌），注入冷开水至砂量的60%左右（17%含水量），低容器边缘4厘米，排列种子，加砂覆盖2-3厘米，25培养，幼芽连根拔出。检测幼苗和未发芽种子症状以及种苗上有无(yu w)孢子。C 土内萌芽检验法D 试管幼苗症状测定法,第三十六页，共五十六页。,3.2.2.2 室内(sh ni)检验方法,（8）分离培养(piyng)检验适用于种子内部，不易发现和鉴定的病原菌，或种子虽有病
16、斑，但无病征或种表携带的种传病害。专性寄生物（病毒，白粉，锈菌等）除外 A 分离潜伏于种表或深层的病菌；B 确定病菌的潜伏部位；C 了解种子外部携带的菌群；D 了解种子感染和萌发的总体情况；E 分离无性繁殖材料所携带的病菌,第三十七页，共五十六页。,第三十八页，共五十六页。,细菌的分离培养培养基：肉汁胨培养基（牛肉浸膏3g，蛋白胨5-10g，琼脂17-20g，水1000ml）划线分离法：种表消毒磨碎，无菌水将细菌溢出(y ch)，接种环蘸取划线。将单个细菌分开，经培养后形成单菌落，获得纯菌株。平板稀释法：病原细菌数量大，稀释培养使病原细菌与杂菌分开，形成纯培养。培养皿4个，1ml无菌水，接种环搅匀，依次移入2、3、4皿，倒培养基（45）。,第三十九页，共五十六页。,第四十页，共五十六页。,3.2.2.2 室内检验(jinyn)方法,（9）接种检验 有时在植物发病部位发现(fxin)或混杂在进境种子里的真菌，并不是引起该种病害的病原真菌，可能是由其他杂菌污染所造成的。,第四十一页，共五十六页。,3.2.2.2 室内检验(jinyn)方法,拌种接种(jizhng)：种子和孢子拌匀浸种接种：
