1、临床免疫学检验(jinyn)技术,第一页，共四十三页。,第十五章免疫细胞标志和功能(gngnng)检测技术,刘 辉,第二页，共四十三页。,目 录,第一节 免疫细胞的分离 第二节 淋巴细胞标志及亚群分类 第三节 抗原(kngyun)提呈细胞的表面标志 第四节 淋巴细胞的功能检测 第五节 其它免疫细胞功能检测技术 第六节 免疫细胞表面标志和功能检测的临床应用,第三页，共四十三页。,第一节 免疫(miny)细胞的分离,第四页，共四十三页。,重点(zhngdin)提示,外周血单个核细胞(xbo)分离淋巴细胞的分离T、B细胞和T细胞亚群的分离,第五页，共四十三页。,细胞(xbo)分选和基本原理,细胞分选
2、和基本原理不同(b tn)细胞密度不同不同细胞表面生物学特性不同不同细胞表面分化抗原不同,第六页，共四十三页。,不同细胞(xbo)密度不同,人的红细胞密度(md)为1.093 粒细胞密度为1.092 单个核细胞（淋巴细胞和单核细胞）的密度为1.076-1.090,第七页，共四十三页。,用1.0770.001的分层液可将细胞(xbo)分离,第八页，共四十三页。,密度梯度离心(lxn)(Ficoll)离心,第九页，共四十三页。,细胞(xbo)表面分化抗原（CD抗原）,适用于T、B细胞(xbo)的分离已知CD抗原细胞亚群的分离未知CD抗原细胞亚群的分离（阴性分选）,第十页，共四十三页。,不同细胞(x
3、bo)谱系，不同细胞(xbo)分化阶段，细胞(xbo)表面CD抗原不同,第十一页，共四十三页。,第十二页，共四十三页。,磁珠大小(dxio)可以选择,第十三页，共四十三页。,第十四页，共四十三页。,第十五页，共四十三页。,免疫磁珠法细胞(xbo)分选过程,第十六页，共四十三页。,荧光激活(j hu)细胞分离仪分离法,第十七页，共四十三页。,第二节 淋巴细胞标志(biozh)及亚群分类,第十八页，共四十三页。,一、细胞表面(biomin)标志及亚群,CD3+CD4+CD8-辅助性细胞(xbo)（help T cell,Th）CD3+CD4-CD8+细胞毒性细胞（cytotoxic T cell,
4、Tc or CTL）CD4+CD25+Foxp3+调节性细胞（regulatory T cell,Tr or Treg）,第十九页，共四十三页。,二、B细胞(xbo)表面标志,CD19、CD20、CD21、CD22和CD23等。以CD5为标志结合CD19或CD20可将B细胞(xbo)分为B1（CD19+CD5+）和B2(CD19+CD5-)两个亚群。,第二十页，共四十三页。,三、NK细胞(xbo)表面标志,NK细胞表面至少存在CD2、CD16、CD56、CD69、CD94、CD96、CD158a、CD159a、CD161和CD244等多种抗原。目前多以CD3-、CD16+、CD56+作为(zu
5、wi)NK细胞的典型标志。,第二十一页，共四十三页。,第三节 抗原(kngyun)提呈细胞的表面标志,第二十二页，共四十三页。,抗原(kngyun)提呈细胞的表面标志,单核-吞噬细胞的典型(dinxng)的表面标志是CD14。人成熟DC的主要特征表面标志为CD1a、CD11c和CD83，但不表达单核-吞噬细胞、T细胞、B细胞和NK细胞的典型的表面标志。,第二十三页，共四十三页。,第四节 淋巴细胞的功能(gngnng)检测,第二十四页，共四十三页。,原理(yunl)：,淋巴细胞,DNA合成(hchng),分化(fnhu),母细胞,刺激物,细胞变大,细胞浆扩大,核染色质疏松,核仁明显,T淋巴细胞增
6、殖试验,第二十五页，共四十三页。,2.淋巴细胞转化(zhunhu)的刺激物,非特异性刺激物：PHA-T细胞ConA-T细胞PWM-T、B细胞LPS-B细胞特异性刺激物：异种(y zhn)抗原同种组织抗原,第二十六页，共四十三页。,第二十七页，共四十三页。,体内(t ni)试验,特异性抗原(kngyun)皮肤试验PHA皮肤试验,第二十八页，共四十三页。,第五节 其它免疫(miny)细胞功能检测技术,第二十九页，共四十三页。,吞噬细胞(tn sh x bo)功能,趋化 吞噬(tnsh)胞内杀灭作用,第三十页，共四十三页。,一、趋化功能(gngnng)检测,第三十一页，共四十三页。,滤膜渗透法（Bo
7、yden 小室法）,第三十二页，共四十三页。,二、白细胞吞噬(tnsh)功能的检测,第三十三页，共四十三页。,白细胞菌液,37培养(piyng),定时(dn sh)取定量菌液培养,计算(j sun)菌落数,三、杀菌能力的检测,第三十四页，共四十三页。,中性粒细胞杀菌(sh jn)耗能 代谢 生成H+,四氮唑蓝(淡黄色),甲簪(蓝黑色),原理(yunl),操作(cozu),四、氮唑蓝(NBT)还原试验,抗凝血+NBT应用液 温育 推片 瑞士复染,第三十五页，共四十三页。,五、巨噬细胞功能(gngnng)检测,(一)炭粒廓清试验正常小鼠肝中枯否细胞可吞噬清除(qngch)90%炭粒，脾巨噬细胞约吞
8、噬清除10%炭粒。据此给小鼠定量静脉注射印度墨汁(炭粒悬液)，间隔一定时间反复取静脉血，测定血中炭粒的浓度，根据血流中炭粒被廓清的速度，判断巨噬细胞的功能。(二)吞噬功能检测巨噬细胞对颗粒性抗原物质具有很强的吞噬功能，常用鸡红细胞(CRBC)、白色念珠菌、酵母细胞等作为吞噬颗粒，用斑蟊敷贴法收集人巨噬细胞或从腹腔渗出液获得鼠巨噬细胞。,第三十六页，共四十三页。,第六节 免疫细胞功能检测的临床(ln chun)应用,第三十七页，共四十三页。,反映机体免疫功能状态。肿瘤、免疫缺陷病等疾病(jbng)的诊断和疾病(jbng)预后监测。组织器官移植后对受者的细胞免疫学功能监测则有利于排斥反应的早期发现
9、，以便及时采取有效措施。,第三十八页，共四十三页。,本章(bn zhn)小结,淋巴细胞并不是功能单一的群体，但其在光学显微镜下的形态基本是一样(yyng)的，因此要对其进行进一步的分类和观察就不能采用形态学的方法，而要依靠对其表面标志的检测。利用细胞表面标志可以实现对各类细胞的计数。,第三十九页，共四十三页。,免疫细胞功能试验包括体内和体外试验。免疫细胞功能体外试验主要根据(gnj)免疫细胞的增殖活性、分泌活性和杀伤活性等特性而进行实验设计。,本章(bn zhn)小结,第四十页，共四十三页。,本章(bn zhn)小结,吞噬细胞(tn sh x bo)功能检测，方法有趋化功能检测、吞噬和杀菌功能
10、测定等。了解方法学基本原理，可举一反三，根据需要选择或设计相应试验。,第四十一页，共四十三页。,Thank you!,第四十二页，共四十三页。,内容(nirng)总结,临床免疫学检验技术。T、B细胞和T细胞亚群的分离。第二节 淋巴细胞标志及亚群分类。以CD5为标志结合CD19或CD20可将B细胞分为B1（CD19+CD5+）和B2(CD19+CD5-)两个(lin)亚群。正常小鼠肝中枯否细胞可吞噬清除90%炭粒，脾巨噬细胞约吞噬清除10%炭粒。组织器官移植后对受者的细胞免疫学功能监测则有利于排斥反应的早期发现，以便及时采取有效措施。本章小结。利用细胞表面标志可以实现对各类细胞的计数,第四十三页，共四十三页。,
