1、ICS65.020B61LY中华人民共和国林业行业标准LY/T1772一2008杨树品种分子鉴定实验方法DNA扩增片段长度多态性法(AFLP)Molecular identification method for varieties of poplar-Amplified fragment length polymorphism(AFLP)2008-09-03发布2008-12-01实施国家林业局发布LY/T1772-20084.6 1 mol/L Tris-HCI(pH8.0)称取121.1g三羟甲基氮基甲烷(Tis)溶解于800mL水中，用浓盐酸调pH(25C下)至8.0，用水定容至1L,
2、100mL分装，高压灭菌，室温保存。4.7500mo/L EDTA(乙二胺四乙酸)溶液(pH8.0)将186.1g乙二胺四乙酸二钠(Na:EDTA2H,O)溶于800mL水中，在磁力搅拌器上剧烈搅动，先用氢氧化钠(NaOH)颗粒（约20g)调pH接近8.0，再用10mol/L NaOH溶液调pH至8.0，用水定容至1L,分装后高压灭菌，室温保存。4.80.5mg/mL溴化乙锭(EB)溶液称取100mgEB,用200mL水溶解，用铝箔或黑纸包裹容器，室温储存，工作浓度为0.5mg/L,每毫升电泳缓冲液中加1LEB。4.910mol/L氢氧化钠(NaOH)溶液称取80 g NaOH,先用160mL
3、水溶解后，再加水定容至200mL,高压灭菌，室温保存。4.105mol/L氣化钠(NaC)溶液溶解29.2gNaC于足量的水中，定容至100mL,高压灭菌，室温保存。4.11CTAB提取缓冲液CTAB提取缓冲液的成分为2%（质量浓度）溴代十六烷基三甲胶(CTAB)、100mmol/L Tris-HCI,20mmol/L EDTA(pH8.0)、1.4mol/L NaCl、.0.5%(质量浓度)聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)和0.2%(质量浓度)P巯基乙醇（用前加人）。在800mL去离子水中，加入46.75gNaC1、2 g CTAB、0.5gPVP,搅动溶解后，加入10mL1mmol/L Tris
4、-HCI(pH8.0)、500mmol/L EDTA(pH8.0)4mL、36mL水和2mLB疏基乙醇（用前加入）。4.123mol/L乙酸钠(NaAe3H20)(pH5.2)取40.8 g NaAc3H2O溶于约90mL水中，用冰乙酸(CH3COOH)周溶液的pH至5,2，再加水定容到100mL,高压灭菌后室温保存。4.135mol/L乙酸钾(KAc)取49.1gKAc溶解于足量的水中，加水定容到100mL,室温保存。4.1424：1(体积比)三氯甲烷-异戊醇将96mL三氣甲烷和4mL异戊醇混匀后，室温保存。4.1570%(体积分数)乙醇70mL无水乙醇加入30mL水，室温保存。4.16TE
5、缓冲液(pH8.0)取1mmol/L Tris-HC1(pH8.0)1mL,500mmol/L EDTA(pH8.0)0.2mL,用水定容至100mL,高压灭菌，室温保存。4.1710mg/mL胰RNA酶(RNase A)称取1 mng RNase A,溶于100LTE缓冲液中，水浴(100C)10min,级慢冷却至室温，10L分装，一20C保存。4.18TAE电泳级冲液(50)称取242 g Tris碱，加人57.1mL的冰乙酸(17.4mol/L)、200mL的500mmol/L EDTA溶液(pH8.0),用水定容至1L,100mL分装，高压灭菌，4C保存。4.19TBE电泳缓冲液(10)称取108 g Tris碱和55g硼酸，溶于适量水中，加人40mL500mmol/L EDTA溶液(pH8.0),用水定容至1L,100mL分装，高压灭菌，4C保存。4.200.8%琼脂糖凝胶的配制称取0.8g电泳级琼脂糖置于200mL三角瓶中，加人100mL1TAE(或TBE)电泳缓冲液中，在2
