1、LY/T2620-2016西南桦无性系组培育苗技术规程1范围本标准规定了西南桦无性系组培育苗的外植休采集与处理、培养基配制、组培苗增殖与生根培养、组培苗移栽、苗木管理与出圃等技术要求。本标准适用于西南桦无性系“青山1号”“青山2号”“青山3号”“青山4号”和“青山5号”组培快繁。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6001育苗技术规程LY/T1000容器育苗技术LY/T1882林木组织培养育苗技术规程LY/T1948西南桦用材林培育技术规程3术语和定义
2、LY/T1882界定的术语和定义适用于本文件。4培养基配制4.1培养基成分外植体诱导培养基、增殖培养基与生根培养基见附录A。4.2母液配制按照LY/T1882执行。4.3培养基配制4.3.1根据培养基配方与培养基配制量，按比例吸取母液配制培养基溶液，每加一种母液须搅拌均匀后再加入第二种母液，并加入定量的凝固剂与蔗糖，加水定容后充分搅拌溶解。4.3.2将配制好的培养基溶液用不锈钢情锅加热至沸腾，使培养基完全溶解，然后用1.0o/L盐酸或1.0mol/L氢氧化钠调整pH至5.8。4.3.3培养基加热溶解后定量分装到高度为10m15cm的透光玻璃培养瓶内，进行密封。4.4培养基消毒4.4.1将分装好
3、的培养基放入灭菌锅内消毒。消毒过程严格按灭菌锅的使用技术规程操作，灭菌气压采用0.11MPa,温度采用121，消毒时间25min一30min。LY/T2620-20164.4.2培养基消毒完成后应等到温度冷却至常温后才能取出，放置在空气平稳的室内保存。4.5培养基保存培养基尽量现配现用。需要保存时，应放置在无尘、避光的室内进行常温保存，保存时间不超过30d。5准备工作5.1超净工作台准备接种使用超净工作台，工作前应用75%的酒情将工作台擦拭一遍，然后启动工作台并开启紫外灯消毒30min。关闭紫外灯15min后才能进行接种工作。5.2工具灭南用于接种的器皿光用消毒锅消毒，接种工具剪刀、摄子、医用
4、手术刀片用置于超净台上的酒精灯、电热消毒器消毒。将消毒干净的接种工具搁置在无菌的接种器皿上，待冷却至常温方可使用。5.3环境灭菌定期清洁超净工作台的初级过滤器。定期打扫、清理接种间，并定期开启紫外灯进行消毒。6外植体采集、处理6.1外植体采集采集优树无性系嫁接苗萌发的嫩芽作为外植休，或采集优树基干部位萌发的橄芽作外植休。作为外植体的嫩芽应为生长健壮，无病虫害，半木质化。采集外植体的天气选择晴天。6.2外植体处理6.2.1外植体消毒前，用洗洁精洗净，然后用蒸馏水冲洗5min8min。6.2.2在超净工作台中，用0.1%的氯化汞加3滴5滴吐温一20的消毒液消毒3min4min,然后用无菌水冲洗4次
5、6次，每次3min4min。7外植体接种将消毒后的外植体切成长2m左右，含有1个2个腋芽的枝段，接种在外植体的诱导培养基上。外植体接种后进行暗培养5d7d,转入光培养。培养室内的温度控制在2328，光照强度为15001x30001x,光照时间8h/d12h/d,培养时间40d60d。8增殖培养8.1接种8.1.1外植休经诱导萌发出嫩芽后，用剪刀剪取嫩芽接种到增殖培养基进行增殖培养，当培养材料萌发出丛生芽后，用剪刀或刀片分高成单个小芽植入增殖培养基进行继代培养，继代培养周期40d60d.2LY/T2620-20168.12接种器皿与培养器皿中放置的培养材料多少要适中，培养材料插人培养基深度以不倒
6、伏为宜，分布均匀。8.13每瓶培养材料接种完成后应将接种工具消毒1次。接种完成后，应在培养器皿上做好相关的标记工作。8.1.4从外植体诱导分化开始，继代培养不超过40代，保持遗传相对稳定性。8.2培养条件培养室内的温度控制在2328，光照强度为15001x30001x,光照时间8h/d12h/d。9生根培养选择2cm3cm的茎芽接种在生根培养基中进行生根培养，生根苗只保留1个苗芽，多余的苗芽应切除。生根培养的温度、光照强度和光照时间同8.2，生根培养时间40d一50d。10炼苗当苗高生长至3cm4cm、不定根长1cm2cm后可进行炼苗。炼苗温度控制在2030，晴天盖上一层70%遮光率的遮阴网，
7、炼苗10d一12d后，打开培养器皿盖炼苗2d一3d。11苗木移栽与管理11.1基质育苗基质采用沤制松树皮与炭化锯末按1：3比例配制，或采用黄心土与火烧土按9：1比例配制，均添加0.3%磷肥或复合肥。11.2容器容器规格为直径5.0cm6.0cm,高度10.0cm12.0cm,无纺布与薄膜均可。移栽前基质用0.3%高锰酸钾喷洒消毒不少于24h。11.3移栽11.3.1当苗高生长至4.0cm5.0cm,不少于2条根时，可进行移栽。移栽时小心将苗从瓶中取出洗净基部培养基。移栽动作要轻，避免损伤根茎。11.3.2移栽在林地简易苗爾、专用苗雨或温室进行，对苗爾的要求参见GB/T6001和LY/T1000。11.3.3移苗时间在3月至4月、9月至11月进行，避开5月至8月的高温季节。在露天苗圃移栽，应选择风小，光照弱的天气进行。11.4管理11.4.1移栽后用遮光70%的遮阴网覆盖遮阴，采用喷雾方式保湿，白天10min15min喷1次，晚上30min40min喷1次，每次喷雾3s5s,保持相对湿度80%90%。露天苗圃雨天不用淋水。11.4.2苗木度过缓苗期长出新叶后，每隔10d15d定期喷施或淋施1次0.05%0.1%的尿素或复合肥溶液。11.4.3病虫害防治遵照GB/T6001的要求执行。11.4.4出周前1个月进行移袋、斯根、控水、增强光照等措施处理，提高苗木抗性。
