1、 ICS 点击此处添加 ICS 号 点击此处添加中国标准文献分类号 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 GB GB 23200.562016 代替SN/T 23192009 食品安全国家标准 食品中喹氧灵残留量的检测方法 National food safety standards Determination of quinoxyfen residue in foods 2016-12-18 发布 2017-06-18 实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 中华人民共和国农业部 发布 国家食品药品监督管理总局 GB 23200.562016 I 前前 言言 本标准代替SN/T
2、2319-2009 进出口食品中喹氧灵残留量的检测方法。本标准与SN/T 2319-2012相比，主要变化如下：标准文本格式修改为食品安全国家标准文本格式；标准名称中“进出口食品”改为“食品”；标准范围中增加“其它食品可参照执行”。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：SN/T 2319-2009。GB 23200.562016 1 食品安全国家标准食品安全国家标准 食品中喹氧灵残留量的食品中喹氧灵残留量的检测方法检测方法 1 1 范围范围 本标准规定了进出口食品中喹氧灵残留量的液相色谱与液相色谱-质谱/质谱的检测方法。本标准适用于大豆、花椰菜、樱桃、木耳、葡萄酒、茶叶、蜂蜜、猪肝、鸡肉、鳗鱼
3、中喹氧灵残留量的测定和确证，其它食品可参照执行。2 2 规范性引用文件规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 2763 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 3 原理原理 试样中残留的喹氧灵采用乙酸乙酯振荡或饱和碳酸氢钠溶液-乙酸乙酯提取，NH2固相萃取小柱净化或凝胶渗透色谱结合NH2固相萃取小柱净化，液相色谱仪或液相色谱-质谱/质谱仪检测及确证，外标法定量。4 4 试剂和材料试剂和材料 除另有规定
4、外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682中规定的一级水。4.14.1 试剂试剂 4.1.1 正己烷（C6H10）：色谱纯。4.1.2 乙酸乙酯（C4H8O2)：色谱纯。4.1.3 乙腈（CH3CN）：色谱纯。4.1.4 甲醇（CH3OH）：色谱纯。4.1.5 环已烷（C6H12）：色谱纯。4.1.6 丙酮（C3H6O）：色谱纯。4.1.7 碳酸氢钠（NaHCO3）。4.1.8 无水硫酸钠(Na2SO4)：使用前于 650干燥 4 h，密封保存。4.2 4.2 溶液配制溶液配制 4.2.1 环已烷-乙酸乙酯溶液(1+1，V/V)：分别量取 50 mL 环已烷与乙酸乙酯，混匀。4.2.2
5、 5%丙酮-正己烷溶液：移取 5 mL 丙酮于 95 mL 正己烷中，混匀。4.2.3 50%乙腈-水溶液：分别量取 50 mL 乙腈与 50 mL 水，混匀。4.2.4 饱和碳酸氢钠溶液：称取一定量碳酸氢钠溶于水溶液中至饱和。4.4.3 3 标准品标准品 4.3.1 喹氧灵标准物质(英文名 Quinoxyfen，分子式 C15H8Cl2FNO，CAS No.124495-18-7，分子量308.14）:纯度98%。4.4 4.4 标准溶液配制标准溶液配制 4.4.1 喹氧灵标准贮备液（100 mg/L）：准确称取 0.0100 g 喹氧灵标准物质，用甲醇溶解并定容至100 mL，该标准储备液
6、于 4 可保存三个月。4.4.2 喹氧灵标准工作液：根据需要取适量标准贮备液，以 50%乙腈水溶液稀释成适当浓度的标准工作液。标准储备液于 4 可保存一个月。4.54.5 材料材料 4.5.1 氨基（NH2）固相萃取柱：500 mg，3 mL。4.5.2 滤膜：0.45 m，0.22 m，有机系。5 5 仪器和设备仪器和设备 GB 23200.562016 2 5.1 液相色谱仪，配紫外或二极管阵列检测器。5.2 液相色谱-质谱/质谱联用仪，配电喷雾（ESI）源。5.3 分析天平：感量 0.01 g 和 0.0001 g。5.4 凝胶渗透色谱。5.5 离心机：4 500 r/min，配有 10
7、0 mL 的具塞塑料离心管。5.6 粉碎机。5.7 组织捣碎机。5.8 涡旋混合器。5.9 超声波清洗器。5.10 固相萃取装置。5.11 氮吹仪。6 6 试样制备与保存试样制备与保存 6.1 6.1 试样制备试样制备 6.1.1 6.1.1 水果蔬菜类水果蔬菜类 取有代表性样品 500 g，将其切碎后（不可水洗），用组织捣碎机将样品加工成浆状，混匀，分成2 份，装入洁净容器内，密封并标识。6.1.2 6.1.2 茶叶、粮谷与坚果类茶叶、粮谷与坚果类 取有代表性样品 500 g，用粉碎机粉碎并通过 2.0 mm 圆孔筛，混匀，分成 2 份，装入洁净容器内，密封并标识。6.1.3 6.1.3 肉
8、及肉制品肉及肉制品 取有代表性样品 500 g，切碎后用组织捣碎机将样品加工成浆状，混匀，装入洁净容器内，分成 2份，密封并标识。6.1.4 6.1.4 蜂蜜蜂蜜 取有代表性样品 500 g，对于无结晶的蜂蜜样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过 60 的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温，分成 2 份，装入洁净样品瓶中，密封并标识。6.1.5 6.1.5 果汁、果酒等果汁、果酒等 将取得的全部原始样品倒入洁净的混样桶中，充分搅拌混匀，再将混匀样品分装两份，每份约 500 mL，密封并标识。在制样过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。注：以
9、上样品取样部位按GB 2763附录A执行。6.2 6.2 试样保存试样保存 茶叶、果酒、蜂蜜、牛奶、粮谷于 0 4 保存，蔬菜、水果、肉及肉制品于-18 保存。7 7 分析步骤分析步骤 7.1 7.1 提取提取 7.1.1 7.1.1 茶叶、谷物及坚果等样品茶叶、谷物及坚果等样品 称取 5 g（精确至 0.01 g）试样，置于 100 mL 具塞塑料离心管中，加入 15 mL 饱和碳酸氢钠溶液振摇浸泡 10 min，加入 20 mL 乙酸乙酯，涡动 30 s 后超声提取 20 min，4 500 r/min 离心 3 min，移出有机相，残渣再加入 20 mL 乙酸乙酯重复提取 1 次，合并提
10、取液，经无水硫酸钠干燥后于 50 旋转蒸发至近干，加入 5 mL 正已烷，涡动 30 s 溶解残渣，按 7.2.2 步骤净化。7.1.2 7.1.2 蔬菜与水果样品蔬菜与水果样品 称取 10 g（精确至 0.01 g）试样，置于 100 mL 具塞塑料离心管中，加入 30 mL 乙酸乙酯，振摇均匀后超声提取 20 min，4 500 r/min 离心 3 min，移出有机相，残渣再加入 20 mL 乙酸乙酯重复提取 1次，合并提取液，经无水硫酸钠干燥后于 50 旋转蒸发至近干，加入 5 mL 正已烷，涡动 30 s 溶解残渣，按 7.2.2 步骤净化。7.1.3 7.1.3 果汁、蜂蜜、葡萄酒
11、等果汁、蜂蜜、葡萄酒等 称取 10 g（精确至 0.01 g）试样置于 250 mL 具塞三角瓶中，加入 10 mL 饱和碳酸氢钠溶液、30 mL乙酸乙酯，振摇均匀后超声提取 20 min，4 500 r/min 离心 5 min，移出有机相，残渣再加入 20 mL 乙GB 23200.562016 3 酸乙酯重复提取 1 次，合并提取液，经无水硫酸钠干燥后于 50 旋转蒸发至近干，加入 5 mL 正已烷，涡动 30 s 溶解残渣，按 7.2.2 步骤净化。7.1.4 7.1.4 肉及肉制品肉及肉制品 称取 10 g（精确至 0.01 g）试样置于 100 mL 具塞塑料离心管中，加入 10
12、mL 饱和碳酸氢钠溶液、30 mL 乙酸乙酯，以均质器于 10 000 r/min 均质提取 30 s，4 500 r/min 离心 5 min，移出有机相，残渣再加入 20 mL 乙酸乙酯重复提取 1 次，合并提取液，经无水硫酸钠干燥后于 50 旋转蒸发至近干，加入 10 mL 环已烷-乙酸乙酯，涡动 30 s 溶解残渣，于 4 500 r/min 离心 5 min，按 7.2.1 与 7.2.2 步骤顺序净化。7.2 7.2 净化净化 7.2.1 7.2.1 凝胶渗透色谱凝胶渗透色谱 对于 7.1.4 所得的提取液，取 5 mL 通过样品环注入凝胶色谱柱，按以下条件操作：a)净化柱：Bio
13、-Beads S-X3 填料，25（i.d.）200 mm（i.d.）；b)流动相：环已烷-乙酸乙酯（1+1，/）；c)流速：4.2 mL/min；收集 9.5 21.5 min 的流出液，50 旋转蒸发至近干，加入 5 mL 正已烷，待固相萃取小柱净化。注：若 5.00 g 样品中所含的脂肪量大于 0.5 g，则应调整样品提取液体积，使得注入凝胶色谱的 5 mL 样液中所含的脂肪量不大于 0.5 g。7.2.2 7.2.2 固相萃取小柱净化固相萃取小柱净化 使用前以 3 mL 甲醇、3 mL 正已烷预淋洗小柱，将样品提取液上柱，用 5 mL 正己烷淋洗，弃去全部淋洗液，以 5 mL 5%丙酮
14、-正已烷洗脱，保持流速约为 1 mL/min，收集洗脱液，于 50 氮吹至近干，以 50%乙腈-水溶液定容 1 mL，过 0.45 m 滤膜，供高效液相色谱测定；或以 50%乙腈水溶液定容 5 mL，过 0.22 m 滤膜，供液相色谱-质谱/质谱测定。7.3 7.3 液相色谱测定液相色谱测定 7.3.1 7.3.1 液相色谱参考条件液相色谱参考条件 a）色谱柱：Waters Symmetry C18 柱，4.6 250 mm（i.d.），5 m，或相当者；b）流动相：乙腈-水（75+25，/）；c）流速：1.0 mL/min；d）检测波长：235 nm；e）进样量：40 L；7.3.2 7.3
15、.2 液相色谱测定液相色谱测定 以喹氧灵标准工作液进样，以峰面积为纵坐标，工作溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量。标准工作液和待测样液中喹氧灵的响应值均应在仪器线性响应范围内。按 8 项下规定进行结果计算。在本方法条件下，喹氧灵的保留时间约为 8.0 min。标准品色谱图参见附录 A中图 A.1。7.4 7.4 液相色谱液相色谱-质谱质谱/质谱法测定质谱法测定 7.4.1 7.4.1 液相色谱液相色谱-质谱质谱/质谱参考条件质谱参考条件 a）色谱柱：Acquity UPLC BEH C18柱，2.1 55 mm（i.d.），1.7m，或相当者；b）柱温：30；c）流
16、动相：乙腈-水（70+30，/）；d）流速：300 L/min；e）进样量：10 L。7.4.2 7.4.2 质谱参考条件质谱参考条件 a）离子源：电喷雾源（ESI），正离子模式；b）扫描方式：多反应监测（MRM）；其它参考质谱条件见附录 B 中表 B.1。7.4.3 7.4.3 液相色谱液相色谱-质谱质谱/质谱测定质谱测定 根据试样中被测物的含量情况，选取响应值适宜的标准工作液进行色谱分析。标准工作液和待测样液中喹氧灵的响应值均应在仪器线性响应范围内。按 8 项下规定进行结果计算。在本方法条件下，喹氧灵的保留时间约为 1.5 min，在锥孔电压为 30 V 时，标准品的二级质谱图与多反应监测（MRM）色谱图分别见附录 C 中图 C.1 与图 C.2。GB 23200.562016 4 7.4 7.4 定性测定定性测定 进行样品测定时，如果检出的的色谱峰保留时间与标准样品一致，并且在扣除背景后的样品谱图中，各定性离子的相对丰度与浓度接近的同样条件下得到的标准溶液谱图相比，最大允许相对偏差不超过表1 中规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。表表 1 1 定性确证时相对离子丰度的最大
