1、器4中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准G B/T 1 4 9 2 6.4 2-2 0 0 1实验动物细菌学检测标本采集L a b o r a t o r y a n i m a l-B a c t e r i o l o g i c a l m o n i t o r i n g-C o l l e c t i o n o f s p e c i me n s2 0 0 1-0 8-2 9发布2 0 0 2-0 5-0 1 实施中华人民共和匡国 家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 I PRGB/T 1 4 9 2 6.4 2-2 0 0 1前言 本标准规定了实验动物细菌学检测标本的
2、采集法。检测标本的采集是实验动物微生物学所有检测项目共有的程序，也是极为重要的环节之一。在原标准中，采样方法分列在每个细菌检测方法的标准中，步骤描述不详细。为了将采样程序标准化并便于查找，特制定本标准。本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口。本标准起草单位:中国实验动物学会。本标准主要起草人:李红、贺争鸣、范薇。中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准实验动物细菌学检测标本采集GB/T 1 4 9 2 6.4 2-2 0 01La b o r a t o r y a n i ma l-Ba c t e r i o l o g i c a l mo n i t o r i n g -C o
3、 l l e c t i o n o f s p e c i me n s范 围本标准规定了实验动物细菌学检测标本的采集法。本标准适用于小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠、兔、犬和猴的细菌学检测2原理实验动物微生物在特定部位定植，采取相应部位的标本，可达到最大的检出率。主要设备 和材料3.13.23.33.43.53.63.73.83.9小动物解剖固定板(蜡板或木板)。各种型号手术剪、手术镊子、止血钳。小动物麻醉缸。二氧化碳麻醉装置。酒精灯。接种棒及接种针。7 5%乙醇。乙醚。注射器及针 头。采样方法4.1 动物麻醉 使用乙醚或二氧化碳麻醉。4.2 皮肤采样 待检部位用7 5%乙 醇液消毒后，用灭菌接种刀
4、、镊刮取待检动物皮毛、鳞屑少许。用于皮肤病原真菌的直接涂片检查和分离培养。4.3 血清采样4.3.1 眼眶后静脉丛取血 动物麻醉后，用左手拇指和食指抓住两耳之间的头部皮肤，使头部固定、眼球充分外突，眶后静脉丛充血。右手持玻璃毛细取血管(内涂抗凝剂)。与面部成 4 5。的夹角，经眼睑和眼球之间刺人眼球后部的静脉丛。血液自动流人取血管。当得到所需要的血量后，将毛细取血管拔出，同时松开左手。毛细取血管离心后，获得实验所需要的血清。此采血法适合小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠的血清采集。4.3.2 眶动脉或眶静脉取血中华人民共和国国家质f监督检验检疫总局 2 0 0 1-0 8-2 9批准2 0 0 2-0 5
5、-0 1 实施 iGB/T 1 4 9 2 6.4 2-2 0 0 1 动物麻醉后，用左手拇指和食指抓住两耳之间的头部皮肤，使头部固定、眼球充分外突并固定用眼科镊子迅速钳取眼球。将眼眶内流出的血液滴人离心管。经离心后获得实验所需要的血清 此采血法适合小鼠、大鼠、地鼠的血清采集。4.3.3 耳缘静脉采血 动物固定后，选静脉清晰的耳朵拔去采血部位的被毛，用 7 5%乙醇消毒。为使血管扩张，可用手指擦搓血管局部或用电灯照射加热针头沿耳缘静脉末梢端刺人血管。也可用刀片在血管上切一小口的方法，让血液自然流出即可。取血后用棉球压迫止血将血液迅速移人离心管，经离心后获得实验所需要的血清。此采血法适合兔的血清
6、采集。4.3.4 耳中央动脉采血 动物固定后，左手固定动物耳朵，用7 5%乙醇消毒。右手持注射器，在中央动脉末端沿动脉平行的方向刺人，即可见血液进人注射器。取血后用棉球压迫止血。将血液迅速移人离心管，经离心后获得实验所需要的血清。此采血法适合兔的血清采集。4.3.5 股静脉采血方法 动物固定后，剪去采血部位的毛，用 7 5%乙醇消毒局部皮肤，用胶皮绑在股部，或由助手用手握紧股部，即可明显见到充血静脉，右手持注射器，将针头向血管旁的皮下先刺人，而后与血管平行的方向刺人静脉，由股静脉下端向心方向刺人。见回血后，放松对静脉近心端的压迫，徐徐抽动针筒即可取血。取血后用棉球压迫止血。将血液迅速移人离心管
7、，经离心后获得实验所需要的血清。此采血法适合犬、猴、兔的 血清 采集。4.3.6 心脏取血 动物麻醉后，将动物仰卧固定于固定板上，用 7 5%乙醇消毒心区部。用左手拇指和食指触摸心搏动处。右手持注射器，选择心博最强处刺人，血液自动流人注射器。将血液迅速移人离心管，经离心后获得实验所需要的血清。此采血法适合豚鼠、地鼠、兔的血清采集。4.4 呼吸道分泌物采集4.4.1 动物固定:将已麻醉的动物仰卧，并把四肢固定在解剖板上。4.4.2 消毒:用 7 5%乙醇从腹股沟到颈部进行逆毛消毒。4.4.3 解剖和接种:沿腹正中线从腹部以下至下领剪开皮肤，使腹部、胸部及颈部的肌肉全部暴露。取灭菌眼科镊和眼科剪各
8、一把，分离颈部肌 肉直到暴露气管，于咽部以下 5 m m 左右将气管剪一“V，形口，用无菌接种针插人气管，由下朝上到达咽部轻轻转动几下。将沾有气管分泌物的接种针在琼脂平皿上进行划线接种。如需接种增菌培养液，可将咽喉部及部分气管剪下投人培养液。45 回盲部内容物采集4.5.1 动物固定:同4.4.1.4.5.2 消毒:同4.4.2,4.5.3 解剖和接种:沿腹正中线从腹部以下至下领剪开皮肤，使腹部、胸部及颈部的肌肉全部暴露。取灭菌手术镊及手术剪各一把，剪开腹部肌肉，暴露回盲部剪开回盲部，用灭菌接种环挑取适量内容物划线接种于琼脂平皿:挑取约 1/1 0 量的内容物接种增菌液，如内容物不足量，可剪下
9、包括回盲部在内的一段肠组织，适当剪碎后放人增菌液。4.6 粪便采集 将粪便前段弃去，取中段粪便。对稀软便，可直接接种;对干便可加适量 P B S或培养(以淹没粪便为宜)匀浆化后接种。GB/T 1 4 9 2 6.4 2-2 0 014.6.1 直接用灭菌接种环沾取粪便后接种琼脂平皿。4.6.2 取培养液 1/1。体积的粪便接种液体培养基或增菌液。4.6.3 不能立即接种的粪便标本应先接种于运送培养基，7 2 h内尽快接种分离培养基。4.7 肛拭子采集 将灭菌棉签用灭菌生理盐水或培养液稍浸湿后，轻轻插人动物肛门深处 3-4 c m,缓缓转后取出，放人装有运送培养基的采样小管。直接用棉签接种琼脂平皿。4.8 病灶组织分泌物及脓汁标本采集4.8.1 接种:固定动物后对病灶周围用7 5%乙醇进行消毒，用灭菌接种环沾取分泌物或脓汁接种琼脂平皿。对已处死的动物可剪下少量病变组织，于琼脂表面接触后再划线接种，可取得较大的接种量。4.8.2 涂片:载玻片上滴加适量灭菌生理盐水，挑取少量脓汁与之混匀，风干，火焰固定，革兰染色，或风干，甲醇固定，姬姆萨染色。对病灶分泌物，宜滴加少量生理盐水，以获得相对浓的涂片，固定及染色同脓汁。
