1、ICs 67 220 10B36中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准GB/T22293-2008/Is o 13685:1997姜及其油树脂主要刺激成分测定HPLC法Ginger and its oleoresins-Determination of the main pungentcomponents-Method using high-performance liquid chromatographyIISO 136851997,Ginger and its oleoresins-Determination of the main pungent components(gingero
2、ls and shogaols)-Method using high performance liquid chromatography,IDTOB-OB-12发布z O09-03-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检嗓总垦发 布中 国 国 家 标 准 化 管 理GB/T 22293-2008/Is o 13685:197曰本标准等同采用Is o 13685:1997姜及其油树脂 主要刺激挂成分(姜醇和姜酚)测 定 HPLC法(英文版)。本标准等同翻译Is o 13Cg 5:1997。为便于使用,本标准做了下列编辑性修改:D“本国际标准”-词改为本标准;D 用小数点“.”代替作为小效点的逗
3、号“,o 将Is o 13685中的部分脚注和笤示语恐人本标准条文中。本标准的附录A、附录B、附录C、附录D、附录E均为资料性附录。本标准由中华全国供销合作总社提出。本标准由中华全国侠销合作总社南京野生植物综合利用研究院归口。本标准起草单位:中华全国供销合作总社南京野生植物综合利用研究院。本标准主要起草人:陈仕荣、张卫明。亠刚GB/T22293-2008/Is o 13685J997姜及其油树脂主要刺激成分测定 HPLC法1 范围本标准规定了测定干姜及姜油树脂 中姜醇、姜酚(简写为匚6彐-G、匚8G、匚10-G、匚6彐 s、Ls s、匚10s)的反相HPLC测定方法。本标准适用于干姜和姜油树脂
4、 中姜醇、姜酚的测定。注:姜 醇和姜酚化学结构式参见附录A。2 规范性引用文件下列文件 中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注 日期 的引用文件,其 随后所有的修改单(不 包括勘误 的内容)或 修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准述成协议 的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注 日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。G B/T 1 2 7 2 9 3 香辛 料 和 调 味 品 分析 用 粉 末 试 样 的 制 备(G B/T 1 2 7 2 9.3-z O 0 8,0 2 8 2 5:1981,MOD)G B/T 1 2 7 2 9 6 香辛 料 和 调 味 品
5、 水分 含 量 的 测 定(蒸馏 法 G B/T 1 2 7 2 9 6-2 0 0 8,I S o 9 3 9:1980,NEQ)3 原理在常温、常压下,用 甲醇萃取干姜粉 中的刺激性成 分,减 压浓缩萃取 物,所 得 浓缩液 直接用反相HPLC法进行分析。用壬酸香草酰胺(NVA)作外标迸行定量。4 试剂分析纯试剂,除特别说明外,均用HPLC级纯水。41 外标壬酸香草酰胺(NVA)的熔点为42 狃之间,在本标准规定条件下,用 HPLC分析时,得到单一色谱峰(出 峰时间在3m i n 8m i n 之间,峰面积至少为总面积的98%)。42 溶剂4.2.1 甲醇:HPLC级。4.2.2 甲醇:分
6、析纯。4.2.3 乙腈:H P L C 级。4.2.4 冰乙酸。5 仪器通用实验室仪器,其他仪器如下。5.1 色谱仪可用于HPLC分析的色谱仪,其配置如下:D 进样系统:能准确进样20u L的样品;b)固定波长(280n m)紫外检测器;15 75.85 95,1 05,11GB/T222g 3 2008/Ls o 13685:1997o 具有基线校正功能、灵敏度为0,25a u.s 0.5f.s,能精确测量峰面积 的记录仪或积分仪。5.2 不锈钢柱:2 5 0 m m 忸.6 m m、内充填5 u m C 1:(o D s)。5.3 旋转式真空蒸发器。54 真空过滤器。55 FH型微膜过滤器
7、:孔径0.5u m,用于有机溶剂。56 HA型微膜过滤器:孔径0.衽5u m,用于含水溶剂。移液管:容量20m L。巴士德吸管。容量瓶:5 m L、2 5 m L、1 0 0圆底烧瓶:1 0 0 mL。分析天平:感量 士0.6 样品的制备61 干姜按GB/T12729分含量的测定按GB/T12729.6的6.2 姜油树脂取样前应将7 检测方法71 NVA标准称取0.1g 下倮存该溶来配制标准溶液(浓度约10液(约0 2 m g/m L7.2 NVA样品溶7.2,1 干姜称取1.000g姜烈振摇,然后放置12h 以上,用吸管底烧瓶(510)中,用旋转式真空蒸发器于+o用 巴士德吸管(5.8)转,
8、用 甲醇(厶 22)稀释至刻度,盖好容量瓶后剧烈振摇:于H P L C 分析。对每一样品,均制各萃取物=72.2 姜油树脂称 取0500g 姜油 于100m L容量 瓶(59丿屮,质量,用 甲醇(4,2.2)稀至刻度,盖好并剧烈振摇。对每个样品均制各两份溶液,以“m g/m L”标明实际浓度。7.3 色谱分析7.3.1 流动相(乙腈与含1%乙酸的水、除气前的比例65:35)用真空过滤装置(5.4)将520m L乙腈(4.2.3)经FH型微膜过滤器过滤,将 水和冰 乙酸按99:1(体 积 比)的 比例混合,将此混合液280m L经HA型微膜过滤器(5.6)过滤到 已过滤 的乙腈溶液 中;将流动相
9、在磁力搅拌下减压(压力30k Po 除气5m i n,然后将流动相转移至色谱仪贮液池 中,设定流速为1.O m L/m i n。7.3.2 响应因子的测定调整记录仪/积 分仪直至进样时基线不波动,此时开始记录积分信号(通 常为进样后3m i n),将检2冲洗用的甲醇至50m L容GB/T22293-2008/Is o 13685J997测器和记录仪凋节至合适灵敏度。每份NVA标准溶液重复进样20u L,记录运行时间为NVA倮留时间(通常为4m i 5m i n)外加4m i n 范围内的色谱图(参见附录B),每份标准溶液至少进样三次。标明各个色谱图上的NVA的烽面积,计箅不同NVA浓度下(约
10、0.2m g/m L和0.4m g/m L)的平均蜂面积,按式(1)计箅NVA的响应因子:K w=恽 0式中:CNv NVA的浓度,单位为毫克每亳升(m g/m L);Aw 在相应浓度下NVA的平均峰面积。为了确保线性,两个浓度下测得的KNv A值相差不得大于2%,标准曲线参见附录C。然后按式(2)式(7)分 别计箅每个姜醇和姜酚的K值:珩吐。=K w 鑫 籍|斧=K N v 1 0 0 3 (2)式中:29438姜醇 匚6彐的相对分子质量;2 9 3,0 1 N V A 的相对分子质量。同理:K :c=K N vA 1 0 9 9 (3)K 】c c =K N v A 1 1 9 4 (4
11、)K c6 s=K N vA 0.9 4 2 (5)K :s=N v1.o3 7 (6)K s=N v 1.1 3 3 (7)733 样品分析73.31 干姜将各个浓度下按721制备的萃取物注人色谱仪,按 7.3.2调节仪器,将记录时间延长至17m i n,按保留时间顺序记录得到匚6彐G、E8G、匚6s 和匚10彐-G相应的峰面积(典型色谱图参见附录D)。化合物E8彐s 和匚10彐 s 通常在干姜中很少出现,而保留时间接近于NVA的E6彐G蜂,在色谱图中通常是最高的。对于样品而言,其浓缩萃取物给出的E6G峰的面积大于浓度为0.4m g/m L的外标物NVA的峰面积,将按7.2.1得到的未浓缩萃
12、取物注人色谱系统,采用色谱图来测定匚6G。7.3.3,2 姜油树脂将由7,2.2制备的各姜油树脂溶液导人色谱系统,仪器调节同7.3.2,维持更长的操作时间(约如 m i n),按保留时间长短顺序记录得到对应于匚6彐G、匚8彐G、E6彐s、匚10彐G、匚8彐s、E10彐s 的峰面积(典型色谱图见附录D)。匚6G和匚6s 通常是最高的色谱峰,匚 6彐G的保留时间接近于NVA峰。对于E6彐-G峰面积大于浓度为0.4m g/m L的标准NVA蜂面积的样品,制备并向色谱系统中导人合适稀释度的溶液,便可利用色谱图测定匚6G。8 结果表示按式(8)分 别计箅干姜和姜油树脂中姜醇和姜酚的浓度,其样品中匚6彐G
13、的含量X以质量分数计,数值以%表 示:X=A 6 G(6 G (8)CGB/T22293-2008/Is o 13685:1997式 中:A6c 样品色谱图中匚6彐-G的峰面积;K 6)G 6 彐-G 的响应因子;c 样品溶液中干姜或姜油树脂的浓度,单位为毫克每毫升(m g/m L)。g 玉现性相同操作者,用同样的仪器在同一实验室、在铰短的时间间隔内,用相同的测定材料和测定方法,测得的两个平行结果之 间的绝对误差不得大于6G的误差为参照;姜油树脂以匚6G或E6彐s 的误差为参照)。注:实 验室间测定结果参见附录GB/T22293-2008/Is o 13685:1997附 录 A(资 料性附录
14、)姜醇和姜酚化学结构叫吲凵图A.1 姜醇化学结构GB/T22293-2008/Is o 13685:197附 录 B(资 料性附录)NVA典型色谱图o 5 】0图B1 NVA典型色谱图GB/T22293-2008/Is o 13685:1g 97附 录 C(资 料性附录)姜醇、姜酚标准曲线GB/T22293-2008/Is o 13685:19g 7咐 录 D(资 料性附录)姜醇、姜骱典型色谱囡囡D.1 姜醇、姜酚典型色谱囡GB/T22293-2008/Is o 13685:1997附 录 E(资 料性附录)姜油树脂不同实验室测定结果表E。1 测定1:用 二氧化碳(C0)萃取的姜油树脂实验室E
15、6彐-G匚8彐-GE1 彐-G总姜醇E6彐-sE8彐-s10-s总姜酚11162 517.7逐 5157.2215 83 925.1566.4318 627.7413 71?.532o 23 7513.12 2【8 5440 751615 衽2 22 0】8 5713 32 众1 116 844(02(02平均值14.520 3么70.758最大偏差4 17.42 15 425表E2 测定1:姜油树脂A实验室E6彐-GE8-GE10彐-G总姜醇E6-sE8彐-s匚10彐-s总姜酚15 14 众1 02242 413 65366310 12315 25 51 145 67 72 90356 41
16、 2攻.55366众8 171.3054 05 3平均值1 510.1 3最大偏差5 11 40 50 72.1表E3 测定1:姜油树脂B实骏室E8-G1 彐-G总姜醇E6彐-sE8彐-s10-s总姜酚【1 12 1?.7衽 21.o6.么6.41 31 25.531 3l 0 24 衽1【5 5085o 8614 775 11 10.76 94 0o 7o 9平均值1 17.7最大停差o.31 00.51.7GB/T2223-2008/Is o 13685:1g 97表E.4 测定 2:用 二i 化 碳(Co)萃取的姜油树脂实验室E6彐-G8 chol-c总姜淬6-s10-s总姜酚11183 0】6 62 403212 417,32.42731众 62 72153 23841 522 33.5么 1513 917 326平均值13.442.822.7419,02?4o.38o 264.34最大偏差1.641.021.56o.76o 221.7众表E.5 浏定2:姜油树脂C实验室E6彐-G8 c匚10彐-G总姜薛6 sE8彐-sE10彐-s总姜 酚13.75.63 34 621.o3
