1、ICS11.220B41中华人民共和国国家标准GB/T27535-2011猪流感H抗体检测方法Detection method of hemagglutination inhibition antibodyagainst swine influenza2011-11-21发布2012-03-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会发布GB/T27535-2011猪流感H抗体检测方法1范围本标准规定了猪流感病毒血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验的技术要求。本标准适用于猪流感血清HI抗体的检测。2仪器水浴箱、4冰箱等。3试验材料单道及多道微量移液器、吸头。4试剂4.1
2、0.01mol/LpH7.2PBS(参见附录A中A.1)。4.2胰酶溶液（参见附录A中A.2)。4.30.01mol/LKIO,溶液（参见附录A中A.3)。4.41%丙三醇盐水（参见附录A中A.4).4.5阿氏(Alsevers)液（参见附录A中A.5)。4.60.5%鸡红细胞悬液（参见附录A中A.6)。4.7HI试验抗原和阴、阳性血清（参见附录A中A.7)。5血凝(HA)试验5.1用多道微量移液器在微量反应板的112孔均加入0.05 mL PBS,换吸头。5.2吸取0.05mL抗原，加人第1孔，反复抽打35次混匀。5.3“从第1孔吸取0.05mL抗原加入第2孔，混匀后吸取0.05mL加人第3孔，如此进行对倍稀释至第11孔，从第11孔吸取0.025mL弃之，换吸头。第12孔作为红细胞对照。5.4每孔均加人0.05mL0.5%(体积分数)鸡红细胞悬液（将鸡红细胞悬液充分摇匀后加入）。5.5轻轻混匀，室温(2025)下静置20min后观察结果（如果环境温度太高，可置4环境下）。对照孔红细胞显著呈钮扣状时判定结果。5.6结果判定：将反应板倾斜45，观察红细胞若没有呈泪滴状流淌，则判为HA阳性；完全血凝（不流淌)的病毒最高稀释倍数代表1个血凝单位(HAU)。6血凝抑制(H)试验6.1操作步骤6.1.1血清样品的处理：待检血清样品需经“胰酶-加热-高碘酸盐方法”处理，以去除血清中非特异性1
