1、SN/T4257-2015出口食品中抗倒酯、脱叶磷、坐果安、赤霉素残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法1范围本标准规定了出口食品中抗倒酯、脱叶磷、坐果安、赤霉素残留量的液相色谱-质谱/质谱检测方法。本标准适用于苹果、菠菜、圆葱中抗倒酯、脱叶磷、坐果安、赤霉素残留量的测定和确证。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要试样中残留的抗倒酯、脱叶磷、坐果安、赤霉素采用乙腈提取，HLB固相萃取柱净化，液相色谱-质谱/质谱
2、仪测定和确证，外标法定量。4试剂和材料4.1对试剂和材料的要求除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.2试剂和材料本方法所用的试剂和材料如下：4.2.1乙腈：HPLC级。4.2.2甲醇：HPLC级。4.2.3甲酸：HPLC级。4.2.4氯化钠。4.2.5溶解液：甲醇-水(1+9，体积比)。4.2.6定容液：甲醇-水(1+1，体积比)。4.2.7标准品：标准品详细信息见附录A中表A.1。4.2.8标准储备溶液：准确称取适量的抗倒酯、脱叶磷、坐果安、赤霉素标准物质，用乙腈将其配制成100g/mL标准储备液，避光于04保存。4.2.9标准中间液：用乙腈稀释标准储备溶液
3、至10g/mL,避光于040保存。4.2.10标准工作溶液：根据检测要求临用前用空白样品提取液将标准中间液稀释成相应浓度的标准工作溶液。现用现配。SN/T4257-20154.2.11HLB固相萃取柱(6mL/500mg):使用前先用5mL甲醇、再用5mL水依次活化。4.2.12微孔滤膜：0.22m。4.2.13硅藻土：100目200目。5仪器和设备本方法所用的仪器设备如下：5.1液相色谱串联质谱仪，配电喷雾离子源(ESI)。5.2组织捣碎机。5.3旋转蒸发器。5.4高速均质器：18000r/min。5.5固相萃取仪(SPE)。5.6离心：10000r/min。5.7涡旋混合器。6试样制备与保
4、存6.1试样制备取有代表性样品500g,将其切碎后，用组织捣碎机将样品加工成浆状，混匀，装入洁净的盛样容器内，密封并标明标记。6.2试样保存试样于04保存，在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。7测定步骤7.1提取称取20g(精确至0.01g)均匀试样置于100mL离心管中，加入15g氯化钠、5g硅藻土和10mL水，用涡旋混合器初步混匀。然后加入50mL乙腈，于高速均质器上匀浆2min。将离心管以5000r/min离心5 min,吸取上层提取液于250mL心形瓶中。重复上述操作提取两次，合并提取液于250mL心形瓶中。于35C下减压蒸干，准确加入甲醇+水(1+9，体积比
5、)溶解液10.0mL,充分溶解残渣，供固相萃取仪净化。7.2净化取5.0mL待净化液于已活化好的HLB固相萃取柱中，自然滴下，弃去流出液。用10mL水淋洗，自然滴下，弃去。再用5mL甲醇+水(1+9，体积比)溶解液淋洗，自然滴下，弃去。最后用15mL甲醇洗脱（保持约1mL/min),收集流出液于100mL心形瓶中，于35下旋转浓缩至干，准确加入甲醇+水(1+1，体积比)2.0mL定容液充分溶解残渣，过0.22m有机滤膜后供液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)测定。2SN/T4257-20157.3测定7.3.1液相色谱条件液相色谱参考条件如下：a)色谱柱：C18柱，3.5m,150mm2.1m
6、m(内径)，或相当者；b)流动相：乙腈-0.1%甲酸溶液，梯度洗脱条件参见表1；c)流速：200L/min;d)柱温：室温；e)进样量：10L。表1液相色谱的梯度洗脱条件时间流速0.1%甲酸水溶液乙腈minL/min0%0.02009551.52009552.020059510.020010015.0200010015.1020095530.002009557.3.2质谱条件质谱参考条件如下：a)离子化模式：电喷雾电离正离子模式(ESI+)与负离子模式(ESI一)；b)检测方式：多反应监测(MRM);c)分辨率：单位质量分辨率d)其他参考质谱条件：参见附录B。7.3.3定性测定在相同实验条件下，样液中被测化合物的保留时间，与标准溶液的保留时间偏差在士2.5%之内；且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准工作溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表2规定的范围，则可判定为样品中存在对应的被测物。表2定性时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/%502050102010允许的相对偏差/%士20士25士30507.3.4定量测定在仪器最佳工作条件下，对标准工作溶液进样。用标准工作曲线按外标法定量，样品溶液中被测物3
