1、G B/r 1 7 8 1 9-1 9 9 9前台 维生素预混料中维生素B 测定方法尚无国际标准。本标准参考 色谱科学杂志 第1 5 卷和洲封罗纳普朗克动物营养公司提出的分析方法，该法简捷、快速、准确，在技术内容上采用其中技术条件，在编写规格上，依据G B/T 1.1-1 9 9 3 标准化工作导则 第1 单元:标准的起草与 表述规则第I 部 分:标准编写的基本规定 和G B/T 1.4-1 9 8 8 标准化工作导则 化学分析方法标准编写规定。本标准的附录A是标准的附录。本标准由全国饲料工业标准化委员会提出并归口。本标准由国家饲料质量监督检验中心(北京)负责起草。本标准主要起草人:李兰、陈必
2、芳、梁冬生。中华 人 民 共 和 国 国 家 标 准维生素预混料中维生素B 1 2 的测定 高效液相色谱法C B/r 1 7 8 1 9 一 1 9 9 9D e t e r m i n a t i o n o f v i t a m i n B,Z i n v i t a m i n s p r e m i x 一 H i g h-p r e s s u r e l i q u i d c h r o ma t o g r a p h y1 范围 本标准规定了用高效液相色谱法测定维生素预混料中维生素B 1 2 的方法。本标准适用于维生素预混料、维生素B,z 预混制剂中维生素B,z 的测定。检
3、测范围为每千克样品中维生素B,含量大于。.2 5 m g,方法原理试样中维生素B,:用水提取，经高效液相色谱反相柱分离，其峰面积与维生素B,。的含量成正比试剂和材料 本标准所用试剂除特殊注明外，均为优级纯，水为去离子水。11 乙睛:色谱纯。3.2 正磷酸溶液3.3 2 5%乙醇溶液3.4 维生素B,标准溶液。3.4.1 维生素B。标准贮备溶液:准确称取。.1 0 0 0 g 维生素B,:纯品(符合U S P),溶解于1 0 0 M I乙醇溶液(3.3)中，并稀释定容至刻度，摇匀。该标准贮备液每毫升含维生素B,I m g.3.4.2 维生素B,z 标准工作液:准确吸取维生素B,z 标准贮备液(3
4、.4.1)1 m L 于5 0 M I容量瓶中，用移动相稀释定容刻度，摇匀。该标准工作液1 M I含维生素B V 2(A g e 4 仪器、设备 4.1 实验室常用设备。4.2 超声波水浴。4.3 高效液相色谱仪，带自动进样器，紫外可调波长检测器。4.4 超纯水装置 4.5 离心机:3 0 0 0 r/m i n.5 试样制备取 具 有 代 表 性 样 品 至 少 5 0 0 g，用 四 分 法 缩 分 至 1 0 0 g，粉 碎 圣 部 过 0.2 8 m m 孔 卜混 匀，装 入 样 品瓶内密闭，避光低温保存备用。国家质量技术监督局1 9 9 9 一 0 8 一 1 0 批准2 0 0 0
5、 一 0 2 一 0 1 实施G B/T 1 7 8 1 9-1 9 9 96 分析步骤6.1 提取6.1.1 维生素预混料中维生素B。的提取 称取试样2 -3 g(精确至士。.0 0 0 1 g)，置于1 0 0 m L棕色容量瓶中，加约6 0 m L去离子水，在超声波水浴中超声提取 1 5 m i n，取出，用去离子水定容至刻度，混匀，过滤，滤液过。.4 5 f a m滤膜，供高效液相色谱仪分析。6.1.2 维生素B 二 制剂(1%-2%)的 提取 称取试样1 g(精确至士。0 0 0 1 g)于1 0 0 m L 棕色容量瓶中，加人约6 0 m L 去离子水，在超声波水浴中超声提取1 0
6、 m i n，取出用去离子水定容过滤。精确吸取1.0 0 m L溶液于5 0 m L棕色容量瓶中，用去离子水定容至刻度，该液通过。.4 5 p m滤膜过滤，供高效液相色谱仪分析6.2 测定步骤6.2.1 色谱条件 柱子:p.-B o n d p a k N H,粒度5 p m,3.9 m m X 3 0 0 m m.柱温:3 0 C。流动相:3%正磷酸水溶液2 6 0 m L与7 0 0 m L乙膀混合，超声脱气。流速:1.7 m L/m i n,检测波长:3 6 1 n m,6.2.2 定量测定 按高效液相色谱仪说明书调整仪器操作参数，用两次以上相应标准工作液，对系统进行校正。将通过。.4
7、5 p=滤膜的样液(6.1.1)依次分装于自 动进样小瓶中，依外标法上液相色谱仪测定6.2.3 也可采用反相离子对高效液相色谱测定维生素B,的方法(见附录A)7 测定结果的计算M ill 定结果按式(1)计算m;=P;XV X p;XV尸。，X舰 XV 。.。.一(1)式中:.;一 一 每千克样品中维生素B,:的含量，m g;m-一 试样质量，g+V;-一 试样溶液进样体积,p L;尸.-一 试样溶液峰面积值;V-一 试样稀释的体积，mL;P-一 标准溶液浓度，p g/m L;v，-一 标准溶液进样体积,p L;P,-一 标准溶液峰面积平均值。每个试样取两份试料进行平行测定，以其算术平均值为测
8、定结果。结果表示到每千克样品中 维生素B,O.0 1 m g8 允许差 同一 分析者对同一试样同时两次平行测定结果的相对偏差应不大于 1 5 0 0G B/T 1 7 8 1 9-1 9 9 9 附录A (标准的附录)反相离子对高效液相色谱测定预混料中维生案B,2A1 原理 试样中维生素B Z 经水提取后，注人反相色谱柱上，由 于输入了有机的反相离子对四丁基磷酸钱(P I C A)和己 烷磺酸钠(P I C-B s)溶掖，维生素B,:的阳离子与移动相中阴离子形成离子偶化合物，在移动过程中与固定相分开达到分离.试荆和材料1 甲醇(优级纯)。2 磷酸。3 四丁基磷酸按(P I C A),4 己 烷磺酸钠(P I C-B 6),测定色谱条件 :.勺乃乙内乙，IJAAAAAA 柱子:1 5 0 m m X 4.0 m m(内 径)不锈钢柱。固定相:p-B o n d p a k C,a(O D S)粒度5 p m,移动相:甲 醇一 水(2 5 0+7 5 0)约9 8 0 m L，加入P I C A,P I C B 6(各一小瓶)2 0 m L，用上述2 5%甲醇水定 容至1 L.混匀，用磷酸调节p H 3,流速:1 m I./m i n,柱温:室温 检测器:紫外检测器，使用波长3 6 5 n m,进样量:2 0 p L,保留时间:约7.0 m i n,A Q 其他各项与正文相同
