1、c s/T 1 7 4 8 1-1 9 9 8前言 本标准等效采用日本农牧水产畜牧局发布并实施的日 本饲料分析基准 氯化胆碱。在技术内容上，日 本饲料分析基准 氯化胆碱 中“氯化胆碱雷氏盐的生成和溶出”的部分内容，即“精确吸取上述提取液 5 m L -5 0 mL茄形烧瓶中，于5 0 水浴上减压浓缩后，通氮气下除去溶剂”，可简化为本标准的“精确吸取上述提取液5.0 0 -1 0.O O m L于1 0 0 m L高形烧杯中，在5 0 水浴上蒸发至干”。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。本标准由国家饲料质量监督检验测试中心(武汉)负贵起草。本标准主要起草人:杨先奎、钱沁、钱方。中华
2、 人 民共 和 国 国家 标 准预混料中氯化胆碱的测定分光光度法G B/T 1 7 4 8 1-1 9 9 8Th e me t h o d f o r d e t e r mi n a t i o n o f c h o l i n e c h o r i d ei n p r e mi x-S p e c t r o p h o t o m e t r y1 范围本标准规定了雷氏盐比色法测定复合预混料中氯化胆碱的方法。本标准适用于复合预混料中氯化胆碱的测定。2 引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效所有标准都会被修订，使用本标准
3、的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。G B/T 6 6 8 2-1 9 9 2 分析实验室用水规格和试验方法3 方法原理 用甲醇一 三氯甲 烷混合溶剂提取试样中的氛化胆碱，将溶剂蒸干后用水溶解残渣，再在低温下加入雷氏盐生成氯化胆碱雷氏 盐的结晶，过滤出结晶，用丙酮溶解，定容。将其丙酮溶液在波长5 2 5 n m下进行分光光度测定。4 试荆 本标准所用试剂，除特殊说明外，均为分析纯。实验室用水符合G B/T 6 6 8 2 中三级水的规格。4.1 甲醉4.2 丙酮4.3 甲醇一 三氯甲烷混合液(1 0+1)量取9 0 0 m L甲 醉和9 0 m L三氯甲 烷，混匀。4.4 雷氏 盐(二氨
4、基四 硫代氰酸铬按)甲 醇溶液 N H,C r(N H 3)z(S C N),为4 0 g/L 称取4 g 雷氏盐溶于甲 醇，加甲 醇稀释至1 0 0 m L，混匀，置冰箱内 保存。4.5 氯化胆碱标准溶液4.5.，氯化胆碱标准储备溶液:精确称取氯化胆碱1 0.0 0 0 0 g 溶解于水，定量转入1 0 0 m l容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。此液1.0 0 m L 含。1 0 g 氯化胆碱。4.5.2 氯化胆碱标准工作溶液:临用时精确吸取氯化胆碱标准储备液(4.5.1)1.0 0 m L于1 0 0 m L容量瓶中，加水至刻度，混匀。此液1.0 0 m L含氯化胆碱1.0 m g,5 仪
5、器、设备5.1 实验室常用仪器。5.2 电动振荡器。国家质A技术监督局1 9 9 8 一 0 8 一 2 8 批准1 9 9 9 一 0 1 一 0 1 实施G B/r 1 7 4 8 1-1 9 9 85.3 恒温水浴槽。5.4 真空泵。5.5 离心机:转速能达到3。r/m i n.5.6 分光光度计:有 1.0 c m比色皿，可在 5 2 5 nn 下测定吸光度5.7 具塞锥形瓶:2 0 0 m l.5.8 高形烧杯:1 0 0 m l。5.9 抽滤瓶:2 5 0 mL.5.1 0 钳A式过滤器:孔径4 v 7 K m6 试样制备 取具有代表性样品至少2 k g，用四分法缩分至2 5 0
6、g，粉碎至过0.4 2 m m孔筛，混均，装入样品瓶内密闭，保存备用。7 测定步骏了.1 提取 精确称取试样约5 g(含氯化胆碱约。.0 4-0.4 g)于具塞锥形瓶中，精确移入甲醇一 三氯甲烷混合液(4.3)1 0 0.0 0 m L，加塞，在振荡器上振荡3 0 m i n 后，用慢速滤纸过滤，得试样提取液。7.2 氯化胆碱雷氏的生成和溶出 精确吸取上述提取液(7.ll5.0 0 -1 0.0 0 mL于 1 0 0 ml高形烧杯中，在 5 0 水浴上蒸发至千，加水4 0 m l使残渣溶解，再在冰浴中冷却到5 C 以下，加3 m L雷氏盐溶液(4.4)，间断搅拌反应3 0 m i n，得到氯
7、化胆碱雷氏盐的结晶。将生成的结晶转入柑锅式过滤器中真空抽滤，烧杯用水洗净，洗液一并抽滤。滤毕，结晶用3 X 5 m l,水洗，再用5 X1 m L甲醇洗，抽干，向过滤器中加入丙酮，使结晶溶解，转入5 0 m L容量瓶中，用丙酮洗净过滤器，洗液一并转入5 0 m L容量瓶中，加丙酮至刻度，混匀，得试样溶液。了3 测定步骤7.3.1 试样的测定 吸取5.0 m L所得试样液(7-2)于1 0 m L离心管中，离心5 m i n，转速为3 0 0 0 r/m i n，取上层清液，以丙酮作参比，用1.0 c m比色皿在5 2 5 n m波长下，用分光光度计测定吸光度，在工作曲线上查得试样中氯化胆碱的含
8、量。7.3.2 工作曲线的绘制 精确吸取氯化胆碱标准工作液(4.5.2)5.0 0,1 0.0 0,1 5.0 0,2 0.0 0 m L分别置于1 0 0 m L高形烧杯中，加水4 0 m L,以下按7.2 中“再在冰浴中冷却到5 以下”以 后的操作及7.3.1 试样的测定进行，测各标准L 作液的吸光度，绘制工作曲 线。8 测定结果的计算及表示8.1 测定结果按式(1)计算:X=m,V/m V,，(1)式中 X每千克试样中氯化胆碱的含量，9;m、一 一 标准曲线上查得测定时所取试样液中氯化胆碱的含量,m g;V 试样提取液的总体积，m L;。，一 一 试样质量，9;V,一 一 试样测定时吸取试样提取液的体积，m l。所得结果表示到小数点后一位。G B/T 1 7 4 8 1-1 9 9 88.2 重复性:每个试样取两份试料进行平行测定，以其算术平均值为测定结果。测定结果的相对偏差应不大于 1 5%.
