1、以正式出版文本为准中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 03372019代替 SN/T 00371995中华人民共和国海关总署发 布ICS 67.050C 532019-12-27 发布2020-07-01 实施出口植物源性食品中克百威及其代谢物 残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法Determination of carbofuran and its metabolite residues in plant-derived food for export HPLC-MS/MS method以正式出版文本为准以正式出版文本为准ISN/T 00372019前 言本标准按照 GB/T 1.
2、12009 给出的规则起草。本标准代替 SN 033795出口水果和蔬菜中克百威残留量检验方法。本标准与 SN 033795 相比，主要技术性变化如下：标准名称由出口水果和蔬菜中克百威残留量检验方法修改为出口植物源性食品中克百威及其代谢物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法；增加了克百威代谢物 3-羟基克百威的检测；扩大了标准检测的适用范围；删减了抽样部分；改进了样品前处理技术；仪器方法由气相色谱法变更为液相色谱-质谱/质谱法。降低了定量限，针对不同样品基质给出了克百威及其代谢物的添加回收率范围。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由中华人民共和
3、国海关总署提出并归口。本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：李晓娟、吴玉平、张洋、施鹏斐、王超、李淑娟。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：SN 03371995。以正式出版文本为准以正式出版文本为准1SN/T 00372019出口植物源性食品中克百威及其代谢物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法1范围本标准规定了出口植物源性食品中克百威及其代谢物 3-羟基克百威残留量的测定方法。本标准适用于大米、小麦、大豆、花生、洋葱、油菜、菠菜、番茄、黄瓜、马铃薯、橙子、苹果、香蕉和茶叶中克百威及其代谢物 3-羟基克百威残留量的检测和确证。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必
4、不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 2763-2016食品安全国家标准食品中农药最大残留量GB/T 6682分析实验室用水规格和实验方法3原理试样加酸化乙腈振荡提取，经 QuEChERS 方法对提取液进行净化，采用液相色谱-质谱/质谱法测定，外标法定量。4试剂和材料除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。4.1乙腈:色谱纯。4.2甲酸：色谱纯。4.3乙酸。4.4氯化钠。4.5无水硫酸镁。4.6乙二胺-N-丙基硅烷化硅胶（PSA）：40 m 60 m。4.7十八
5、烷基硅烷键合硅胶（C18）：40 m 60 m。4.8石墨化炭黑（GCB）：40 m 120 m。4.90.5%乙酸-乙腈溶液：准确量取 2.5 mL 乙酸于 500 mL 容量瓶中，加入乙腈（4.1）定容，混匀。4.100.5%甲酸溶液：准确量取 2.5 mL 甲酸于 500 mL 容量瓶中，加入一级水定容，混匀。4.110.1%甲酸溶液：准确量取 0.5 mL 甲酸于 500 mL 容量瓶中，加入一级水定容，混匀。4.12乙腈-水溶液（30+70,体积比）：取 30 mL 乙腈（4.1）和 70 mL 一级水混合均匀。4.130.1%甲酸-乙腈溶液：准确量取 0.5 mL 甲酸于 500
6、mL 容量瓶中，加入乙腈（4.2）定容，混匀。4.14克百威标准物质：C12H15NO3，CAS 号：1563-66-2，纯度大于等于 90%。4.153-羟基克百威标准品：C12H15NO4，CAS 号：16655-82-6，纯度大于等于 90%。4.16克百威标准储备液：准确称取 10 mg（精确至 0.1mg)克百威标准品于 10 mL 容量瓶中，用乙腈以正式出版文本为准2SN/T 00372019（4.2）溶解并定容，配制成浓度约为 1 mg/mL 的标准储备液，于 0 4 冰箱内避光保存。4.173-羟基克百威标准储备液：准确称取 10 mg（精确至 0.1mg)克百威标准品于 10
7、 mL 容量瓶中，用乙腈（4.1）溶解并定容，配制成浓度约为 1 mg/mL 的标准储备液，于 0 4 冰箱内避光保存。4.18克百威标准中间液：准确吸取适当体积的克百威标准储备液，用乙腈（4.1）配制成浓度为 10.0 mg/L 的标准中间液，于 0 4 冰箱内避光保存。4.193-羟基克百威标准中间液：准确吸取适当体积的 3-羟基克百威标准储备液，用乙腈（4.1）配制成浓度为 10.0 mg/L 的标准中间液，于 0 4 冰箱内避光保存。4.20克百威和 3-羟基克百威混合标准工作液：取适量的克百威标准中间液（4.18）和 3-羟基克百威（4.19）标准中间液，用乙腈-水溶液（4.12）配
8、制成标准工作液，该工作液需现用现配。5仪器设备5.1液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。5.2电子天平：感量 0.01 mg 和 0.01 g。5.3振荡器。5.4旋涡混合器。5.5离心机：最高转速不低于 10 000 r/min。5.6氮吹浓缩仪。5.7高速离心管：规格为 50 mL 和 5 mL。6试样制备与保存6.1试样制备粮谷、油料及茶叶类样品：取代表性样品约 500 g,用粉碎机全部粉碎并通过 20 目筛；水果及蔬菜类样品：取代表性样品约 500 g，用匀浆机或组织捣碎机均质。样品制备后分别装入洁净的盛样瓶内，密封并标明标记。6.2试样保存粮谷、油料及茶叶类试样于 0
9、 4 保存；水果及蔬菜类试样于-18 以下冷冻保存。在抽样及制样的过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。7测定步骤7.1提取7.1.1蔬菜和水果类：称取 5 g 试样（精确至 0.01 g）于 50 mL 离心管中，加入 10 mL 0.5%乙酸-乙腈溶液（4.9），涡旋混匀后振荡提取 30 min，加入约 2 g 氯化钠和约 2 g 无水硫酸镁，涡旋混匀，20 000 r/min 条件下离心 3 min，取上清液待净化。7.1.2粮谷、油料类和茶叶类：称取 2 g 试样（精确至 0.01 g）于 50 mL 离心管中，加入 5 mL0.5%乙酸溶液（4.10），涡旋混匀静置 30
10、min，加入 10 mL 0.5%乙酸-乙腈溶液（4.9），涡旋混匀后振荡提取 30 min，加入约 2 g 氯化钠和约 2 g 无水硫酸镁，涡旋混匀，于 10 000 r/min 条件下离心 3 min，取上清液待净化。7.2净化准确称取 250 mg 无水硫酸镁、100 mg PSA、100 mg C18 和 50 mg GCB 净化材料加入 5 mL 高速以正式出版文本为准3SN/T 00372019离心管中。准确移取 2mL 上清液（7.1）加入 5 mL 高速离心管中，涡旋混匀，于 10 000 r/min 离心 3 min，取 1 mL 上清液置于玻璃管中，于 40 下氮气吹至近干
11、，再加入 1.0 mL 乙腈-水溶液（4.12）充分溶解定容，过 0.2 m 尼龙滤膜，待 LC-MS/MS 测定。7.3液相色谱-质谱/质谱测定7.3.1液相色谱条件7.3.1.1色谱柱：C18，100 mm2.1 mm1.7 m，或性能相当者。7.3.1.2柱温：45。7.3.1.3进样量：5 L。7.3.1.4流动相及梯度洗脱条件见表 1。表 1流动相及梯度洗脱条件时间/min流速/mL/min流动相 A/%（0.1%甲酸-乙腈）流动相 B/%（0.1%甲酸溶液）0.000.45.095.00.500.45.095.02.000.495.05.03.000.495.05.03.500.4
12、5.095.07.3.2质谱条件仪器质谱条件参见附录 A。7.3.3定性测定按照 7.3.1 的条件测定标准溶液及样液，如果样液与标准溶液质量色谱峰保留时间相差不超过2.5%，在扣除背景后的质谱图中，所选择的监测离子全部出现，且定性离子的相对丰度（用相对于最强离子丰度的强度百分比表示）与浓度相当的标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过表 2 规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。表 2定性确证时相对离子丰度最大容许误差相对离子离子（基峰）5020 5010 20 10允许的相对偏差202530507.3.4定量测定在 7.3.1 仪器最佳工作状态下，对标准工作溶液进样，以待测
13、物色谱峰峰面积为纵坐标，标准工作溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值应在仪器测定的线性范围内；如果超出线性范围，应进行适当稀释后进样测定。在上述色谱条件下，克百威和 3-羟基克百威的保留时间分别约为 2.2 min 和 1.9 min，克百威和 3-羟基克百威标准品的选以正式出版文本为准4SN/T 00372019择离子色谱图参见附录 B 中的图 B.1 和图 B.2。7.4空白试验除不加试样外，均按上述 7.1 7.3 步骤进行。8结果计算和表述液相色谱-质谱/质谱测定采用标准曲线法定量，按式（1）分别计算试样中克百威和 3-羟基克百威的残
14、留量：10001000mf=VcX（1）式中：X 试样中克百威和 3-羟基克百威残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；c 从标准工作曲线得到的试样溶液中被测组分的浓度，单位为微克每毫升（g/mL）；f 稀释倍数；V 样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；m 试样的质量，单位为为克(g)。计算结果应扣除空白值。克百威在 GB 27632016 中定义的残留物为克百威及 3-羟基克百威之和，以克百威表示。因此按式（2）计算试样中克百威的总残留量：93.03+=羟基克百威克百威总XXX（2）式中：X 总 试样中以克百威表示的总残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；X 克百威 试样中克百威的残留量
15、，单位为毫克每千克（mg/kg）；X 3-羟基克百威 试样中 3-羟基克百威的残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；0.93 3-羟基克百威换算为克百威的系数。9定量限与回收率9.1定量限液相色谱-质谱/质谱检测方法对大米、小麦、大豆、花生、洋葱、油菜、菠菜、番茄、黄瓜、马铃薯、橙子、苹果、香蕉和茶叶中克百威和 3-羟基克百威的定量限均为 0.005 mg/kg。9.2添加浓度和回收率回收率数据参见附录 C。以正式出版文本为准5SN/T 00372019附录A（资料性附录）质谱/质谱参考条件A.1电离方式：ESI+。A.2毛细管电压：3.0 kV。A.3源温度:150。A.4去溶剂温度:45
16、0。A.5锥孔气流:氮气，40 L/h。A.6碰撞气:氩气。A.7监测模式:多反应监测(MRM)。A.8多反应监测离子对、锥孔电压和碰撞能量见表 A.1。表 A.1监测离子对、锥孔电压和碰撞能量化合物英文名称母离子子离子锥孔电压/V碰撞能量/eV驻留时间克百威carbofuran222.1123.0*20 21AUTO165.120 16AUTO3-羟基克百威carbofuran-3-hydroxy238.0181.0*25 10AUTO163.025 16AUTO 注：对于不同质谱仪器，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最佳。以正式出版文本为准6SN/T 00372019附录B（资料性附录）标准物质色谱图1）1）图 B.1 克百威 1.0 ng/mL 标准溶液质谱图1）1）图 B.2 3-羟基克百威 1.0 ng/mL 标准溶液质谱图以正式出版文本为准7SN/T 00372019附录C（资料性附录）添加回收率表 C.1不同基质中克百威添加水平及回收率范围基质名称添加浓度/(mg/kg)回收率范围/%大米0.00572 830.0177 870.183 890.581 84
