1、SN中华人民共和国进出口商品检验行业标准s N 0 6 8 4 一 1 9 9 7出口肉及肉制品中奥芬达哇残留量检验方法M e t h o d f o r t h e d e t e r mi n a t i o n o f o x f e n d a z o l er e s i d u e s i n me a t s a n d me a t p r o d u c t s f o r e x p o r t1 9 9 7 一 1 2 一 0 1 发布1 9 9 8 一 0 4 一 0 1 实施中华人民共和国国家进出口商品检验局发 布S N 0 6 8 4 一1 9 9 7前言 本标准是
2、根据G B/T 1.1-1 9 9 3 Q 标准 化工作导则第1 单元:标准的起草与表述 规则 第1部分:标准编写的基本规定 及S N/T 0 0 0 1-1 9 9 5 出口 商品中农药、兽药残留量及生物毒素检验方法标准编写的基本规定 的要求而进行编写的。其中测定方法是采用美国农业部食品安全和检验署(F S I S)化学实 验室手册 中有关方法，技术内容与原方法相同，经验证后按规定格式要求作了编辑性修改。本标准同时制定了抽样和制样方法。测定低限是根据国际上对肉 及肉制品中奥芬达哇残留量的最高限量和测定方法的灵敏度而制定的。本标准的附录 A为提示的附录。本标准由中华 人民共 和国国家进出口 商
3、品检验局提出 并归口。本标准起草单位:中华人民共和国上海进出口商品检验局。本标准主要起草人:郭德华、杨振宇。本标准系首次发布的行业标准。中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口肉及肉制品中奥芬达哇残留量检验方法s N 0 6 8 4 一1 9 9 7Me t h o d f o r t h e d e t e r mi n a t i o n o f o x f e n d a z o l er e s i d u e s i n me a t s a n d me a t p r o d u c t s f o r e x p o r t1 范围 本标准规定了出口 肉及肉 制品中奥芬达哇残留
4、 量检验的 抽样、制样和液相色谱测定方法。本标准适用于出口猪肉中奥芬达哇残留量的检验。2 抽样和制样2.1检验 批 以不超过 2 5 0 0 件为一检验批。同一检验批的商品应具有相同特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。2.2 抽样数量 批量，件最低抽样数，件 1 -2 5 1 2 6 1 0 0 5 1 0 1-2 5 0 1 0 2 5 1-5 0 0 1 5 5 0 1 1 0 0 0 1 7 1 0 0 1 2 5 0 0 2 02.3 抽样方法 按 2.2 规定的抽样件数，随机抽取，逐件开启。从每件中取一袋作为原始样品，原始样品总量不少于2 k g，放人清洁容器内，加封后，标明 标
5、记，及时送交实验室。如每件中无小包装，或有小包装但每袋重量超过2 k g 者，可用经灭菌的锋利刀，在抽出的包件中，每件 割取不少于1 0 0 g，混合后置于洁净容器内，作为混合原始样。混合原始样的重量不少于2 k g。加封后，标明标记，及时送交实验室。2.4 试样制备 从所取全部样品中取出 有代表性样品约1 k g，经组织捣碎机充分捣碎 均匀，均分成两份，分别装入洁净容器内作为试样。加封并标明标记。2.5 试样保存 将试样于一1 8 以下冷冻保存。注:在抽样及制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。中华人民共和国国家进出口商品检验局 1 9 9 7-1 2-0 1 批准1
6、 9 9 8 一 0 4 一 0 1 实施 1S N 068 4一 1 99 7测定方法3.1 方法提要 试样经用碳酸钠碱化后，用乙 酸乙 酷及丙酮抽提。蒸发提取液至干，溶解残留 物于正己 烷中。正己烷溶液中 的奥芬达哩经液一 液分配而 进入磷酸溶液中.酸溶液经碱化后，再用乙 酸乙 酷提取.将乙 酸乙 醋层 挥发至近干，残渣 溶解于二抓甲 烷并加到硅胶小柱中净化，用甲醉 一 二抓甲 烷洗脱。洗脱液挥发后，将残 渣溶解于流动相中供H P L C测定。3.2 试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为重蒸馏水.3.2.1 乙酸乙醋:重蒸馏。3.2.2 丙酮:重蒸馏。3.2.3 正己烷:重蒸
7、馏。3.2.4 甲醉:重蒸馏。3.2.5 二氮甲烷:重燕馏。3.2.6 无水乙醇。3.2.7 无水硫酸钠:6 5 0 灼烧 4 h,贮于密闭容器中备用。3.2.8 碳酸 钠溶液:1 m o l/L。溶解1 0 6 g 无水碳酸钠于1 L 水中。3.2.9 磷酸 溶液:1 m o t/L。将6 7.4 m L 磷酸C 8 5%,密 度(P)约1.7 1 g/m L 用水稀释至1 L,3.2.1 0 氢氧化钾溶液:1 0 m o l/L,溶解 5 6 0 g 氢氧化钾于水中，用水稀释到 1 L,3.2.1 1 磷酸按缓冲液:0.0 1 m o l/L,P H 7.0,溶解1.1 5 g磷酸二氢按(
8、NH 4 H2 P O 4)于约 9 5 0 mL水中，用稀氨水调节p H至 7.0，并用水稀释到 1 L 0 1p,用时现配)。3.2.1 2 H P L C流动相:甲醉一 磷酸按缓冲液(5 5+4 5).3.2.1 3 奥芬达哇标准品:纯度)”写。3.2.1 4 奥芬达哇标准溶液:准确称取1 0 m g 奥芬达哇标准品，溶于1 0 m L 二甲基亚矾，制成浓度为1.0 m g/m L 的 标准储备液。根据需要再用甲 醇稀释储备液成适当 浓度的标准工 作溶液。3.3 仪器和设备3.3.1 液相色谱仪:配有紫外检测器.3.3.2 旋转蒸发器。3.3.3 均质器。3.3.4 离心瓶:2 5 0
9、m L.3.3.5 p H计。3.3.6 全玻璃系统蒸馏装置。3.3.7 S e p-P a k硅胶小柱。3.3.8 过滤器:0.2 W m,3.4 测定步骤3.4.1 提取 称取1 0 g 试样(精确至。.1 g)于2 5 0 m L离心瓶中，加5 m L 碳酸钠溶液 1 m o l/L)和1 5 0 m L 乙酸乙 酷，高速匀浆5 m i n。再加8 0 g 无水硫酸钠，继续匀浆1 m i n(低速)。于2 5 0 0 r/m i n 离心1 m in，再将乙 酸乙 酷层通过滤纸滤入 旋转蒸发瓶中。加1 5 0 m L丙酮到离心瓶中，再低速匀 浆提取2 -3 m i n。将丙酮提取液再通过
10、滤纸滤入 旋转蒸发瓶中。用1 0 m L无水乙 醉洗涤滤纸，将洗液并入 滤液中。于5 0 水浴上旋转浓缩至干。3.4.2 净化 用1 0 m L正己 烷溶解残渣，将溶液移到1 2 5 m L 分液漏斗中。用1 0 m L正己 烷洗涤蒸 发瓶，洗液并s N 0 6 8 4 一 1 9 9 7入分液漏斗中。然后用2 X1 0 m L 磷酸溶液(1 m o l/L)洗涤蒸发瓶，洗液全部并入分液 漏斗中.剧烈振 摇提取2 m i n，静置1 0 m i n，使分层。将下层磷酸溶液转入第二个1 2 5 m L分液漏斗中。再用1 0 m L磷酸溶液(1 m o l/L)提取正己 烷层两次，将磷酸提取液 全
11、部并入第二个分液漏斗中.加1 0 m L 正己 烷到磷酸 提取液中，振摇洗涤3 0 s。将磷酸提取液放入1 0 0 m L的烧杯中，用约9 m L 氢氧化钾溶液(1 0 m o l/L)小心地调节p H到8.5(士1.0)。在碱化时，应将烧杯置于冰浴中，并用p H计测p H值.将烧杯中的溶液转入2 5 0 m L 分液漏斗中，用总量为5 0 m L 的乙 酸乙 酷分数次洗涤烧杯，洗液全部转入分液漏斗中.剧烈振摇提取2 m i n，静置分层。将水相放入1 0 0 m L烧杯中，然后将乙酸乙酷层通过衬有 玻璃棉 和约4 0 g 无水硫酸钠的 漏斗滤入2 5 0 m L 旋转蒸发瓶中。将烧杯中的 水
12、溶液倒回 分液漏斗中，再用5 0 m L 乙酸乙醋如法提取一次。弃去下层水溶液，将乙酸乙酷层通过无水硫酸钠漏斗并入同 一旋转蒸发瓶中。用2 5 m L 乙酸乙 醋洗涤无水硫酸钠漏斗，洗液并入蒸 发瓶中。置旋转蒸发器上(5 0 水浴)将提取液挥发至干。用3 m L 二氯甲 烷溶解残渣。用2 m L 二氯甲烷预淋硅胶小柱，然后将上述二氯甲 烷样液倒入硅胶柱中，用3 m L二氯甲烷洗涤蒸发瓶两次，洗液也倒人硅胶柱中，弃去流出液。以 5 mL二氯甲烷洗涤硅胶柱，弃去流出 液。用5 m L甲 醇一 二氯甲 烷(1+3)洗脱柱上奥芬 达哇，收集洗脱液于试管中。通氮气流将洗脱液挥发至干。准确加入。.5 m
13、L流动相(3.2.1 2)以 溶解残渣，溶液通过。.2 p m过滤器过滤后，供H P L C测定。3.4.3 HP L C测定3.4.3.1 液相色谱条件 a)色谱柱:L i c h r o s o r b R P-1 8,2 5 c m X 0.4 6 c m(内 径),5 F a m(粒径)，或相当 者;b)保护柱:L i c h r o s o r b R P-1 8,3 c mX 0.4 6 c m(内径),5 K m(粒径)，或相当者;c)H P L C 流动相:甲醇 一 磷酸按缓冲 液(5 5+4 5);d)检测波长:2 9 8 n m;e)流速:1.0 m L/m i n;f)进
14、样量:5 0 p L,3.4-3.2 测定 根据样液中被测兽药含量情况，选定峰高相近的标准工作溶液。标准工作液和待测样液中奥芬达哇的响应值均应在仪器检测的线性范围内。标准工作液与样液应等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，奥芬达哇的保留 时间约 为9.0 m i n;标准品的色谱图见附录A中图A l,3.4.4 空白试验 除不称取试样外，均按上述测定步骤进行。3.5 结果计算和表述 用色谱数据处理机或按式(l)计算试样中奥芬达哩的残留含量:X=h c Vh，.m(1)式中:X 试样中 奥芬达哇残留 含量，m g/k g;h 样液中奥芬达哇的色谱峰高,m m;凡 标准工作液中 奥芬达哇的 色谱峰
15、 高，m m;标准工作液中 奥芬达哇的 浓度，K g/m L;V 样液最终定容体积，ml;，最终样液所代表的试样量，9。注:计算结果需将空白值扣除。测定低限、回收率测 定低限s N 068 4一 199 7本方法的测定低限为。.0 2 m g/k g,回收率猪肉 中奥芬达哇的 添加浓度及其回收率的实验数据:0.0 2 m g/k g 时，回 收率为8 9.0 0 o i0.1 0 m g/k g 时，回 收率为，2.4 肠;1.0 0 m g/k g 时，回 收率为9 6.6 0 0 0S N 0 6 8 4 一1 9 9 7 附录A(提示的附录)标准品色谱图到汉称碱 的的0.6土图 A1 奥
16、芬达哇标准品的液相色谱图S N 0 6 8 4 一 1 9 9 7F o r e wo r d T h i s s t a n d a r d w a s d r a f t e d i n a c c o r d a n c e w i t h t h e r e q u i r e me n t s o f GB/T 1.1-1 9 9 3 D ir e c-t i v e s f o r t h e w o r k o f s t a n d a r d i z a t io n-U n i t 1:D r a f t in g a n d p r e s e n t a t i o n o f s t a n d a r d s-P a r t 1:G e n e r a lr u l e s f o r d r a f t i n g s t a n d a r t s a n d S N/T 0 0 0 1-1 9 9 5 G e n e r a l r u l e s f o r d r a f t in g t h e s t a n d a r d m e t h o
