1、SN中华人民共和国进出口商品检验行业标准s N 0 6 9 9 一 1 9 9 7出口肉及肉制品中黄体酮残留量 检验方法Me t h o d f o r t h e d e t e r mi n a t i o n o f p r o g e s t e r o n er e s i d u e s i n me a t s a n d me a t p r o d u c t s f o r e x p o r t1 9 9 7 一 1 2 一 0 1 发布1 9 9 8 一 0 4 一 0 1 实施中华人民共和国国家进出口商品检验局发 布S N 0 6 9 9 一1 9 9 7前言 本标准
2、是根据G B/T 1.1-1 9 9 3(标准化工作导则 第1 单元:标准的起草与表述规则 第1 部 分:标准编写的基本规定 及S N/T 0 0 0 1-1 9 9 5 出口 商品中农药、兽药残留量及生物毒素检验方法标准编写的 荃本规定 的要求而进行编写的。其中 测定方法是参 考国内外有关文献，经研究、改 进和验证后而 制定的.本标准同时制定了抽样和制样方法。测定 低限 是根据国际上对肉及肉制品中 黄体酮残留量的最高限量和测定方法的 灵敏度而制定的.本标准的附录 A是提示的附录。本标准由中华人民共和国国家进出口商品检验局提出并归口。本标准由中华人民共和国浙江进出口商品检验局负责起草.本标准主
3、要起草人:朱宏、郑 自强、朱晓雨、丁慧瑛。本标准系首次发布的行业标准。中 华人民共和国进出口 商品检验行业标准出口肉及肉制品中黄体酮残留量检验方法s N 06 99 一 1 997Me t h o d f o r t h e d e t e r mi n a t i o n o f p r o g e s t e r o n er e s i d u e s i n me a t s a n d me a t p r o d u c t s f o r e x p o r t范围本标准规定了出口肉及肉制品中黄体酮残留量检验的抽样、制样和气相色谱/质谱检测器测定方本标准适用于出口牛肉中黄体酮残留
4、量的检验。2 抽样和制样2.1 检验批 以不超过 2 5 0 0件为一检验批。同一检验批的商品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。2.2 抽样数量 批量，件最低抽样数，件 1 2 5 1 2 6 -1 0 0 5 1 0 1-2 5 0 1 0 2 5 1-5 0 0 1 5 5 0 1 1 0 0 0 1 7 1 0 0 1 2 5 0 0 2 02.3 抽样方法 按2.2 规定的抽样件数随机抽取，逐件开启。从每件内 取一袋作为 原始样品，原始样品总量不少于2 k g。放入清洁容器内，加封 后，标明 标记，及时 送交实验室。如每件中 无小包装，或有小包装但重量超过2 k g
5、者，则可用灭 菌锋利刀在抽出的包件中，每件割取不少于1 0 0 g。混合后置于清洁容器内，作为混合原始样。混合原始样的重量不少于2 k g。加封后，标明标记，及时送交实验室。2.4 试样制备 从 所取原始样品中缩分出1 k g，经捣碎机充分捣碎均匀，均分成两份，分别装入洁净容器内作为试样。密封并标明标记。2.5 试样保存 将试样于一1 8 以下冷冻保存。注:在抽祥和制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化.中华人民共和国国家进出口商品检验局1 9 9 7-1 2-0 1 批准1 9 9 8 一 0 4 一 0 1 实施 IS N 0 6 9 9 一1 9 9 73 测定方法
6、3.1 方法提要 用甲 醇一 水混合溶液提取试样中的黄体酮，提取液经过滤、加氯化钠溶液后，用二氛甲 烷抽提。二抓甲 烷提取液经脱水后浓缩，残渣用甲醇溶解。甲醇 溶液经用正己烷抽提以去除杂质，再与二 抓甲 烷液液分配，使被R 11 物进入二氯甲 烷层.二氛甲 烷溶液 经浓缩、定容后，用配有质谱检测器的气相色谱仪测定，外标法定量。3.2 试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。3.2.1 甲 醇:重蒸馏。3.2.2 二抓甲烷:重蒸馏.3.2.3 正己烷:重燕馏。3.2.4 氯化钠溶液:1 0 0 0，将1 0 0 g 氯化钠溶于1 0 0 0 m L 水中。3.2.5 混合提取液
7、:甲醉一 水(8 0 十2 0),3.2.6 无水硫酸钠:6 5 0 C 灼烧4hr于干燥H中备用。3.2.7 黄体酮标准品:纯度i8 8%,3.2.8 黄体酮标准溶液:准确称取适量的黄体酮标准品，用甲醇配成浓度为。.1 0 m g/m L的标准储备液，根据需要再用甲醇稀释成适当浓度的标准工作液。3.3 仪器和设备3.3.1 气相色谱仪:配有质谱检测器 和毛 细管不分 流进样系统。3.3.2 振荡机，3.3.3 旋转蒸发器。3.3.4 分液 漏斗:2 5 0 m L,3.3.5 三角烧瓶:1 0 0 m L,3.3.6 硫酸钠柱:7.5c mX1.5 c m(内径)，内装 5 c m高无水硫酸
8、钠。3.3.7 浓缩瓶:1 5 0 mL,3.3.8 离心管:1 0 mL,3.3.9 微量注射器:1 0 k L,3.4 测定步骤3.4.1 提取和净化 称取约1 0 g 试样(精确至。.1 g)置于1 0 0 m L锥形瓶中，加入3 0 m L 混合提取液，振荡 提取3 0 m in,过滤。残渣用3 0 m L 混合 提取液，再提取一次。滤液合并于2 5 0 m L分液漏斗中，加人5 0 m L 氯化钠溶液，用4 0 m L,1 0 m L二氯甲烷提取两次。合并二氯甲 烷层，过无水硫酸 钠柱脱水，收集流出液，于4 5 C水浴上 旋转 浓缩至近干。加5 m L甲 醇以 溶解残 渣，并将溶液转
9、移至1 0 m L离心管中。加1 m L 正己 烷和 1.5 mL水，充分混匀，于2 0 0 0 r/mi n 离心 2 min弃去正己烷层。再加入 1 m L正己烷，混匀，离心，弃去正己烷层。加 1 mL二氯甲烷，再加水至 1 0 mL，充分混匀，于2 0 0 0 r/mi n 离心 2 mi n。将二抓甲烷层转 入另 一支离心管中。水相再用1 m L 二氮甲 烷提取一次，合并 二级甲烷层。用氮气流吹至近干后，加二氯甲烷并定容到 1.0 0 m L，供气相色谱/质谱检测器测定。3.4.2 测定3.4.2.，气相色谱/质 谱条件 a)色谱柱:H P-1,1 2 rn X 0.2 m m(内 径
10、)X O.2 5 JA M(膜厚)，石英毛细管柱;b)载气:氦气.纯度)9 9.9 9 写;1.0 mL/min;c)柱 温:程 序 升 温,6 0 C(2 m in)竺 竺红2 5 0 C 上 二 竺 吸 2 8 0 C(5 m in);S N 0 6 9 9 一 1 9 9 7 d)进徉口温度:2 5 0 C;。)色谱一 质谱接口温度:2 8 0 C;f)进样方式:无分流进样.I m i n 后开阀;g)电 离方式:电子轰击电 离(E D;h)电离能量;7 0 e V;i)测定方式:选择离子监测方式(S I M);1)选择监测 离子(m/z),3 1 4,2 7 2 a m u;k)溶剂延
11、迟:1 2 mi n;D进样量:2 u L.3.4-2.2 气相色谱/质谱测定 根据样 液中黄体酮含量情况，选定浓度相近的标准工作溶液。标准工作溶液和祥液中黄体酮响应 值均应在仪器 检测线 性范围内。对标准 工作溶液和样液等体积参插进样测定。在 上述气相色谱/质谱条件下，黄体酮的保留时间约为 1 4 mi n。标准品的选择监测离子的总离子色谱图见附录A中图Al.3.4.3 空白试验 除不加试祥外，均按上述测定步骤进行。3.5 结果计算和表述 用色谱数据处理机或按式(功计算试样中黄体酮残留含量:A,m(1)式中:X试样中黄体酮的残留含量,mg/k g;A 样液中黄体酮的峰面积，m m;人标准工作
12、溶液中黄体酮的峰面积,mm 2;标准工作溶液中黄 体酮的 浓度，,g/ml,;V 样液最终定容的体积，m L;m 最终样液所代表的 试样量,g.注:计算结果需扣除空白值测定低限、回收率4.1 测定低限 本方法的测定低限为。.0 0 3 m g/k g.4.2 L 7 收率 牛肉中黄体酮的添加浓度及其回收率的实验数据:在0.0 0 3 m g/k g 时，回 收率为9 7.0 0 0;在0.0 1 0 m g/k g 时，回 收率为9 6.3%;在0.0 3 0 m g/k g 时.回 收率为9 6.7%.S N 0 6 9 9 一 1 9 9 7 附录A(提示的附录)标准品色谱图戈闰曰1留址扭
13、图A1 黄体酮标准品的选择监测离子的总离子色谱图S N 0 6 9 9 一1 9 9 7Fo r e wor d T h i s s t a n d a r d w a s d r a f t e d i n a c c o r d a n c e wi t h t h e r e q u i r e me n t s o f t h e G B/T 1.1-1 9 9 3 D i r e c t i v e sf o r t h e w o r k o f s t a n d a r d i z a t i o n-Un i t 1:Dr a f t in g a n d p r e s e
14、 n t a t io n o f s t a n d a r d s-P a r t 1:G e n e r a l r u l e sf o r d r a f t i n g s t a n d a r d s a n d S N/T 0 0 0 1-1 9 9 5 G e n e r a l r u l e s f o r d r a f t i n g t h e s t a n d a r d m e t h o d s f o r t h ed e t e r min a t io n o f p e s t i c i d e,v e t e r i n a r y d r u
15、 g r e s i d u e s a n d b i o t o x i n s i n c o mm o d it i e s f o r e x p o r t .T h em e t h o d o f d e t e r m i n a t io n w a s d r a f t e d b y r e f e r r i n g t o r e l e v a n t d o m e s t i c a n d f o r e i g n l it e r a t u r e s t h r o u g hr e s e a r c h,m o d i f i c a t io
16、 n a n d v e r i f i c a t io n.I n a d d i t io n,me t h o d s o f s a mp l i n g a n d s a m p l e p r e p a r a t i o n a r e a l-s o s p e c i f ie d i n t h i s s t a n d a r d.Th e l i mi t o f d e t e r mi n a t i o n i n t h i s s t a n d a r d i s d e f i n e d o n t h e b a s is o f t h e c u r r e n t i n t e r n a t i o n a lma x i m u m l i m i t s f o r p r o g e s t e r o n e r e s id u e s i n m e a t s a n d me a t p r o d u c t s a n d t h e s e n s i t i v i t y o f t h eme t
