1、SN中华人民共和国进出口商品检验行业标准S ti 0 2 9 4一9 3出口贝类腹泻性贝类毒素检验方法?Me t h o d f o r t h e d e t e r mi n a t i o n o f d i a r r h e t i c s h e l l f i s h p o i s o n i n s h e l l f i s h f o r e x p o r t1 9 9 3 一 1 2 一 2 8 发布1 9 9 4 一 0 5 一 a 1 实施中华人民共和国国家进出口商品检验局发 布中华人民共和国 进出口商品检验行业标准出口贝类腹泻性贝类毒素检验方法S N 0 294
2、 一 9 3M e t h o d f o r t h e d e t e r m i n a t i o n o f d i a r r h e t i c s h e l l f i s h p o i s o n i n s h e l l f i s h f o r e x p o r t1 主题内容与适用范围 本标准规定了 海产双壳类贝肉、贝柱、外套膜及其制品 的腹泻性贝 类毒素 检验方法。本标准适用 于海产 双壳类贝肉、贝柱、外套膜及其制品 的腹泻性贝 类毒素的 检验。2 引用标准 G B 4 7 8 9.2 6 罐头食品商业无菌的 检验 Z B B 5 0 0 0 1 出口水产品
3、检验抽样方法 Z B B 5 0 0 0 4 出口冷冻水产品解冻方法3 检验批 同一检验批的商品应具有相同特征，如产地、规格等。4 样品的保存4.1 样品要有充分 的代表性并尽可能没有个体差异。同时，还要有充分的个数。去 壳贝肉、带壳的或罐装的 等，均应采取足 够的个数并使贝肉 达2 0 0 9 以 上。4.2 远离实验室，不能及时送检的样品，除了在常温下品质不会发生变化的，应将样品置于合成树脂袋内冷冻送检。如为带壳祥品，应按 53 的方法开壳，去除水分后冷冻送检。5 样品的制备5.1 生鲜带壳样品，用刀切开闭壳肌开壳取出贝肉。不得以加热及加药物的 方法开壳。注意不要破坏闭 壳肌以 外的组织，
4、尤其是中肠 腺(又称消化盲囊，组织呈暗绿色或褐绿色).将去 壳贝肉 放在孔径约2 m m的金 属网上，控水5 m i n，按5.4 或5.5 制备检 样。5.2 冷冻的带壳 样品，使其在室温下呈半冷冻状态后，以 前述方法开壳取肉，这时的贝肉 仍呈冷冻状态。经除去贝肉 外部附着的冰片，轻轻抹去水分 后，按5.4 或55 制备样品。5.3 事先已 去除水 分的冷冻去壳贝肉，按5.4 或5.5 制备 样品。54 扇贝、贻贝、牡蝎等可以切 取中肠腺的去壳贝肉，称量2。9 贝肉 重量后 仔细切取全部中肠腺，将中 肠腺称重后细 切混合做为检样。同时，注意不要使中肠腺内容物污染案板。5.5 对不便切取中肠
5、腺的去壳贝肉 祥品，可将全部贝肉 细切、混合，做为 检样。56 为避免毒素的 危害，应戴手套进行检验操作。移液管等用过的器材应在5%的次氯酸钠溶液中浸泡1 h 以上，以 使毒素分解，同样，废弃的提取液等也应以上述溶液处理。中华人民共和国国家进出口商品检验局1 9 9 3-1 2-2 8 批准1 9 9 4 一 0 5 一 0 1 实施 IS N 0 29 4一 936 测定方法6.，方法提要 用 丙酮提取贝 类中毒 索，再转移至乙 醚中，经减压浓缩至千后，再以1%吐温6 0 生 理盆水 溶解残留物注射 小白鼠观察存活情况，计算其毒力。62 试剂和材料621 丙酮(分析纯)。6 2.2 乙醚(分
6、析纯)。6.2.3 1%吐温6。生理盐水。6.3 仪器和设备63.1 旋转蒸发器。6.3.2 均质器。6.3.3 天平:感量。.1 g o6.3.4 刻度试管:1 5 m L，具0.2 m L 刻度。6.3.5 冰箱:0-5 和一1 5-2 0 C.6.3.6 注射器:I m L,63，7 注射器针头:8 ,6.3.8 体重为 1 6 2 0 g 的健康 I C R系雄性小白鼠。6。4 测定步骤641 提取6.4.1.1 将检样置于均质杯内，加 3 倍量丙酮至少均质 2 mi n。如为小均质杯，可分两次操作。6412 用布氏漏斗抽滤并收集提取液。64.1.3 对残渣以检样两倍量丙酮再抽滤两次，
7、合并抽滤液，6.4.1.4 将抽提液移人旋转蒸发瓶内，减压浓缩去除丙酮直至在液体表面分离出油状物。6.4.1.5 将浓缩物移入分液漏斗内，以 1 0 0-2 0 0 mL乙醚和少量的水洗下粘壁部分，以不生成乳浊液的程度轻轻振荡，静置分层后去除水层。6.4.1.6 用相当乙醚半量的蒸馏水洗醚层两次，再将醚层移入 3 0 0-5 0 0 m L的茄形瓶中，减压浓缩去除乙醚。6.4.1.7 以少量乙醚将浓缩物移入 5 0或工 0 0 m L茄形瓶中，再次减压浓缩去除乙醚.6.4.1.8 以 I%吐温 6。生理盐水将全部浓缩物在刻度试管中稀释到1 0 m L。按 5.4 条以中肠腺做为检样的，此时工
8、m L液量相当于预先测定的2 0 g 去壳贝肉的重量。对 其他检 样，此时1 m L液量 也相当 于2 0 g 去壳贝肉的 重量，以此悬浮液做为试验溶液。6.4.19 如必要时，对试验溶液可 做进一步稀释，稀释前，应先以振荡器使试液成均一悬浮液，再取其部分以1%吐温6 0 生理盐水稀释成4 倍或1 6 倍的试液。6.4.2 小白鼠试验6.4.2.1 以 振荡器使 试液或其稀释 液成为 均一的悬浮液.6.4.2.2 分别将1 m L 试液注射到三只体重1 6-2 0 g 的健康1 C R系 雄性小白鼠 腹腔中。6.4.2.3 按上项 方法，注射1%吐 温6 0 生理盐水，做为阴性对照。6.4.2
9、.4 观察自 注射开始到2 4 h 后的小白鼠 存活情况，求出 一组三只中 死亡两只以上的最小注 射量。6.4.2.5 小白鼠 注射腹泻性贝毒后的症状为运动不活泼，大多呼吸异常，致死时间长(也有2 4 h 以上的)。6.5 结果计算和表述6.5，毒力的计算S N 0 2 9 4 一9 3 使体重1 6 -2 0 g 的小白鼠在2 4 h 死亡的毒力为1 个小白佩单位(MU)，实际小白鼠单位的计算;按下表从一组 三只中 二只以 上在2 4 h内 死亡的最小注射量及最大稀释倍数进行计算。6.5.2 注射量与毒力的关系 注射量与毒力的关系试验液注射t .L检 样 量 1 1 g毒力MU/g 原 液
10、原 液4倍稀释液4倍稀释液1 6 倍稀释液1 6 倍稀释液1.00.51.00.51.00.5 2 0 1 0 5 2.51.2 50.6 2 50.0 50.10 1 20.40.81.6注:1)以中肠腺为检样时，相当于含有中肠腺的去壳贝肉量.附加说明:本标准由中华人民共和国国家进出口商品检验局提出。本标准由中华人民共和国辽宁进出口商品检验局负责起草。本标准主要起草人唐守亭、王曦、秦城。本标准等同采用日本厚生省 1 9 8 1 年 5 月 1 9日公布的方法。P r o f e s s i o n a l S t a n d a r d o f t h e P e o p l e s R e
11、 p u b l i c o f C h i n a f o r I m p o r t a n d E x p o r t C o mm o d i t y I n s p e c t i o nS N 0 2 9 4 一9 3Me t h o d f o r t h e d e t e r mi n a t i o n o f d i a r r h e t i c s h e l l f i s h p o i s o n i n s h e l l f i s h f o r e x p o r t1 S c o p e a n d f ie l d o f a p p l i c a
12、 t i o n T h i s s t a n d a r d s p e c i f i e s t h e me t h o d f o r t h e d e t e r mi n a t i o n o f d i a r r h e t i c s h e l l f i s h p o i s o n in s h e l l f is hs h e l l e d,a d d u c t o r a n d ma n t l e o f b i v a l v e d mo l l u s c s a n d t h e i r p r o d u c t s T h e m
13、e t h o d a p p l i e s t o t h e p o is o n d e t e r mi n a t i o n o f s h e l l f i s h s h e l l e d,a d d u c t o r a n d m a n t l e o f b i-v a l v e d m o l l u s c s a n d t h e i r p r o d u c t s.2 S t a n d a r d c i t e dGB 4 7 8 9.2 6 E x a mi n a t i o n o f c o mme r c i a l s t e r
14、 i l i z a t i o n o f c a n n e d f o o dZ B B 5 0 0 0 1 S a mp l i n g me t h o d o f e x p o r t e d a q u a t i c p r o d u c t sZ B B 5 o 0 0 4 T h a wi n g me t h o d o f e x p o r t e d f r e e z i n g a g u a t i c p r o d u c t s3 I n s p e c t i o n l o t T h e c o mm o d i t y o f t h e s
15、 a m e l o t s h o u l d h a v e t h e s a m e c h a r a c t e r i s t i c s,s u c h a s t h e p l a c e o f o r i g i n,s p e c i f ic a t i o n s,e t c.4 S t o r a g e o f s a mp l e4.1 T h e s a mp l e mu s t b e r e p r e s e n t a t i v e,w i t h a s l e s s d i f f e r e n c e a mo n g t h e i
16、 n d i v i d u a l s a s p o s s i b l e.T h e r e s h o u l d b e e n o u g h s h e l l f i s h,s h u c k e d o r c a n n e d,t h e s h e l l f i s h s h e l le d b e o v e r 2 0 0 g.4.2 S a m p l e s t h a t c a n n o t b e d e l iv e r e d t o t h e l a b o r a t o r y in t ime s h o u l d b e c o l l e c t e d i n p o l y t h y l e n eb a g s a n d k e p t f r o z e f o r f u r t h e r e x a m i n a t i o n,u n l e s s t h e y c a n s t a y s t a b l e a t n o ma l t e mp e r a t u r e.I f t
