1、S“中华人民共和国出入境检验检疫行业标准S N/T 1 7 4 9-2 0 0 6鲜乳中菌落总数快速测定阻抗法R a p i d d e t e c t i o n o f a e r o b i c b a c t e r i a l c o u n t i n r a w mi l k-I mp e d a n c e me t h o d2 0 0 6-0 1-2 6发布2 0 0 6-0 8-1 6实施中华人民共和匡国 家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 周S N/T 1 7 4 9-2 0 0 6前 .J.曰本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共
2、和国广东出人境检验检疫局。本标准主要起草人:高东微、李志勇、易敏英。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。S N/T 1 7 4 9-2 0 0 6鲜乳中菌落总数快速测定阻抗法范围本标准规定了鲜乳中菌落总数 的阻抗快速测定方法。本标准适用于各类鲜乳菌落总数的测定。2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。G B/T 4 7 8 9.2-2 0 0 3 食品 卫生
3、徽生物学检验 菌落总数到定 G B/T 4 7 8 9.1 8-2 0 0 3 食品卫生徽生物学检验 乳与乳制品检验3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。3.1 鲜乳r a w m i l k 从正常饲养的、无传染病和乳房炎的健康哺乳动物乳房内挤出的正常乳房分泌物，无添加物且未从其 中提取任何成分。3.2 菌落总数a e r o b i c b a c t e r i a l c o u n t 按G B/T 4 7 8 9.2-2 0 0 3中3.1 的规定。3.3 阻抗测定时间i m p e d a n c e d e t e ct t i m e,D T 由于微生物活动引起培养基中
4、阻抗变化至能被仪器检侧记录的时间，简称D T,4 原 理 微生物生长代谢将培养基中蛋白质和碳水化合物转变为氨基酸及乳酸等，引起培养基电阻抗微弱变化，可由阻抗检测仪器记录成DT值。DT值与样品微生物污染程度在一定范围内存在相关关系。建立D T值与菌落总数之间的标准曲线及回归方程。利用该标准曲线和回归方程，并通过测定样品DT值，计算出样品菌落总数。5 设备和材料5.25.35.45.5阻抗检测器:B A C T O ME T E R.M6 4 或M1 2 8，或具有同等检测功能的其他阻抗检测器。反应池:用于制备反应板，配套阻抗检测器使用。微量移液器:2 0 p.L-2 0 0 Ii L,T i p
5、 头:配套微量移液器使用。其他设备和材料:按G B/T 4 7 8 9.2-2 0 0 3中第4 章和G B/T 4 7 8 9.1 8-2 0 0 3中第3 章的规定。S N/T 1 7 4 9-2 0 0 66 培养墓和试荆6.1 改良营养琼脂培养墓(MP C A)6.1.1 成分 改良 营养琼脂培养基(MP C A)5 4 g 蒸馏水1 0 0 0 mL6.1.2 制法 将上述成分配好，加热煮沸溶解，分装后 1 2 1 C高压灭菌1 5 mi n,6.2 其他培养基和试荆 按G B/T 4 7 8 9.2-2 0 0 3中第 5 章的规定。7 反应 板7.1 反应板的制备 无菌操作，在反
6、应池中每孔加人 1.0 mL经沸水浴加热融化的改良营养琼脂培养基或营养琼脂培养基，静置至冷凝固化。制好的反应板用塑料袋封好并贮 冰箱冷藏格内，宜 于 1 5 d以内使用。反应板使用前从冰箱取出并先恢复至室温再做实验。7.2 反应板的使用 利用反应板对检样进行培养和阻抗测定，按照8.3 的操作步骤进行。反应板中的每个反应板孔为一次性使用。如果一次检测未能使用完一块反应板中全部的反应板孔，可在检测结束后将该反应板重新贮冰箱冷藏格内，尚未使用的反应板孔可在下次检测时使用。全部反应板孔均使用后，反应板1 2 1 C高压灭菌 1 5 mi n 后丢弃。日 操作步骤 以B A C T O M E T E
7、妙 为例。其他阻抗检测器按照仪器操作说明进行操作。8.1 标准曲线的绘制和预测方程的建立8.1.1 标准 曲线的绘制8.1.1.1 制备鲜乳标准品8.1.1.1.1 取奶场未经任何加工处理的新鲜鲜乳作为污染程度高的标准品，取经过加热或冷却加工处理的新鲜鲜乳作为污染程度低的标准品。8.1.1.1.2 按照不同比例，混合污染程度高的标准品和污染程度低的标准品，得到一系列污染程度从高到低不 同的鲜乳标准品。8.1.1.2 采集标准曲线的数据点8.1.1.2.1 对系列污染程度不 同的鲜乳标准品分别进行平板菌落计数，培养温度 3 0 士1 C，其余按G B/T 4 7 8 9.2-2 0 0 3,8.
8、1.1.2.2 同时对系列污染程度不同的鲜乳标准品分别按照 8.3 的操作步骤进行阻抗测定，培养温度3 0 士1 C，记录各标准品D T值。8.1.1.3 绘制标准曲线 以系列鲜乳标准品阻抗测定 DT值(h)为横坐标，以相应平板菌落计数结果(c f u/m L)的对数为纵坐标，利用阻抗检测器内置程序 自动绘制标准曲线。标准曲线 的数据点应不少于 2 0 0 个并在标准 曲线上分布均匀。数据点对应 的平板菌落计数结果应覆盖至少 5 个一6 个数量级，并包含该类鲜乳菌落总数容许限量。8.1.2 预测方程的建立8.1.2.1 预测方程的推导:阻抗检测器根据标准 曲线的数据点 自动进行 回归分析，推导
9、 出预测方程。zS N/T 1 7 4 9-2 0 0 68.1.2.2 预测方程的使用:对检样测定时，必须选用利用同类鲜乳标准品制作的标准曲线和预测方程。否则，由于奶源不同、处理工艺不同和其他因素，可能导致测定结果的人为误差.8.1.2.3 预测方程的校正:预测方程相关系数的绝对值应大于0.8 5，否则应根据标准曲线的实际状况适当增加数据点，优化相关系数。另外，预测方程还应定期通过增加标准曲线的数据点进行校正，数据点的更新应保证每3 个月不少于2 0 个点。8.2 样品的采取和送检 按 G B/T 4 7 8 9.1 8-2 0 0 3中 5.1 的规定。8.3 检样的培养和测定8.3.1
10、预热阻抗检测器至反应仓温度稳定在 3 0 士1 0 C,8.3.2 运用阻抗检测器配套软件编写并保存运行程序，包括选用的检测类型代号、每个反应板孔对应样品编号和培养条件。8.3.3 检样经充分振摇均匀后，无菌操作，用微量移液器吸取 1 0 0 IL L置于反应板孔内，每个检样加样2 孔。注意运行程序 中反应板孔样品编号与实际加样情况对应。8.3.4 加样后立即把反应板插人阻抗检测器反应仓卡槽，关闭仓门，运行仪器。8.3.5 仪器在运行中自动检测并记录检样D T值。8.4 菌落总数的报告8.4.1 菌落总数的计算8.4.1.1 通过预先设置的检测类型，阻抗检测器自动将检样DT值代人相应预测方程，
11、计算出检样中的菌落总数。8.4.1.2 或者利用所绘制的标准曲线和相应预测方程，手工计算出检样DT值对应的菌落总数。8.4.2 菌落总数的报告方式 按 G B/T 4 7 8 9.2-2 0 0 3中 7.3.3的规定。900闪10甘卜一牡25中华人民共和国出人境检验检疫 行业标准鲜乳中菌落总数快速测定阻抗法 S N/T 1 7 4 9-2 0 0 6 中 国 标 准 出 版 社 出版 北京复兴门外三里河北街 1 6 号 邮政编码:1 0 0 0 4 5 网址 w w w.b z c b s.c o m 电话:6 8 5 2 3 9 4 6 6 8 5 1 7 5 4 8中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本 8 8 0 X 1 2 3 0 1/1 6 印张 0.5 字数 7千字2 0 0 6 年 5 月第一版2 0 0 6 年 5 月第一次印刷 印数 1-2 0 0 0S N/T 1 7 4 9-2 0 0 6
