1、书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛 犖犜 进出口乳及乳制品中四环素类药物残留检测方法放射受体分析法犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 狋 犲 狋 狉 犪 犮 狔 犮 犾 犻 狀 犲 狊 狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀犿 犻 犾 犽犪 狀 犱犱 犻 犪 狉 狔狆 狉 狅 犱 狌 犮 狋 狊犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犚 犪 犱 犻 狅 狉 犲 犮 犲 狆 狋 狅 狉犿 犲 狋 犺 狅 犱 发布 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布书书书前言本标准的附录 为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出
2、并归口。本标准起草单位：中华人民共和国广东出入境检验检疫局。本标准主要起草人：陆勤、林峰、张美金、孙良娟、李红权。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。犛 犖犜 进出口乳及乳制品中四环素类药物残留检测方法放射受体分析法范围本标准规定了进出口乳及乳制品中四环素类药物残留测定的制样和放射受体分析方法。本标准适用于鲜奶、奶粉、乳清粉中四环素、土霉素、金霉素、强力霉素药物残留的筛选检测。规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新
3、版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。分析实验室用水规格和试验方法试样制备和保存 试样制备从混合原始样品中取出部分代表性样品，奶粉、乳清粉不少于 ，鲜奶不少于 ，均分两份，装入洁净容器内作为试样，加封并标明标记。制样过程中应防止样品受到微生物或化学物的污染或发生残留物含量的变化。试样保存干粉样品室温密封保存，液体样品冷藏可保存，以下冷冻可保存个月。检测方法 方法提要测定的基础是竞争性受体免疫反应。当样品中含有四环素类抗生素时，样品中四环素类抗生素残留物与受体上的结合位点结合，从而阻止了 标记的四环素与受体试剂位点的结合。样品中的四环素类药物含量越高，竞争的结合位点越多，标记的四
4、环素结合的则越少，用液体闪烁计数仪测定样品中 含量的 值（，即每分钟脉冲数）越低。样品中四环素类抗生素残留量与 值成反比。试剂与材料除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为 规定的一级水。牛奶中的四环素类抗生素 放射免疫试剂盒（）：药片标识为。）牛奶中四环素类抗生素竞争性受体结合测试试剂盒是由 公司提供产品的商品名称。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。受体试剂药片：于 以下冷冻保存。标记的四环素药片：于 以下冷冻保存。阴性对照奶粉：被证实不含抗生素的奶粉。土霉素标准品。闪烁液。犛 犖犜 硅硼酸盐玻璃试管及试管塞。具
5、塞塑料离心管，。药片压杆。仪器和设备 液体闪烁计数仪：分析仪。分析天平：感量为 和 。离心机：大于 。涡旋混合器。恒温加热器：，。微量移液器：，。检测步骤 阴性对照和阳性对照溶液的准备 阴性对照溶液的配制：取试剂盒中阴性对照奶粉（）约 加 温水 溶解，放置在冰浴中待测。阳性对照溶液的配制：在阴性对照溶液（）中加入土霉素标准品，溶解后的阳性对照液中含 的土霉素。放置在冰浴中待测。样品前处理 液态奶：取 牛奶，离心 ，除去上层脂肪层。冰浴至待测。奶粉、乳清粉：称取 样品，加水 溶解。冰浴至待测。检测 取出检测试剂片，将受体试剂药片（）加入硅硼酸盐玻璃试管中。加入 水，置于涡旋混合器上振荡 将药片溶
6、解。将 牛奶样品，或阴性对照溶液（）或阳性对照溶液（）加入试管中，在涡旋混合器上振荡，使之混匀。加 标记的四环素药片（），在涡旋混合器上振荡，使之混匀。置于恒温加热器中 保温 。取出试管，离心 ；立即从离心机中取出试管，弃去上层液体。倒置，用棉签擦去脂肪环并吸干液体，注意勿触及沉淀物。加 水，混匀，将沉淀物在涡旋混合器上打碎。加 闪烁液（）至试管中，盖上盖子，在涡旋混合器上混匀。在液体闪烁计数分析仪的 频道进行 计数，打印计数结果。控制点的确定 控制点是判断样品阴性与初筛阳性的一个界定值，可根据筛选水平自行设定。正常情况下，新批号应设定一个新的控制点。按方法 测定个非重复的阳性对照溶液（）（含
7、土霉素 ）的计数值，求出平均值乘上系数 ，即为筛选水平的控制点。若筛选水平确定为 （以土霉素计），初筛阳性样品可以用阴性对照液（）稀释倍（一份样品加入份阴性牛奶）测定 值，将测定后的 值与控制点比较。结果判定 当样品的 值大于控制点时，判定为“阴性”。即样本中四环素类含量低于筛选水平。当样品的 值等于或小于控制点，视为“初筛怀疑阳性”，此时应重新测定样品、阴性对照液和阳性对照液的 值。当阴性对照液和阳性对照液的 值在正常范围波动（参见附录），样本测犛 犖犜 试结果 值大于控制点，判定为“阴性”；若样本 值仍等于或小于控制点，则判定样品为“筛选阳性”。确证试验如被测样品中四环素类抗生素残留筛选结
8、果为初筛阳性的，应用其他方法进行确证。检测限检测限见表。表检测限抗生素样品鲜奶（）奶粉、乳清粉（）四环素 土霉素 金霉素 强力霉素 犛 犖犜 附录犃（资料性附录）仪器和试剂的日常监控犃 试剂的监控犃 每一批新的试剂需测定零基准平均值，测定三次阴性对照液 值，其平均值即为零基准平均值。当遇到样品“初筛怀疑阳性”时，通过测定阴性对照液（）和阳性对照液（）值与零基准平均值的 值比较，可确定试剂和液体闪烁计数仪是否正常。犃 正常情况下，阴性对照测定值一般在零基准平均值上下波动，幅度约。犃 正常情况下，阳性对照测定值小于控制点。犃 如果 或 条件不符，应重新测定零基准平均值和控制点，并重新测定样品。犃
9、新购试剂应首先检测阳性对照和阴性对照的比值，若比值小于，表明试剂有效，可以进行检测；若比值大于，表明试剂失效。犃 仪器的监控犃 液体闪烁计数仪零点校准取空的专用试管放入液体闪烁计数仪计数，计数值需小于，否则需调零。如测得的计数值偏大，可能由液体闪烁计数仪有大量静电存在所引起，可用湿抹布将试管外壁湿润后放入液体闪烁计数仪进行测定，重复几次后可以达到正常值。犃 通道校准取 标记的磺胺片剂加入玻璃试管，加 水到试管内，振荡使沉淀物完全破碎。加 闪烁液到试管内涡旋混匀至试管内没有不均的云状物。将试管放入液体闪烁计数仪内，读 项和 通道的计数值。通道的计数值应大于 ，且 与 通道的计数值的比值应小于。犃
10、 阴性样品的监控如果原奶、经巴氏消毒的牛奶或奶粉，测得的 值在阴性对照的 值 范围内波动，可认为其不含四环素类抗生素。可作为阴性对照使用。犃 分析条件的监控犃 测试的环境温度为，湿度：。犃 每次同时运行 个样品最佳。犛 犖犜 犉 狅 狉 犲 狑 狅 狉 犱犃 狀 狀 犲 狓犃狅 犳 狋 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犻 狊犪 狀 犻 狀 犳 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狏 犲犪 狀 狀 犲 狓犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊狆 狉 狅 狆 狅 狊 犲 犱犫 狔犪 狀 犱狑 犪 狊狌 狀 犱 犲 狉 犮 犺 犪 狉 犵 犲狅 犳犖 犪 狋 犻 狅 狀 犪 犾 犚 犲
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15、狉 犪 犮 狔 犮 犾 犻 狀 犲、犆 犺 犾 狅 狉 狋 犲 狋 狉 犪 犮 狔 犮 犾 犻 狀 犲犪 狀 犱犇 狅 狓 狔 犮 狔 犮 犾 犻 狀 犲狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀犳 狉 犲 狊 犺犿 犻 犾 犽，犿 犻 犾 犽狆 狅 狑 犱 犲 狉犪 狀 犱狑 犺 犲 狔狆 狅 狑 犱 犲 狉 犖 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狏 犲狉 犲 犳 犲 狉 犲 狀 犮 犲 狊犜 犺 犲犳 狅 犾 犾 狅 狑 犻 狀 犵狀 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狏 犲犱 狅 犮 狌 犿 犲 狀 狋 狊 犮 狅 狀 狋 犪 犻 狀狆 狉 狅 狏 犻 狊 犻 狅 狀 狊狑 犺 犻 犮 犺，狋 犺 狉 狅 狌
16、犵 犺 狉 犲 犳 犲 狉 犲 狀 犮 犲 狊 犻 狀 狋 犺 犻 狊 狋 犲 狓 狋，犮 狅 狀 狊 狋 犻 狋 狌 狋 犲狆 狉 狅 狏 犻 狊 犻 狅 狀 狊狅 犳 狋 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犉 狅 狉犱 犪 狋 犲 犱狉 犲 犳 犲 狉 犲 狀 犮 犲 狊，狊 狌 犫 狊 犲 狇 狌 犲 狀 狋犪 犿 犲 狀 犱 犿 犲 狀 狋 狊狋 狅，狅 狉 狉 犲 狏 犻 狊 犻 狅 狀 狊狅 犳，犪 狀 狔狅 犳 狋 犺 犲 狊 犲狆 狌 犫 犾 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀 狊犱 狅狀 狅 狋犪 狆 狆 犾 狔 犎 狅 狑 犲 狏 犲 狉，狆 犪 狉 狋 犻 犲 狊狋 狅犪 犵 狉 犲 犲 犿 犲 狀 狋 狊犫 犪 狊 犲 犱狅 狀狋 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犪 狉 犲犲 狀 犮 狅 狌 狉 犪 犵 犲 犱狋 狅 犻 狀 狏 犲 狊 狋 犻 犵 犪 狋 犲 狋 犺 犲狆 狅 狊 狊 犻 犫 犻 犾 犻 狋 狔狅 犳 犪 狆 狆 犾 狔 犻 狀 犵 狋 犺 犲犿 狅 狊 狋 狉 犲 犮 犲 狀 狋 犲 犱 犻 狋 犻 狅 狀 狊狅 犳 狋 犺 犲狀 狅
