1、SN/T1868-2007有约10I水的烧杯中并搅拌使其溶解，移入容量瓶并用水定容：溶液保存在棕色瓶中并于4冷藏。2.2.22苯甲酸。2.2.23无水葡萄糖标准品：纯度99%。2.2.24葡萄糖标准储备液：将无水葡萄糖于40真空烘箱中干燥4h。冷却后称取1.0000g葡萄糖于烧杯内，加入1g苯甲酸防腐，用水溶解并转移至1L容量瓶内，用水稀释定容。葡萄糖储备液中葡萄糖浓度为5.56mol/mL。2.2.25试管：13mm100mm,具有螺旋盖。2.2.26 Poly-prep层析柱：称取0.1g(准确至0.001g)DEAE Sephadex A-25树脂装填入Poly-prep层析柱。柱下装好
2、活塞，使活塞处于关闭。在每支层析柱上沿柱壁加入10mL水，打开活塞，使约2m水流过柱的填充料部分。关上活塞，将层析柱加盖，放置过夜，使层析柱内填充物膨润。打开活塞，依次用下列溶液淋洗层析柱使其活化：5mL0.5mol/L氢氧化钠溶液、10mL水、5mL乙酸钠缓冲液、10mL水，并使排干。关上活塞，将柱加盖准备加入样品。2.2.27Poly-prep柱双向活塞。2.2.28层析柱盖帽。2.2.29容量瓶，10mL。2.3仪器设备2.3.1电子天平：感量0.0001g和0.001g2.3.2真空烘箱。2.3.3恒温水浴。2.3.4紫外/可见分光光度计。2.3.5粉碎机或相当的设备。2.3.6试管加
3、热器或相当的设备。2.3.7离心机：转速5000r/min。2.4分析步骤2.4.1样品制备油菜籽样品经除去杂质后，用粉碎机粉碎并通过1m圆孔筛，混匀。油菜籽饼粕样品直接用粉碎机粉碎并通过1mm圆孔筛，混匀。2.4.2灭酶和提取称取0.2g样品（准确到0.001g)于13mm100mm其具螺旋盖试管中。不加盖，将试管置于加热器中于100120下加热灭酶1h。在试管中加入2mL沸水，加盖混匀，再置于加热器中于100120下提取1h。将试管取出于室温下冷却，加入2mL常温的水，混匀并在3000r/min下离心10min。将上清液移入10mL容量瓶内，样品再各以2mL水提取2次。将上清液合并至同一容
4、量瓶内，用水稀释并定容至10.0mL,混匀。2.4.3水解准确移取适量样品提取溶液(1.0mL一5.0mL)于已制备好的层析柱(2.2.26)中，使柱排干。用3 mL Tris-HC1缓冲液沿柱壁淋洗层析柱，并使柱排干。向层析柱中加入1.0mL黑芥子硫苷酸酶溶液，使黑芥子硫苷酸酶溶液进入柱的填充料部分，并确保使填充料的顶部仍处于酶溶液的凹液面之下。关闭活塞，在柱上加盖，置于37恒温水浴中水解1h。2.4.4洗脱取出层析柱，用6mL水分6次洗脱层析柱，将洗脱液收集于10.0mL容量瓶中。加入2.0mL苯酚-钨酸溶液，用水定容到10.0mL,混匀2.4.5测定将上述洗脱液移入离心管并于3000r/min下离心10min。准确移取上清液1.0mL溶液于
