1、SN/T1961.1-20072.5.2取一定数量的微孔，放在微孔支架上，标记标准液和测试样的位置。2.5.3用移液器吸取100L标准液和样品测试液于微孔中，将微孔板在台面上以圆运动方式混匀约20s,在微孔上覆盖封孔膜，室温(1830)孵有10min。2.5.4倒掉各微孔中的溶液，加洗涤缓冲液200L洗涤微孔，重复五次。将微孔倒置于吸水纸巾上，排除剩余的洗涤缓冲液。该步骤也可用洗板机进行洗涤。2.5.5用移液器吸取1004L酶标记结合物到每个微孔中，将微孔板在台面上以圆运动方式混匀约20s,在微孔上覆盖封孔膜，室温(1830)孵育10min。2.5.6重复3.5.4洗涤微孔。2.5.7用移液器
2、吸取100L底物溶液到每个微孔中，将微孔板在台面上以圆运动方式混匀约20s,在微孔上覆盖封孔膜，室温(1830)孵有10min。2.5.8用移液器吸取100L终止液到每个微孔中，将微孔板在台面上以圆运动方式混匀约20s。2.5.9用酶标仪测量每个微孔在650nm波长的吸光度(OD)2.6结果计算及报告22.6.1数据计算：读取OD值，根据计算式(1)，计算每一标准溶液浓度的logt和lg值。100Alogit,e In*(1）100A2100式中：A=2-OD,;Ao=2-OD。示例：0标准溶液的吸光度OD=0.072A。=2-0.072=1.9285.0ug/mL标准溶液的吸光度OD.00,
3、201A.g=2-0.201=1.99A行1799100logits192810100A100=2.641.7991009285.0g/mL标准溶液lg值2.6.2标准曲线绘制：以标准溶液浓度的1g值为横坐标1ogt值为纵坐标，绘制标准曲线（见附录A)。每次试验均应重新绘制标准曲线。2.6.3计算每个样品的1ogt值，利用标准曲线查出样品中过敏原花生成分含量1g值B,计算样品中过敏原花生成分的含量X(g/mL)三10。或应用试剂盒配套的计算软件，输入每个检测样品的OD值可以直接得出样品中过敏原花生成分的含量X(g/L)。2.6.4如果样品的logt值高于标准溶液的1ogt值范围，应对样品进行稀释后重新测试，则样品中过敏原花生成分含量应为X(4g/mL)=稀释倍数10B。2.6.5结果报告：若样品中过敏原花生成分含量大于等于2.5g/g(mL),报告样品中过敏原花生成分含量为X4g/g(mL):若样品中过敏原花生成分含量小于2.5g/g(mL),报告样品中过敏原花生成分为阴性检测低限：2.5g/g(mL)。2.7质控标准标准曲线的相关性应R2大于0.995，否则检测无效，应重新检测。2
