1、书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛 犖犜 进出口动物源性食品中二苯脲类残留量检测方法犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳犱 犻 狆 犺 犲 狀 狔 犾 狌 狉 犲 犪狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊犻 狀犳 狅 狅 犱 狊 狋 狌 犳 犳 狊狅 犳犪 狀 犻 犿 犪 犾 狅 狉 犻 犵 犻 狀犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋 发布 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布书书书前言本标准的附录、附录和附录均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国广东出入境检验检疫局、中华人
2、民共和国黑龙江出入境检验检疫局。本标准主要起草人：林海丹、姚仰勋、邵琳智、林峰、谢守新、秦燕、康庆贺、吴映璇。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。犛 犖犜 进出口动物源性食品中二苯脲类残留量检测方法范围本标准规定了进出口动物源性食品中尼卡巴嗪（标志残留物为双硝基均二苯脲）和双咪苯脲残留量的液相色谱和液相色谱 质谱质谱法测定方法。本标准适用于牛肉、鸡肉、牛肝、鸡肝和鸡蛋中尼卡巴嗪和双咪苯脲残留量的测定和确证。方法提要试样在碱性条件下用乙腈提取，正己烷液液分配，双咪苯脲需经弱阳离子交换固相萃取柱净化，用液相色谱测定，外标法定量；用液相色谱 质谱质谱测定和确证，内标法定量双硝基均二苯脲，外标法
3、定量双咪苯脲。试剂和材料除另有说明外，所有试剂均为分析纯，水为去离子水。乙腈：色谱纯。正己烷。甲醇：色谱纯。冰乙酸：色谱纯。氢氧化钾。犖，犖 二甲基甲酰胺。无水硫酸钠：经 灼烧，置于干燥器内备用。乙腈饱和正己烷：正己烷与足够的乙腈混合至饱和。乙酸水溶液：取冰乙酸，用水定容至。过 滤膜备用。乙酸水溶液：取冰乙酸 ，用水定容至。过 滤膜备用。乙酸水溶液：取冰乙酸，用水定容至 。过 滤膜备用。乙酸甲醇溶液：取冰乙酸，用甲醇定容至 。氢氧化钾溶液：取 氢氧化钾，溶于 水。甲醇 乙酸水溶液（，体积比）：量取 甲醇，加 乙酸水溶液（），混匀备用。空白样品提取溶液 水溶液（，体积比）：量取 空白样品提取溶液
4、，加 水，混匀备用。双硝基均二苯脲标准物质（，号：）：纯度大于等于。双咪苯脲标准物质（，号：）：纯度大于等于。氘代双硝基均二苯脲（双硝基均二苯脲 ，）：纯度大于等于。双硝基均二苯脲标准贮备溶液（）：准确称取适量双硝基均二苯脲标准物质，加犖，犖二甲基甲酰胺 溶解，用乙腈配成浓度为 的标准贮备溶液。该溶液在保存。双咪苯脲标准贮备溶液（）：准确称取适量双咪苯脲标准物质，用乙腈配成浓度为 的标准贮备溶液。该溶液在保存。氘代双硝基均二苯脲标准贮备溶液（）：准确称取适量氘代双硝基均二苯脲标准物质，犛 犖犜 加犖，犖 二甲基甲酰胺 溶解，用乙腈配成浓度为 的标准贮备溶液。该溶液在保存。双硝基均二苯脲标准中间
5、溶液（）：准确移取 双硝基均二苯脲标准储备溶液（）于 容量瓶，用乙腈稀释至刻度配成浓度为 的标准中间溶液。该溶液在保存。双咪苯脲标准中间溶液（）：准确移取 双咪苯脲标准贮备溶液（）于 容量瓶，用乙酸水溶液（）稀释至刻度配成浓度为 的标准中间溶液。该溶液在保存。氘代双硝基均二苯脲标准中间溶液（）：准确移取 氘代双硝基均二苯脲标准贮备溶液（）于 容量瓶，用乙腈稀释至刻度配成浓度为 的标准中间溶液。该溶液在保存。双硝基均二苯脲液相色谱测定用标准工作溶液：根据需要移取适量标准贮备液（），用乙腈释成合适的标准工作溶液，现用现配。双咪苯脲液相色谱测定用标准工作溶液：根据需要移取适量标准贮备液（），用乙酸水
6、溶液（）稀释成适当浓度的标准工作溶液，现用现配。双硝基均二苯脲液相色谱 质谱质谱测定用标准工作溶液：根据需要移取一定量标准中间溶液（）和氘代双硝基均二苯脲标准中间溶液（），用甲醇 乙酸水溶液（）配成适当浓度的混合标准工作溶液，每毫升该混合标准工作溶液含有 氘代双硝基均二苯脲，现用现配。双咪苯脲液相色谱 质谱质谱测定用标准工作溶液：根据需要吸取一定量的标准中间溶液（），以空白样品提取溶液 水溶液（）稀释成适当浓度的标准工作液，现用现配。弱阳离子交换固相萃取柱：?（羧基键合二乙烯基苯、犖 二乙烯基吡咯烷酮聚合物），或相当者。临用时用 甲醇活化，水平衡。微孔滤膜：，有机相，水相；，水相。仪器和设备
7、液相色谱仪：配紫外检测器。液相色谱 质谱质谱仪：配电喷雾离子源。分析天平：感量为 和 。组织捣碎机。涡旋振荡器。均质机。离心机：。旋转蒸发仪。固相萃取装置。具塞离心管：，塑料。试样的制备和保存 动物肌肉、肝脏从原始样品中取出代表性的样品 ，用组织捣碎机捣碎混匀，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。将试样放于 以下保存。蛋从原始样品中取出代表性的样品 ，去除蛋壳后，用组织捣碎机捣碎混匀，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。将试样放于保存。制样操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。犛 犖犜 测定步骤 提取称取试样（精确到 ）于 离心管中，加入 乙
8、腈、氢氧化钾溶液（）和无水硫酸钠，均质 ，离心 ，上清液转移到 容量瓶中，残渣加入 乙腈和 氢氧化钾溶液，涡旋振荡提取 ，离心 ，合并上清液，用乙腈定容至刻度，待净化。净化 液液分配移取 提取液（）于 浓缩瓶中，加入 乙腈饱和正己烷（），涡旋振荡，静置分层，弃去上层。再加入 乙腈饱和正己烷，重复操作。双硝基均二苯脲测定移取 分配液（）于 下旋转蒸发至近干，用乙腈溶解残渣，定容至 ，过 滤膜，供液相色谱测定，或移取 滤液，加入 氘代双硝基均二苯脲标准中间溶液（），用甲醇 乙酸水溶液（）定容至 ，供液相色谱 质谱质谱测定。双咪苯脲测定移取 分配液于已活化、平衡处理的固相萃取柱中（），控制流速小于
9、，依次用 水、甲醇淋洗，乙酸甲醇溶液（）洗脱，控制洗脱液流速小于 。洗脱液转移到 浓缩瓶，下旋转浓缩至近干，用水溶解残渣，定容至 ，过 滤膜，供液相色谱测定，或移取 滤液，用水定容至 ，供液相色谱 质谱质谱测定。空白样品提取溶液制备称取空白样品，按、和 操作进行到水定容至 ，过 滤膜，得到滤液作为空白样品提取溶液。液相色谱测定 色谱条件）色谱柱：柱，（内径），或相当者；）流动相：测定双硝基均二苯脲为乙腈 乙酸水溶液（，体积比）；测定双咪苯脲为乙腈 乙酸水溶液（，体积比）；）流速：；）检测波长：测定双硝基均二苯脲为 ；测定双咪苯脲为 ；）柱温：；）进样量：。色谱测定根据样液中待测物的含量情况，选
10、取响应值相近的标准工作溶液进行色谱分析，标准工作溶液和待测样液中双硝基均二苯脲及双咪苯脲的响应值均应在仪器的检测线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，双硝基均二苯脲和双咪苯脲的保留时间分别约为 和 ，标准物质色谱图分别参见附录 中图 和图 。液相色谱 质谱质谱测定 色谱条件）色谱柱：，（内径），或相当者；）流动相：测定双硝基均二苯脲为甲醇 乙酸水溶液（，体积比）；测定双咪苯脲为甲醇 乙酸水溶液（，体积比）；）流速：；犛 犖犜 ）柱温：）进样量：测定双硝基均二苯脲为；测定双咪苯脲为。质谱条件）离子源：电喷雾离子源（）；）扫描方式：测定双硝基均二苯脲为负离子扫描；测
11、定双咪苯脲为正离子扫描；）检测方式：多反应选择离子检测（）；）电喷雾电压（）：测定双硝基均二苯脲为 ：测定双咪苯脲为 ；）雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气及其他合适气体；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求；各参数参见附录中表；）辅助气温度（）：；）定性离子对、定量离子对、采集时间、去簇电压及碰撞能量等主要质谱参数参见附录 中表。测定 定性测定在相同实验条件下，如果样品中待测物质与标准溶液中对应的保留时间一致，定性离子对的相对丰度与浓度相当的标准溶液的相对丰度一致，偏差不超过表规定的范围，则可判断样品中存在相应的待测物。表定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰
12、度 允许的相对偏差 定量测定根据样液中待测物的含量情况，选取响应值相近的标准工作溶液进行分析，标准工作溶液和待测样液中的响应值均应在仪器线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参插进样测定。在上述仪器条件下，双硝基均二苯脲和双咪苯脲的保留时间分别约为 和 ，标准物质的二级质谱图分别参见附录中图 和图，多反应监测（）色谱图分别参见附录中图 和图。空白试验除不加试样外，均按上述测定步骤进行。结果计算和表述用数据处理软件或液相色谱、液相色谱 质谱质谱分别按式（）和式（）计算试样中双硝基均二苯脲残留量，用数据处理软件或按式（）计算试样中双咪苯脲残留量，计算结果需扣除空白值。犡犃犮犞犃犿（）式中：犡 试样
13、中待测组分残留量，单位为毫克每千克（）；犃 样液中待测组分峰面积；犮 标准工作液中待测组分的浓度，单位为毫克每升（）；犞 样液最终定容体积，单位为毫升（）；犃 标准工作液中待测组分峰面积；犿 最终样液代表的试样质量，单位为克（）。犡犮犮犻犃犃犻犞犮犻犃犻犃犿（）犛 犖犜 式中：犡 试样中双硝基均二苯脲残留量，单位为毫克每千克（）；犮 标准工作溶液中双硝基均二苯脲的浓度，单位为毫克每升（）；犮犻 样液中氘代双硝基均二苯脲的浓度，单位为毫克每升（）；犃 样液中双硝基均二苯脲的峰面积：犃犻 标准工作溶液中氘代双硝基均二苯脲的峰面积；犞 样液最终定容体积，单位为毫升（）；犮犻 标准工作溶液中氘代双硝基
14、均二苯脲的浓度，单位为毫克每升（）；犃犻 样液中内标物的峰面积；犃 标准工作溶液中双硝基均二苯脲的峰面积；犿 最终样液代表的试样质量，单位为克（）。测定低限、回收率 测定低限液相色谱法和液相色谱 质谱质谱法测定双硝基均二苯脲和双咪苯脲残留量的测定低限均为 。回收率液相色谱法和液相色谱 质谱质谱法测定鸡肉、鸡肝、鸡蛋、牛肉和牛肝中双硝基均二苯脲和双咪苯脲残留量的添加浓度及回收率数据见表。表双硝基均二苯脲和双咪苯脲的回收率数据（狀）基质添加浓度（）药物名称回收率液相色谱法液相 质谱质谱法鸡肉 双硝基均二苯脲 双咪苯脲 鸡肝 双硝基均二苯脲 双咪苯脲 鸡蛋 双硝基均二苯脲 双咪苯脲 犛 犖犜 表（续
15、）基质添加浓度（）药物名称回收率液相色谱法液相质谱质谱法牛肉 双硝基均二苯脲 双咪苯脲 牛肝 双硝基均二苯脲 双咪苯脲 犛 犖犜 附录犃（资料性附录）液相色谱图图 犃 双硝基均二苯脲标准物质的液相色谱图图 犃 双咪苯脲标准物质的液相色谱图犛 犖犜 附录犅（资料性附录）参考质谱条件）表 犅 主要质谱参数被测物名称定性离子对（）定量离子对（）采集时间（）去簇电压碰撞能量（）雾化气（）气帘气（）碰撞气（）辅助加热气（）双硝基均二苯脲氘代双硝基均二苯脲双咪苯脲 ）非商业性声明：附录所列参考质谱条件是在 型液相色谱质谱质谱仪上完成的。此处所出试验用仪器仅供参考，并不涉及商业目的。鼓励标准使用者尝试不同厂
16、家或型号的仪器。犛 犖犜 附录犆（资料性附录）二级质谱图与多反应监测（犕犚犕）离子色谱图图 犆 双硝基均二苯脲标准物质的二级质谱图图 犆 双咪苯脲标准物质的二级质谱图）图 犆 双硝基均二苯脲和氘代双硝基均二苯脲标准物质液相 质谱质谱多反应监测色谱图犛 犖犜 ）图 犆 双咪苯脲标准物质液相 质谱质谱多反应监测色谱图犛 犖犜 犉 狅 狉 犲 狑 狅 狉 犱犃 狀 狀 犲 狓犃、犃 狀 狀 犲 狓犅犪 狀 犱犃 狀 狀 犲 狓犆狅 犳 狋 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犪 狉 犲 犻 狀 犳 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狏 犲犪 狀 狀 犲 狓 犲 狊 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犻 狊狆 狉 狅 狆 狅 狊 犲 犱犫 狔犪 狀 犱 犻 狊狌 狀 犱 犲 狉 狋 犺 犲犮 犺 犪 狉 犵 犲 犱狅 犳犖 犪 狋 犻 狅 狀 犪 犾 犚 犲 犵 狌 犾 犪 狋 狅 狉 狔犆 狅 犿犿 犻 狊 狊 犻 狅 狀 犳 狅 狉犆 犲 狉 狋 犻 犳 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犃 犮 犮 狉 犲 犱 犻 狋 犪 狋 犻 狅 狀 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉
