1、书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛 犖犜 进出口动物源性食品中二硝托胺残留量的测定液相色谱质谱 质谱法犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 狕 狅 犪 犾 犲 狀 犲狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀犳 狅 狅 犱 狊 狋 狌 犳 犳 狊狅 犳犪 狀 犻 犿 犪 犾狅 狉 犻 犵 犻 狀犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犔 犆 犕 犛犕 犛犿 犲 狋 犺 狅 犱 发布 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布书书书前言本标准的附录、附录和附录均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民
2、共和国黑龙江出入境检验检疫局负责起草。本标准主要起草人：刘永、吴岩、杨长志、康庆贺、王雪飞、鞠文东。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。犛 犖犜 进出口动物源性食品中二硝托胺残留量的测定液相色谱 质谱 质谱法范围本标准规定了动物源性食品中二硝托胺的制样和液相色谱 质谱质谱检测及确证方法。本标准适用于动物肉、肝脏、肾脏、牛奶中二硝托胺残留量的测定。规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注明日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方面研究使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其
3、最新版本适用于本标准。分析实验室用水规格和试验方法方法提要用乙腈提取试样中的二硝托胺，提取液经中性氧化铝固相萃取柱净化，洗脱液浓缩后定容，液相色谱 质谱质谱仪测定，外标法定量。试剂和材料所有试剂除特殊注明外，所用试剂均为分析纯，水为 规定的一级水。乙腈：色谱纯。二氯甲烷。甲醇。丙酮。氯化钠。无水硫酸钠：经 灼烧，冷却后在干燥器中储存备用。无水硫酸钠柱：用内径约为 的下部收口玻璃管，收口处填装少量玻璃棉，然后填装无水硫酸钠，高度约为 左右。二氯甲烷 丙酮（）溶液：量取 丙酮，用 二氯甲烷稀释。甲醇 丙酮（）溶液：量取 甲醇，用 丙酮稀释。乙腈水（）溶液：量取 乙腈，用水稀释至 ，过 微孔滤膜。乙
4、腈饱和的正己烷溶液：乙腈中加入 正己烷，充分振荡后，静置分层，取上层正己烷层备用。中性氧化铝固相萃取柱：，或相当者。使用前分别用 丙酮、二氯甲烷 丙酮（）溶液预处理，并保持柱体湿润。注：中性氧化铝固相萃取柱开封后应保持干燥。标准物质：二硝托胺纯度大于 ，：。标准储备溶液：准确称取按其纯度折算为 质量的二硝托胺标准品 ，用乙腈溶解并定容至 ，浓度相当于 。储备液在冰箱避光保存，可使用个月。标准中间溶液：准确量取标准储备溶液 ，用乙腈 水（）溶液溶解并定容至 ，浓犛 犖犜 度相当于 ，在冰箱避光保存，可使用周。标准工作溶液：根据需要用 适当浓度的标准工作溶液溶解空白样品浓缩残渣，配制成适当浓度的标
5、准工作溶液，标准工作溶液应当天配制。仪器和设备 高效液相色谱 质谱质谱仪：配电喷雾离子源（）或相当者。天平：感量 。分析天平：感量 。固相萃取装置。氮吹仪。旋涡混匀器。均质器。离心机。微孔滤膜。试样的制备与保存固态样品取有代表性的约 ，均分成两份作为试样，分别装入洁净容器，密封并做好标识，于 冰箱内保存；液态样品取有代表性的约 ，均分成两份作为试样，分别装入洁净容器，密封并做好标识，于冰箱内保存。在抽样和制样操作过程中，应防止样品受到污染或发生二硝托胺含量的变化。测定步骤 提取 固态高含量样品准确称取 试样（精确到 ）于 离心管中，加入无水硫酸钠、乙腈，用均质器以 均质 ，以 离心 ，上清液转
6、移至 具塞离心管中，样品用 乙腈重复上述提取、离心操作，合并两次提取的上清液，加入经乙腈饱和的正己烷溶液 ，用旋涡振荡器混匀 后，以 离心 ，弃去上清液，下层过无水硫酸钠柱，转移至鸡心瓶，浓缩近干后待净化。固态低含量样品准确称取 试样（精确到 ）于 离心管中，以下同 。液态样品准确量取 试样于 离心管中，加入氯化钠、乙腈，旋涡振荡 ，以 离心 ，取上清液 于 离心管中，加入经乙腈饱和的正己烷溶液 ，用旋涡振荡器混匀 后，以 离心 ，弃去上清液，下层用氮吹仪浓缩至近干，待净化。净化残渣用 二氯甲烷 丙酮（）溶液溶解，以 的速度过中性氧化铝固相萃取柱，再用 二氯甲烷 丙酮（）溶液分两次洗涤浓缩瓶，
7、过中性氧化铝固相萃取柱，弃去流出液，待上样液流出后，用 甲醇 丙酮（）溶液洗脱，洗脱液于氮吹仪浓缩至近干，用 乙腈 水（）溶液溶解残渣，经 滤膜过滤，供液相色谱 质谱质谱测定。测定 液相色谱条件）色谱柱：，（内径），或相当者；犛 犖犜 ）流动相：乙腈水；）流速：或根据仪器条件优化；）柱温：；）进样量：。质谱条件）离子源：电喷雾离子源；）扫描方式：负离子；）检测方式：多反应监测（）；）其他质谱质谱参考条件参见附录 中表 。液相色谱 质谱质谱测定 定量测定根据样液中二硝托胺的浓度大小，选定峰高相近的标准工作溶液，标准工作溶液和样液中二硝托胺的响应值均应在仪器的检测线性范围内。对标准工作溶液和样液等
8、体积参差进样测定，在上述色谱条件下，二硝托胺的参考保留时间约为 ，标准溶液的多反应监测色谱图参见附录中图。定性测定在相同的试验条件下，样品与标准工作液中待测物质的质量色谱峰相对保留时间在 以内，并且在扣除背景后的样品质量色谱图中，所选择的离子对均出现，同时与标准品的相对丰度允许偏差不超过表规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。表使用定性液相色谱 质谱质谱时相对离子丰度最大允许偏差相对离子丰度（犓）犓 犓 犓 犓 允许的最大偏差 空白试验除不加试样外，均按上述操作步骤进行。结果计算和表述用数据处理软件中的外标法，或绘制标准曲线，按照式（）计算样品中二硝托胺的含量。犡犮犞犿 （）式中：犡 试
9、样中待测组分含量，单位为毫克每千克（）；犮 由标准曲线而得的样液中待测组分的浓度，单位为纳克每毫升（）；犞 样液最终定容体积，单位为毫升（）；犿 最终样液所代表的试样质量，单位为克（）。测定低限、回收率 测定低限本方法二硝托胺测定低限为。回收率回收率试验数据参见附录中表。犛 犖犜 附录犃（资料性附录）串联质谱条件）串联质谱条件：）电离方式：；）毛细管电压：；）源温度：；）去溶剂温度：；）锥孔气流：；）去溶剂气流：；）碰撞气：氩气，碰撞气压 （）；）监测模式：多反应监测，多反应监测条件见表 。表 犃 多反应监测条件化合物母离子子离子驻留时间锥孔电压碰撞能量 二硝托胺 离子用于定量。）非商业性声明
10、：表 所列参数是在 质谱仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试采用不同厂家或型号的仪器。犛 犖犜 附录犅（资料性附录）标准样品色谱图二硝托胺高效液相色谱 质谱质谱色谱图，见图。）图犅 二硝托胺高效液相色谱质谱质谱色谱图犛 犖犜 附录犆（资料性附录）添加回收率添加回收率见表。表 犆 添加回收率（狀）食品名称添加浓度（或）平均测定值（）平均回收率相对标准偏差鸡肉 鸡肝 鸡肾 牛奶 犛 犖犜 犉 狅 狉 犲 狑 狅 狉 犱犃 狀 狀 犲 狓犃，犪 狀 狀 犲 狓犅犪 狀 犱犪 狀 狀 犲 狓犆狅 犳 狋 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犻
11、狊 犻 狀 犳 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狏 犲犪 狀 狀 犲 狓 犲 狊 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊狆 狉 狅 狆 狅 狊 犲 犱犫 狔犪 狀 犱 犻 狊狌 狀 犱 犲 狉 狋 犺 犲犮 犺 犪 狉 犵 犲狅 犳犆 犺 犻 狀 犪犖 犪 狋 犻 狅 狀 犪 犾 犚 犲 犵 狌 犾 犪 狋 狅 狉 狔犆 狅 犿犿 犻 狊 狊 犻 狅 狀犳 狅 狉犆 犲 狉 狋 犻 犳 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犃 犮 犮 狉 犲 犱 犻 狋 犪 狋 犻 狅 狀 犜 犺 犲狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊犱 狉 犪 犳 狋 犲 犱犫 狔犎 犲 犻 犾 狅 狀 犵 犼
12、犻 犪 狀 犵犈 狀 狋 狉 狔 犈 狓 犻 狋 犐 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犙 狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲犅 狌 狉 犲 犪 狌狅 犳 狋 犺 犲犘 犲 狅 狆 犾 犲狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻 犮狅 犳犆 犺 犻 狀 犪 犜 犺 犲犿 犪 犻 狀犱 狉 犪 犳 狋 犲 狉 狊狅 犳 狋 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犪 狉 犲犔 犻 狌犢 狅 狀 犵犲 狋犪 犾 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犻 狊犪狆 狉 狅 犳 犲 狊 狊 犻 狅 狀 犪 犾 狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犳 狅 狉犲 狀 狋 狉 狔 犲 狓 犻 狋 犻 狀 狊
13、狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱狇 狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲狆 狉 狅 犿 狌 犾 犵 犪 狋 犲 犱犳 狅 狉 狋 犺 犲犳 犻 狉 狊 狋 狋 犻 犿 犲 犛 犖犜 犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳狕 狅 犪 犾 犲 狀 犲狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀犳 狅 狅 犱 狊 狋 狌 犳 犳 狊狅 犳犪 狀 犻 犿 犪 犾 狅 狉 犻 犵 犻 狀犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犔 犆 犕 犛犕 犛犿 犲 狋 犺 狅 犱犛 犮 狅 狆 犲犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狊 狆 犲 犮 犻 犳 犻 犲 狊狋
14、 犺 犲犿 犲 狋 犺 狅 犱 狊狅 犳 狊 犪 犿 狆 犾 犲狆 狉 犲 狆 犪 狉 犪 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犱 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀犫 狔 犾 犻 狇 狌 犻 犱犮 犺 狉 狅 犿 犪 狋 狅 犵 狉 犪 狆 犺 狔犿 犪 狊 狊狊 狆 犲 犮 狋 狉 狅 犿 犲 狋 狉 狔狅 犳狕 狅 犪 犾 犲 狀 犲狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀犳 狅 狅 犱 狊 狋 狌 犳 犳 狊狅 犳犪 狀 犻 犿 犪 犾 狅 狉 犻 犵 犻 狀 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犻 狊犪 狆 狆 犾 犻 犮 犪 犫 犾 犲 狋 狅狋 犺 犲犱 犲 狋 犲 狉
15、犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱狇 狌 犪 犾 犻 犳 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 狕 狅 犪 犾 犲 狀 犲 狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 犻 狀犪 狀 犻 犿 犪 犾 犱 犲 狉 犻 狏 犲 犱犳 狅 狅 犱 狊 犻 狀 犮 犾 狌 犱 犻 狀 犵狆 狅 狉 犽，狆 狅 狌 犾 狋 狉 狔犪 狀 犱狋 犺 犲 犻 狉 犾 犻 狏 犲 狉，犽 犻 犱 狀 犲 狔 犖 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狏 犲狉 犲 犳 犲 狉 犲 狀 犮 犲 狊犜 犺 犲犳 狅 犾 犾 狅 狑 犻 狀 犵狀 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狏 犲犱 狅 犮 狌 犿 犲 狀 狋 狊犮 狅 狀 狋 犪 犻 狀狆 狉 狅
16、 狏 犻 狊 犻 狅 狀 狊狑 犺 犻 犮 犺，狋 犺 狉 狅 狌 犵 犺狉 犲 犳 犲 狉 犲 狀 犮 犲 犻 狀狋 犺 犻 狊 狋 犲 狓 狋，犮 狅 狀 狊 狋 犻 狋 狌 狋 犲狆 狉 狅 狏 犻 狊 犻 狅 狀 狊狅 犳 狋 犺 犻 狊狀 犪 狋 犻 狅 狀 犪 犾 狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犉 狅 狉犱 犪 狋 犲 犱狉 犲 犳 犲 狉 犲 狀 犮 犲 狊，狊 狌 犫 狊 犲 狇 狌 犲 狀 狋犪 犿 犲 狀 犱 犿 犲 狀 狋 狊狋 狅，狅 狉狉 犲 狏 犻 狊 犻 狅 狀 狊狅 犳，犪 狀 狔狅 犳 狋 犺 犲 狊 犲狆 狌 犫 犾 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀 狊犱 狅狀 狅 狋 犪 狆 狆 犾 狔 犎 狅 狑 犲 狏 犲 狉，狆 犪 狉 狋 犻 犲 狊 狋 狅犪 犵 狉 犲 犲 犿 犲 狀 狋 狊犫 犪 狊 犲 犱 犻 狀 狋 犺 犻 狊狀 犪 狋 犻 狅 狀 犪 犾 狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犪 狉 犲犲 狀 犮 狅 狌 狉 犪 犵 犲 犱狋 狅 犻 狀 狏 犲 狊 狋 犻 犵 犪 狋 犲狋 犺 犲狆 狅 狊 狊 犻 犫 犻 犾 犻 狋 狔狅 犳犪 狆 狆
