1、书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛 犖犜 进出口危险化学品安全试验方法第 部分：犛 犇 犛 聚丙烯酰胺凝胶电泳试验犜 犲 狊 狋犿 犲 狋 犺 狅 犱狅 犳 犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犱 犪 狀 犵 犲 狉 狅 狌 狊 犮 犺 犲 犿 犻 犮 犪 犾 狊犘 犪 狉 狋 ：犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 狊 狅 犱 犻 狌 犿犱 狅 犱 犲 犮 狔 犾狊 狌 犾 犳 犪 狋 犲狆 狅 犾 狔 犪 犮 狉 狔 犾 犪 犿 犻 犱 犲犵 犲 犾 犲 犾 犲 犮 狋 狉 狅 狆 犺 犲 狉 犲 狊 犻 狊 发布 实施中华人民共和国国家质
2、量监督检验检疫总局发 布书书书前言 进出口危险化学品安全试验方法 系列标准共分为 部分：第部分：体内哺乳动物肝细胞程序外 合成（）试验；第部分：空斑形成细胞（）试验；第部分：大型溞繁殖试验；第部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验；第部分：睾丸细胞（）试验；第部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验；第部分：小鼠耳肿胀试验；第部分：腘窝淋巴结试验；第部分：血清溶血素测定试验；第 部分：淋巴细胞增殖功能测定试验；第 部分：种系突变试验；第 部分：单细胞凝胶电泳分析试验；第 部分：荧光原位杂交试验；第 部分：聚丙烯酰胺凝胶电泳试验；第 部分：实验；第 部分：实验；第 部分：哺乳动物行为毒理学试验；第
3、部分：加合物的检测方法；第 部分：实验；第 部分：法测定蛋白质含量；第 部分：琼脂糖凝胶电泳试验；第 部分：的 值测定方法；第 部分：细胞器的分离实验方法；第 部分：细胞免疫功能体外检测方法；第 部分：体液免疫功能试验；第 部分：巨噬细胞功能试验；第 部分：流式细胞术检测凋亡；第 部分：穿梭质粒在突变检验中的应用；第 部分：生化需氧量（）测定。本部分为 系列标准的第 部分。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检疫局。本部分主要起草人：张园、王利兵、赵琢、王华、李学洋、徐斌。本部分系首次发布的出入境检验
4、检疫行业标准。犛 犖犜 进出口危险化学品安全试验方法第 部分：犛 犇 犛 聚丙烯酰胺凝胶电泳试验范围 的本部分规定了进出口危险化学品安全试验中 聚丙烯酰胺凝胶电泳试验的主要试剂、试验步骤和试验结果。本部分适用于进出口危险化学品 聚丙烯酰胺凝胶电泳试验。原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳（），在聚丙烯酰胺凝胶系统中，加入一定量的十二烷基硫酸钠（），蛋白质样品就会与 结合形成带负电荷的复合物，由于蛋白质的相对分子质量不同，所形成复合物的相对分子质量也不同，在电泳中反映出不同的迁移率。根据标准蛋白质样品在电泳中的迁移率和相对分子质量所作出的标准曲线就可以推算出蛋白质样品相对分子质量的近似值。主要试剂 丙烯酰胺
5、取丙烯酰胺 和，亚甲双丙烯酰胺溶于 水中，加热至 溶解，补加水至终体积为 ，过滤除菌，避光，保存。犿 狅 犾犔犜 狉 犻 狊溶液（狆 犎 ）称取 碱加水至接近 ，用 的 调 值至，补水至 ，保存。犿 狅 犾犔犜 狉 犻 狊溶液（狆 犎 ）称取 加水至接近 ，用 的 调 值至，补水至 ，保存。过硫酸铵贮存液用去离子水配制小量 的贮存液保存于，周内使用。甘氨酸电泳缓冲液 碱，甘氨酸，再加入 的 ，补水至 ，室温保存。犛 犇 犛凝胶加样缓冲液 （），二硫苏糖醇（），（电泳级），溴酚蓝，甘油，临用时现加。染色液先将 考马斯亮蓝 溶于 甲醇水溶液（体积比为）和 冰乙酸的混合液中，过滤。脱色液 甲醇与水（
6、体积比为）和 冰乙酸的混合液。犛 犖犜 试验步骤 变性将样品置于 样品缓冲液中，于 加热 使蛋白质变性。制胶根据蛋白质相对分子质量大小选择相应的 聚丙烯酰胺凝胶浓度，见表和表。表配制 犿 犔不同浓度犜 狉 犻 狊 甘氨酸犛 犇 犛聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液单位为毫升溶液成分凝胶浓度 水 丙烯酰胺溶液 （）过硫酸铵 表配制犿 犔 犜 狉 犻 狊 甘氨酸犛 犇 犛聚丙烯酰胺凝胶电泳积层胶所用溶液单位为毫升溶液成分体积水 丙烯酰胺溶液 （）过硫酸铵 上样取处理好的待测蛋白样品各（）上样，未加蛋白样品的齿道应加上等体积 样品缓冲液。电泳凝胶上所加电压为，当染料进入分离胶后，把电压提高到 ，继续电泳直到溴酚蓝达到分离胶底部，然后关闭电源。染色将凝胶置于倍体积的染色液中，平板摇床上室温染色以上。脱色将凝胶置于脱色液中，平板摇床上脱色（），其间更换脱色液（）次。试验结果将脱色后的胶拍照后，剪一块比胶稍大的滤纸，将胶置于滤纸之上，用干胶机干胶后保存。犛 犖犜 书书书犜犖犛中华人民共和国出入境检验检疫行业标准进出口危险化学品安全试验方法第 部分：犛 犇 犛 聚丙烯酰胺凝胶电泳试验 中 国 标 准 出 版 社 出 版北京复兴门外三里河北街 号邮政编码：网址 电话：中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本 印张 字数 千字 年月第一版 年月第一次印刷印数 书号：定价 元
