1、SN/T1151.1-20114.6Real-time RT-PCR引物和探针：引物TSV1004F、TSV1075R和探针TSV-P1为OIE推荐引物和探针，引物浓度为15umol/L,探针浓度为5umol/L,其序列如下：上游引物(TSV1004F):5-TTG-GGC-ACC-AAA-CGA-CAT-T-3下游引物(TSV1075R):5-GGG-AGC-TTA-AAC-TGG-ACA-CAC-TGT-3TagMan探针(TSV-P1):5-CAG-CAC-TGA-CGC-ACA-ATA-TTC-GAG-CAT-C-3,其5端和3端分别标记FAM和TAMRA。4.7随机引物：含有9个碱基
2、的随机序列引物，浓度为50mol/L,一20保存。4.8DNA相对分子质量标准：适合检测分子量大小50bp500bp间的DNA片段，-20保存。4.910倍电泳上样缓冲液：4保存。4.10DEPC水：自配（见A.1)或购买商品化试剂。4.11EB溶液：4保存（见A.2)。4.12 Trizol试剂：4保存。4.13三氯甲烷：常温保存。4.14异丙醇：使用前预冷至一20。4.1575%乙醇：用新开启的无水乙醇和DEP水配制，使用前预冷至一20。5仪器与设备5.1PCR仪：ABI9700或相同性能PCR仪。5.2荧光PCR检测仪：ABI7700、ABI7500或相同性能荧光PCR检测仪。5.3高速
3、台式冷冻离心机：可控温至4、离心速度可达13000g以上。6临床症状的诊断虾桃拉综合征的病程有三个明显的阶段：急性期、过渡期和慢性期。在急性期和过渡期，虾表现出独特的外部症状，可据此对该疾病作出初步诊断。在急性期和过渡期，濒死虾体表出现大量的红色色素体，使感染虾全身呈暗淡的红色，而尾扇和游泳足呈明显的红色，用10倍放大镜观察细小附肢（如末端尾肢或腹肢）的表皮上皮，可以看到病灶处的上皮坏死。灏死虾常漂浮在池塘边或水面，虾壳变软、空肠。急性感染的虾通常在蜕皮时死亡。在过渡期及后期，受感染虾可出现多处随机、不规则、黑色沉着的表皮病灶，这些黑色沉着的斑点是由血细胞累积而成的，该阶段虾可能不会出现表皮变软及红色素扩散，行为和摄食可能会保持正常。成功蜕皮后，病虾从过渡期发展到慢性期。在慢性期，虾几乎没有明显的体症，行为和摄食正常，但病毒在淋巴器官中保持持续感染，可能会终生带毒，可把病毒水平传播给其他易感虾。处于慢性期的虾对正常环境刺激的抵抗力要低于未被感染的虾（如：盐度突然降低）。7采样和样品前处理7.1采样出境检疫采样应在原产养殖场进行，进境检疫抽样应在进出境临时检疫隔离场（池）进行，采样数量根据GB/T18088确定。采集送实验室检测的样品可以为稚虾、半成虾和成虾。采集的样品应保持鲜活，0一4冷藏保存。2
