1、书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛 犖犜 进出口动物源性食品中多肽类兽药残留量的测定液相色谱质谱 质谱法犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳狆 犲 狆 狋 犻 犱 犲狏 犲 狉 犲 狉 犻 狀 犪 狉 狔犱 狉 狌 犵狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀犳 狅 狅 犱 狊 狋 狌 犳 犳 狊狅 犳犪 狀 犻 犿 犪 犾狅 狉 犻 犵 犻 狀犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犔 犆 犕 犛犕 犛犿 犲 狋 犺 狅 犱 发布 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布书书书前言本标准按照 给出的规则起草。本标准由国家认证认可监
2、督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局。本标准主要起草人：孙兴权、田苗、林维宣、肖珊珊、董伟峰、于灵。犛 犖犜 进出口动物源性食品中多肽类兽药残留量的测定液相色谱 质谱 质谱法范围本标准规定了进出口动物源性食品中杆菌肽、粘杆菌素、粘杆菌素和维吉尼霉素 残留量测定液相色谱 质谱质谱检测方法。本标准适用于猪肉、猪肝、猪肾和牛乳中杆菌肽、粘杆菌素、粘杆菌素和维吉尼霉素 残留量的检测和确证。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。分析实验
3、室用水规格和试验方法方法提要样品用 甲酸 甲醇混合溶液提取，提取液经正己烷萃取脱脂，固相萃取柱净化，液相色谱 质谱质谱测定和确证，外标法定量。试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为 规定的一级水。乙腈：高效液相色谱级。甲醇：高效液相色谱级。甲酸：高效液相色谱级。正己烷：高效液相色谱级。盐酸。盐酸溶液：量取 盐酸（），注入 水中，混匀。甲酸水溶液：取 甲酸，用水稀释至 。甲酸 甲醇溶液（，体积比）：甲酸水溶液（）与 甲醇（）混溶即可。甲酸 甲醇溶液（，体积比）：甲酸水溶液（）与 甲醇（）混溶即可。甲酸 甲醇溶液饱和正己烷：甲酸 甲醇溶液（）中加入 正己烷（），充分振荡混合，静置备用。多
4、肽类标准品：杆菌肽、粘杆菌素和维吉尼霉素 标准品纯度均大于等于，标准品信息见附录 表 。多肽类标准储备溶液：称取适量标准品（），分别用 甲酸 甲醇溶液（）溶解（超声助溶），配制成浓度为 的标准储备溶液，于避光保存。犛 犖犜 混合标准储备液：分别吸取适量的杆菌肽、粘杆菌素和维吉尼霉素 标准储备液，用 甲酸 甲醇溶液（）配制成混合标准储备液。使得混合标准储备液中杆菌肽、粘杆菌素和维吉尼霉素 的浓度分别为 、，于避光保存。混合标准工作液：根据需要用 甲酸 甲醇溶液（）将混合标准储备液（）逐级稀释，配成一系列混合标准工作液，于避光保存。固相萃取柱：柱，或相当者。微孔滤膜：，有机相。仪器和设备 高效液相
5、色谱 质谱质谱仪：配有电喷雾离子源。分析天平：感量分别为 和 。组织捣碎机。均质器：。离心机：。旋涡混合器。固相萃取装置。氮吹仪。具塞离心管：聚丙烯，。试样制备与保存 猪肉、猪肝和猪肾取猪肉、猪肝和猪肾的可食部分约 代表性样品，用组织捣碎机充分捣碎，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记。牛奶取约 样品，充分均匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记。样品保存猪肉、猪肝和猪肾试样于 下冷冻避光存放；牛奶试样于下避光存放。试样制备与保存过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。测定步骤 提取 肌肉、肝脏、肾脏样品称取试样（精确到 ）于 具塞塑料离心管（）中，加入 甲酸
6、甲醇溶液（），均质 后，下 离心 。转移上清液至另一离心管中，残渣中加入 甲酸 甲醇溶液（），重复以上提取操作。合并两次提取液，加入 甲酸 甲醇溶液饱和正己烷（），涡旋振荡 ，离心 ，弃去上层液（正己烷层），再加入正己烷（），重复以上脱脂操作，所得下层液待净化。犛 犖犜 牛奶样品称取牛奶样品（精确至 ）置于 具塞塑料离心管（）中，涡旋加入 盐酸溶液（），下 离心 。转移上清液至另一离心管中，残渣中加入 甲酸 甲醇溶液（），涡旋振荡提取 。合并两次提取液，其余操作同 。净化 柱（）使用前依次用 甲醇和 水预洗。将上述所得样品提取液过 柱，弃去流出液，加 水淋洗，弃去流出液，减压抽干后加 甲醇洗脱
7、，收集全部洗脱液，水浴氮气吹干，加 甲酸 甲醇溶液（）溶解残渣，混匀，过 滤膜（），供液相色谱 质谱质谱仪测定。测定 液相色谱 质谱质谱条件液相色谱 质谱质谱条件如下：）色谱柱：柱，（内径），或相当者；）流动相：的甲酸水溶液 乙腈，梯度见表；表梯度洗脱程序时间 甲酸水溶液乙腈 ）流速：；）进样量：；）离子源：电喷雾离子源；）扫描方式：正离子扫描；）检测方式：多反应监测；）雾化气、气帘气、辅助气、碰撞气为高纯氮气，或其他合适气体；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求，参考条件参见附录；）监测离子对（）：参见附录表。高效液相色谱 质谱质谱测定根据试样中被测样液的含量情况，选取待测物响应
8、值在仪器线性响应范围内的浓度进行测定，如超出仪器线性响应范围应进行稀释。在上述色谱条件下粘杆菌素、粘杆菌素、杆菌肽 和维吉尼霉素 的参考保留时间约分别为 、和 ，标准溶液的选择性离子流图参见附录中图。液相色谱 质谱质谱确证按照液相色谱 质谱质谱条件测定标准工作溶液和样品，样品和标准工作溶液中待测物的保留时犛 犖犜 间偏差在 之内。定性测定时，若浓度相当的样品和标准工作溶液中待测物的相对离子丰度偏差不超过表规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。定量测定时，采用标准曲线法。表定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度 允许的相对偏差 空白试验除不加试样外，均按上述操作步骤进行。结果计算
9、和表述用色谱数据处理机或按式（）计算试样中多肽类药物残留含量，计算结果需扣除空白值：犡犻犮犻犞 犿 （）式中：犡犻 试样中多肽类药物残留量（粘杆菌素以 和之和表示），单位为微克每千克（）；犮犻 从标准曲线上得到的试样中多肽类药物溶液浓度，单位为纳克每毫升（）；犞 样液最终定容体积，单位为毫升（）；犿 最终样液代表的试样质量，单位为克（）。测定低限（犔 犗 犙）和回收率 测定低限（犔 犗 犙）肌肉、肝脏、肾脏和牛乳样品中多肽类药物检测低限分别为：杆菌肽 ，粘杆菌素 ，维吉尼霉素 。回收率在不同添加浓度的回收率数据见表。表回收率数据基质化合物添加浓度 回收率范围基质化合物添加浓度 回收率范围猪肉杆
10、菌肽 粘杆菌素（）维吉尼霉素 猪肝杆菌肽 粘杆菌素（）维吉尼霉素 犛 犖犜 表（续）基质化合物添加浓度 回收率范围基质化合物添加浓度 回收率范围猪肾杆菌肽 粘杆菌素（）维吉尼霉素 牛乳杆菌肽 粘杆菌素（）维吉尼霉素 犛 犖犜 附录犃（规范性附录）多肽类药物标准品信息表 犃 多肽类药物标准品信息名称英文名称 编号分子式相对分子质量杆菌肽 粘杆菌素 粘杆菌素 维吉尼霉素 犛 犖犜 附录犅（资料性附录）犃 犘 犐 犔 犆 犕 犛犕 犛系统电喷雾离子源参考条件）监测离子对及电压参数：）电喷雾电压（）：；）雾化气压力（）：；）气帘气压力（）：；）辅助气流速（）：；）离子源温度（）：；）碰撞气（）：；）离
11、子对、去簇电压（）、碰撞能量（）碰撞室出口电压（）见表。表 犅 离子对、去簇电压（犇 犘）碰撞气能量（犆 犈）碰撞室出口电压（犆 犡 犘）名称离子对去族电压（）碰撞气能量（）碰撞室出口电压（）杆菌肽 粘杆菌素 粘杆菌素 维吉尼霉素 定量离子对。）非商业性声明：附录所列参数是在 质谱仪完成的，此处列出试验用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家和型号的仪器。犛 犖犜 附录犆（资料性附录）标准品色谱图犪）犫）犮）犱）图 犆 杆菌肽犃、粘杆菌素（犃和犅）和维吉尼霉素 犕 标准品的选择性离子流图犛 犖犜 犉 狅 狉 犲 狑 狅 狉 犱犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪
12、 狉 犱狑 犪 狊狆 狉 狅 狆 狅 狊 犲 犱犫 狔犪 狀 犱 犻 狊狌 狀 犱 犲 狉 狋 犺 犲犮 犺 犪 狉 犵 犲 犱狅 犳 犮 犲 狉 狋 犻 犳 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犪 犮 犮 狉 犲 犱 犻 狋 犪 狋 犻 狅 狀犪 犱 犿 犻 狀 犻 狊 狋 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 狋 犺 犲犘 犲 狅 狆 犾 犲狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻 犮狅 犳犆 犺 犻 狀 犪 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊犱 狉 犪 犳 狋 犲 犱犫 狔犔 犻 犪 狅 狀 犻 狀 犵犈 狀 狋 狉 狔 犈 狓 犻 狋 犐 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犙 狌
13、 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲犅 狌 狉 犲 犪 狌狅 犳狋 犺 犲犘 犲 狅 狆 犾 犲狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻 犮狅 犳犆 犺 犻 狀 犪 犜 犺 犲狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊犿 犪 犻 狀 犾 狔犱 狉 犪 犳 狋 犲 犱犫 狔犛 狌 狀犡 犻 狀 犵 狇 狌 犪 狀，犜 犻 犪 狀犕 犻 犪 狅，犔 犻 狀犠 犲 犻 狓 狌 犪 狀，犡 犻 犪 狅犛 犺 犪 狀 狊 犺 犪 狀，犇 狅 狀 犵犠 犲 犻 犳 犲 狀 犵，犢 狌犔 犻 狀 犵 犛 犖犜 犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳狆 犲 狆 狋 犻 犱 犲狏 犲 狉 犲 狉 犻 狀 犪 狉
14、 狔犱 狉 狌 犵狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀犳 狅 狅 犱 狊 狋 狌 犳 犳 狊狅 犳犪 狀 犻 犿 犪 犾 狅 狉 犻 犵 犻 狀犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犔 犆 犕 犛犕 犛犿 犲 狋 犺 狅 犱犛 犮 狅 狆 犲犜 犺 犲狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狊 狆 犲 犮 犻 犳 犻 犲 狊狋 犺 犲犿 犲 狋 犺 狅 犱 狊犳 狅 狉犱 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳狆 犲 狆 狋 犻 犱 犲狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊，狊 狌 犮 犺犪 狊犅 犪 犮 犻 狋 狉 犪 犮 犻 狀犃，犆 狅 犾 犻 狊 狋 犻 狀犃
15、，犆 狅 犾 犻 狊 狋 犻 狀犅犪 狀 犱犞 犻 狉 犵 犻 狀 犻 犪 犿 狔 犮 犻 狀犕 犻 狀犪 狀 犻 犿 犪 犾 犳 狅 狅 犱犫 狔犺 犻 犵 犺狆 犲 狉 犳 狅 狉 犿 犪 狀 犮 犲犾 犻 狇 狌 犻 犱犮 犺 狉 狅 犿 犪 狋 狅 犵 狉 犪 狆 犺 狔犪 狀 犱狋 犪 狀 犱 犲 犿 犿 犪 狊 狊狊 狆 犲 犮 狋 狉 狅 犿 犲 狋 狉 狔 犜 犺 犲狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犻 狊犪 狆 狆 犾 犻 犮 犪 犫 犾 犲狋 狅狋 犺 犲犱 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳犅 犪 犮 犻 狋 狉 犪 犮 犻 狀犃，犆 狅 犾 犻 狊 狋
16、犻 狀犃，犆 狅 犾 犻 狊 狋 犻 狀犅犪 狀 犱犞 犻 狉 犵 犻 狀 犻 犪 犿 狔 犮 犻 狀犕 犻 狀狆 狅 狉 犽，狆 犻 犵 犾 犻 狏 犲 狉，狆 犻 犵犽 犻 犱 狀 犲 狔犪 狀 犱犮 狅 狑 犿 犻 犾 犽狅 犳犪 狀 犻 犿 犪 犾 狊 犪 犿 狆 犾 犲 狊 犚 犲 犳 犲 狉 犲 狀 犮 犲犜 犺 犲 犻 狋 犲 犿 狊 犻 狀狋 犺 犲犳 狅 犾 犾 狅 狑 犻 狀 犵 犾 犻 狊 狋 犲 犱犳 犻 犾 犲 狊狑 狅 狌 犾 犱犫 犲 犮 狅 犿 犲狋 犺 犲 犻 狋 犲 犿 狊狅 犳 狋 犺 犻 狊 犳 犻 犾 犲犫 狔狋 犺 犲 犻 狉 犮 犻 狋 犻 狀 犵 犻 狀狋 犺 犲狉 犲 犾 犪 狋 犻 狏 犲狆 犪 狉 狋 犉 狅 狉 狋 犺 犲 犳 犻 犾 犲 狊狑 犻 狋 犺 狅 狌 狋 犪 狀 犻 狀 犱 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 犱 犪 狋 犲，狋 犺 犲 犾 犪 狊 狋狏 犲 狉 狊 犻 狅 狀狑 狅 狌 犾 犱犫 犲犪 狆 狆 犾 犻 犮 犪 犫 犾 犲 犻 狀 狋 犺 犻 狊 犳 犻 犾 犲 犌 犅犜 犠 犪 狋 犲 狉狌 狊 犲
