1、书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛 犖犜 进出口动物源性食品中硫普罗宁及其代谢物残留量的测定液相色谱质谱 质谱法犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 狋 犻 狅 狆 狉 狅 狀 犻 狀犪 狀 犱 犻 狋 狊犿 犲 狋 犪 犫 狅 犾 犻 狋 犲 狊 狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀犳 狅 狅 犱 狊 狋 狌 犳 犳 狊狅 犳犪 狀 犻 犿 犪 犾 狅 狉 犻 犵 犻 狀犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犔 犆 犕 犛犕 犛犿 犲 狋 犺 狅 犱 发布 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布版权所有 禁止翻制、电子传
2、阅、发售书书书前言本标准的附录、附录、附录均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国江苏出入境检验检疫局、中华人民共和国湖北出入境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局。本标准主要起草人：徐锦忠、林宏、张晓燕、丁涛、黄娟、刘艳、张婧、戴华、胡小钟、林维宣、吴斌、蒋原、陶宏锦。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售进出口动物源性食品中硫普罗宁及其代谢物残留量的测定液相色谱质谱 质谱法范围本标准规定了进出口动物源性食品中硫普罗宁及其代谢物 巯基丙酸残留量测定
3、的液相色谱质谱质谱检测方法。本标准适用于进出口牛肉、牛奶，牛肝及牛肾中硫普罗宁及其代谢物 巯基丙酸残留的测定和确证。规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。分析实验室用水规格和试验方法（，：，）方法提要试样中残留的硫普罗宁及其代谢物在三羟甲基氨基甲烷乙二胺四乙酸二钠（）缓冲体系中用丙烯酸甲酯衍生化，调节 值后，用乙酸乙酯提取，再经阴离子固相萃取小柱净化，用液相色谱串联质
4、谱进行定量和确证，外标法定量。试剂和材料除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为 规定的一级水。甲酸：级。甲醇：级。乙腈。乙酸乙酯。盐酸。三氯乙酸。三羟甲基氨基甲烷（）：生化试剂。丙烯酸甲酯。二水合乙二胺四乙酸二钠（）。盐酸溶液：量取 浓盐酸，用水稀释至 。丙烯酸甲酯乙腈溶液：量取 丙烯酸甲酯加入 乙腈中混匀。甲酸甲醇溶液：量取 甲酸加入 甲醇中混匀。甲醇水溶液：量取 甲醇加入 水中混匀。缓冲溶液：称取 和 溶于 水中，用 盐酸（）调 到 后稀释至 。三氯乙酸溶液：称取 三氯乙酸加入 水中溶解混匀。阴离子交换萃取小柱：混合型阴离子交换填料（），或相当者。犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发
5、售 硫普罗宁（号：，分子式：）标准品，纯度大于等于 。巯基丙酸（号：，分子式：）标准品，纯度大于等于 。标准储备液：准确称取适量的硫普罗宁及其代谢物，分别用甲醇分别配制成 的标准储备液，避光保存。再用乙腈稀释配制 的混合标准溶液，避光保存。有效期个月。空白样品提取液：用不含硫普罗宁及其代谢物的样品，按照 和 制备空白样品溶液。标 准 工 作 溶 液：根 据 需 要 用 空 白 样 品 溶 液 将 标 准 储 备 液 稀 释 成 、的混合标准工作溶液，现配。滤膜：，有机相。仪器和设备 液相色谱质谱质谱联用仪，配有电喷雾（）源。分析天平：感量 ，。涡旋混合器。离心机：。无油真空泵。旋转蒸发仪。固相
6、萃取装置。高速均质器。氮气吹干仪。超声波发生器。试样制备和保存牛肉、牛肝和牛肾取样品中有代表性的约 ，用组织捣碎机捣碎，装入洁净容器作为试样，密封并做好标识，于 冰箱内保存。牛奶：取有代表性样品约 ，搅拌均匀后装入洁净容器内密封并做好标识，于 冰箱内保存。制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。测定步骤 提取称取试样（精确到 ）于 离心管中，加入 缓冲液（），再加入 丙烯酸甲酯乙腈（）溶液，涡旋，室温超声 。加入 三氯乙酸水溶液（），混匀后加入 乙酸乙酯（），涡旋 ，离心 （），将上清液转移到 离心管中，用 乙酸乙酯（）重复提取一次，合并上清液。在 减压旋转蒸发至干。净化依次用
7、 甲醇活化，水平衡阴离子固相萃取小柱（）。用 （）分三次（每次 ）涡旋振荡溶解 提取液残留物，并依次过柱，控制固相萃取柱上样流速约为 ，依次用 水、甲醇淋洗固相萃取柱，弃去上述滤液。用 甲酸甲醇溶液（）洗脱，洗脱流速约为 ，收集洗脱液，在 氮气吹干，用 甲醇水溶液（）定容，充分振荡溶解残渣，用 滤膜过滤，待测。测定 色谱条件）色谱柱：柱 （内径），或相当者；犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售）柱温：；）进样量：；）梯度洗脱，洗脱程序参见附录表。质谱条件）离子源：电喷雾源（），负离子；）扫描方式：选择反应监测（）；）雾化气、气帘气、碰撞气均为高纯氮气或其他高纯气体；使用前应调节各气体流
8、量以使质谱灵敏度达到检测要求；）喷雾电压、去集簇电压、碰撞能等电压值应优化至最优灵敏度。色谱测定根据试样中被测物的含量情况，选取响应值适宜的标准工作液进行色谱分析，标准工作液应有六个浓度水平（包括零点）。标准工作液和待测样液中硫普罗宁及其代谢物 巯基丙酸的响应值均应在仪器线性响应范围内。上述色谱条件下，硫普罗宁衍生物的保留时间约为 ，代谢物 巯基丙酸衍生物的保留时间约为 、母离子和子离子参见附录中表。标准品选择离子流图参见附录中图。定性测定进行样品测定时，如果检出的质量色谱峰保留时间与标准样品一致，并且在扣除背景后的样品谱图中，各定性离子的相对丰度与浓度接近的同样条件下得到的标准溶液谱图相比，
9、最大允许相对偏差不超过表中规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。表定性确证时相对离子丰度的最大允许相对偏差相对离子丰度 允许的相对偏差 空白实验除不称取样品外，均按上述测定条件和步骤进行。结果计算和表述用数据处理软件中的外标法，或绘制标准曲线，按式（）计算试样中硫普罗宁及其代谢物药物的残留量：犡犻（犮犻犮犻）犞犿 （）式中：犡犻 试样中硫普罗宁药物及其代谢物残留量，单位为毫克每千克（）；犞 样品最终定容体积，单位为毫升（）；犮犻 由标准曲线而得的样液中硫普罗宁药物及其代谢物药物的含量，单位为微克每升（）；犮犻 由标准曲线而得的空白实验中硫普罗 宁 药 物 及 其 代 谢 物 药 物 的
10、含 量，单 位 为 微 克每升（）；犿 试样量，单位为克（）。测定低限与回收率 测定低限本方法的测定牛奶中低限硫普罗宁及其代谢物均为：。本方法的测定牛肉、牛肝和牛肾中低限硫普罗宁及其代谢物均为：。犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售 回收率回收率见表。表硫普罗宁及其代谢物添加回收结果样品添加水平（）回收率硫普罗宁 巯基丙酸牛奶 牛肉 牛肝 牛肾 犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售附录犃（资料性附录）液相色谱质谱质谱法与高效液相色谱法梯度洗脱条件表犃 液相色谱质谱质谱法梯度洗脱程序时间 流速（）甲醇 甲酸 犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售附录犅（资料性附录）液相色谱
11、质谱质谱法仪器参数与监测离子表犅 质谱参数离子模式 ，负离子源温度 气帘气 辅助气碰撞气 喷雾电压 数据采集参数 ，表犅 选择离子及碰撞能量中文名称简写母离子（）子离子（）碰撞能量 硫普罗宁衍生物 巯基丙酸衍生物 为定量离子。犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售附录犆（资料性附录）液相色谱质谱质谱法与液相色谱法标准品谱图）图犆 硫普罗宁及其代谢物 巯基丙酸标准品衍生物液相色谱质谱质谱图犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售犉 狅 狉 犲 狑 狅 狉 犱犃 狀 狀 犲 狓犃，犪 狀 狀 犲 狓犅犪 狀 犱犪 狀 狀 犲 狓犆狅 犳 狋 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犪 狉
12、 犲 犻 狀 犳 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狏 犲犪 狀 狀 犲 狓犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊狆 狉 狅 狆 狅 狊 犲 犱犫 狔犪 狀 犱狑 犪 狊狌 狀 犱 犲 狉 狋 犺 犲犮 犺 犪 狉 犵 犲狅 犳 狋 犺 犲犆 犲 狉 狋 犻 犳 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犃 犮 犮 狉 犲 犱 犻 狋 犪 狋 犻 狅 狀犃 犱 犿 犻 狀 犻 狊 狋 狉 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 狋 犺 犲犘 犲 狅 狆 犾 犲狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻 犮狅 犳犆 犺 犻 狀 犪 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊犱 狉 犪 犳 狋 犲 犱犫 狔犑 犻
13、 犪 狀 犵 狊 狌犈 狀 狋 狉 狔 犈 狓 犻 狋 犐 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犙 狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲犅 狌 狉 犲 犪 狌狅 犳狋 犺 犲犘 犲 狅 狆 犾 犲狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻 犮狅 犳犆 犺 犻 狀 犪，犎 狌 狀 犪 狀犈 狀 狋 狉 狔 犈 狓 犻 狋犐 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犙 狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲犅 狌 狉 犲 犪 狌狅 犳狋 犺 犲犘 犲 狅 狆 犾 犲狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻 犮狅 犳犆 犺 犻 狀 犪，犎 狌 犫 犲 犻犈 狀 狋 狉 狔 犈 狓 犻 狋 犐 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻
14、 狅 狀犪 狀 犱犙 狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲犅 狌 狉 犲 犪 狌狅 犳 狋 犺 犲犘 犲 狅 狆 犾 犲狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻 犮狅 犳犆 犺 犻 狀 犪，犔 犻 犪 狅 狀 犻 狀 犵犈 狀 狋 狉 狔 犈 狓 犻 狋 犐 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犙 狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲犅 狌 狉 犲 犪 狌狅 犳 狋 犺 犲犘 犲 狅 狆 犾 犲狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻 犮狅 犳犆 犺 犻 狀 犪 犜 犺 犲狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊犿 犪 犻 狀 犾 狔犱 狉 犪 犳 狋 犲 犱犫 狔犡 狌犑 犻 狀 狕 犺 狅 狀 犵，犔 犻 狀
15、犎 狅 狀 犵，犣 犺 犪 狀 犵犡 犻 犪 狅 狔 犪 狀，犇 犻 狀 犵犜 犪 狅，犎 狌 犪 狀 犵犑 狌 犪 狀，犔 犻 狌犢 犪 狀，犣 犺 犪 狀 犵犑 犻 狀，犇 犪 犻犎 狌 犪，犎 狌犡 犻 犪 狅 狕 犺 狅 狀 犵，犔 犻 狀犠 犲 犻 狓 狌 犪 狀，犠狌犅 犻 狀，犑 犻 犪 狀 犵犢 狌 犪 狀，犜 犪 狅犎 狅 狀 犵 犼 犻 狀 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犻 狊犪狆 狉 狅 犳 犲 狊 狊 犻 狅 狀 犪 犾 狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犳 狅 狉犲 狀 狋 狉 狔 犲 狓 犻 狋 犻 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱狇 狌 犪
16、 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲狆 狉 狅 犿 狌 犾 犵 犪 狋 犲 犱犳 狅 狉 狋 犺 犲犳 犻 狉 狊 狋 狋 犻 犿 犲 犖 狅 狋 犲：犜 犺 犻 狊犈 狀 犵 犾 犻 狊 犺狏 犲 狉 狊 犻 狅 狀，犪狋 狉 犪 狀 狊 犾 犪 狋 犻 狅 狀犳 狉 狅 犿狋 犺 犲犆 犺 犻 狀 犲 狊 犲狋 犲 狓 狋，犻 狊狅 狀 犾 狔犳 狅 狉 狉 犲 犳 犲 狉 犲 狀 犮 犲 犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 狋 犻 狅 狆 狉 狅 狀 犻 狀犪 狀 犱 犻 狋 狊犿 犲 狋 犪 犫 狅 犾 犻 狋 犲 狊狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀犳 狅 狅 犱 狊 狋 狌 犳 犳 狊狅 犳犪 狀 犻 犿 犪 犾 狅 狉 犻 犵 犻 狀犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犔 犆 犕 犛犕 犛犿 犲 狋 犺 狅 犱犛 犮 狅 狆 犲犜 犺 犲狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狊 狆 犲 犮 犻 犳 犻 犲 狊狋 犺 犲犿 犲 狋 犺 狅 犱狅 犳犱 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻
