1、书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛 犖犜 进出口蜂王浆中咖啡因含量的测定方法液相色谱 串联质谱法犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 犮 犪 犳 犳 犲 犻 狀 犲 犻 狀狉 狅 狔 犪 犾 犼 犲 犾 犾 狔犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犔 犆 犕 犛犕 犛 发布 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布书书书前言本标准的附录、附录均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国湖南出入境检验检疫局、中华人民共和国湖北出入境检验检疫局、中华人民共和国浙江出入境检验检疫局。本
2、标准主要起草人：王美玲、王鹏、魏颖、陈笑梅、戴华。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。犛 犖犜 进出口蜂王浆中咖啡因含量的测定方法液相色谱 串联质谱法范围本方法规定了蜂王浆中咖啡因含量液相色谱 串联质谱法的测定方法。本方法适用进出口蜂王浆中咖啡因含量测定的制样和测定方法。方法提要试样中的咖啡因用水提取，沉淀蛋白质后，经 固相萃取小柱净化，液相色谱 质谱质谱法测定，外标法定量。试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。乙腈：高效液相色谱级。甲醇：高效液相色谱级。甲酸：优级纯。乙酸铅。草酸钾。磷酸氢二钠。乙酸铅溶液：取 乙酸铅，溶解水中并定容至 。草酸钾 磷酸氢二钠溶液：取
3、草酸钾，磷酸氢二钠，加入 水溶解。甲醇水溶液：取 甲醇用水定容到 。甲醇水溶液：取 甲醇用水定容到 。甲酸溶液：准确取 甲酸用水定容到 。咖啡因（，编号 ，相对分子质量 ）：纯度大于等于 。标准储备溶液：准确称取适量咖啡因标准品，用水溶解配成 的标准溶液，避光保存，本标准溶液在半年内稳定。标准工作溶液：临用时用 甲醇水溶液将标准储备溶液稀释成含咖啡因、的标准工作溶液。固相萃取柱：固相萃取小柱（，）或相当者。使用前用 甲醇和 水预洗。滤膜，有机系。仪器和设备 高效液相色谱 四极杆串联质谱联用仪：配电喷雾（）离子源。离心机：。涡旋混匀器：可调。超声波清洗器。天平，感量为 、。犛 犖犜 试样制备和保
4、存取代表性样品约 ，将其用力搅拌均匀，装入洁净容器内，密封，并标明标记，于 以下保存。在制样过程中，应防止样品受到污染或发生所测物质量的变化。测定步骤 提取和净化准确（准确到 ）混合均匀的样品于 离心管中，加入 水，于超声波清洗器上超声 ，冷却后加入 乙酸铅溶液，草酸钾 磷酸氢二钠溶液，涡旋混匀器上混匀，于 离心 后，取上清液过 固相萃取柱，以滴洗脱速度，用 水、甲醇水淋洗后，负压抽干，用 甲醇水溶液洗脱并收集并定容至 ，混匀后，过 滤膜，供液相色谱 质谱质谱法测定。测定 液相色谱 四极杆串联质谱条件）色谱柱：色谱柱（，）或相当者；）柱温：；）流动相和洗脱程序见表；流速：；表流动相和洗脱程序时
5、间 甲酸乙腈 ）进样量：；）离子源：电喷雾，正离子；）扫描方式：多反应监测（）；）雾化气、气帘气、辅助气、碰撞气均为高纯氮气或其他高纯气体；监测离子对（）和其他参考条件见附录表。犔 犆 犕 犛犕 犛测定根据样液中待测物的含量，选定浓度相近的标准校正溶液，试液中待测物的响应值应在仪器检测的线性范围内。校正溶液及样液等体积进样测定，在上述色谱条件下，咖啡因的保留时间分别约为 ，标准的提取离子质谱图见附录中的图。外标法定量。液相色谱质谱确证在上述液相色谱 串联质谱条件下进行测定，试液中待测物的保留时间应在校正溶液保留时间的时间窗内，各离子对的相对丰度应与校正溶液的相对丰度一致，误差不超过表中规定的范
6、围。表定性确证时相对离子丰度的最大允许误差相对离子丰度 允许的相对误差 犛 犖犜 空白试验除不加试样外，均按上述测定步骤进行。结果计算和表述按照式（）计算样品中咖啡因含量，计算结果需扣除空白。犡犃犮犞犃犿（）式中：犡 试样中咖啡因的含量，单位为微克每千克（）；犃 样液中咖啡因的峰面积或峰高；犮 标准工作曲线液上查得的标液中咖啡因的浓度，单位为纳克每毫升（）；犞 样液最终定容体积，单位为毫升（）；犃 标准工作液中咖啡因的峰面积或峰高；犿 最终样液所代表的试样质量，单位为克（）。测定低限、回收率 测定低限本方法测定低限为 。回收率蜂王浆中添加 、浓度水平时，回收率范围见表。表回收率试验结果添加浓度
7、（）回收率 犛 犖犜 附录犃（资料性附录）犃 犘 犐 犔 犆 犕 犛犕 犛系统电喷雾离子源参考条件）监测离子对及电压参数：）气帘气（）：（）；）雾化气（）：（）；）辅助加热器（）：（）；）离子源喷雾器电压（）：；）喷雾针温度（）：；）：；）碰撞气（）：；）定性离子对、定量离子对、去簇电压、碰撞能量、碰撞室出口电压见表 。表 犃 监测离子对及电压参数表待测物 咖啡因 为定量离子对。）非商业性声明：附录表 所列参数是在 质谱仪完成的，此处列出试验用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家和型号的仪器。犛 犖犜 附录犅（资料性附录）咖啡因标准品提取离子色谱图）图 犅 咖
8、啡因标准品的提取离子色谱图犛 犖犜 犉 狅 狉 犲 狑 狅 狉 犱犃 狀 狀 犲 狓犃犪 狀 犱犪 狀 狀 犲 狓犅狅 犳 狋 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犪 狉 犲 犻 狀 犳 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狏 犲犪 狀 狀 犲 狓犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊狆 狉 狅 狆 狅 狊 犲 犱犫 狔犪 狀 犱 犻 狊狌 狀 犱 犲 狉 狋 犺 犲犮 犺 犪 狉 犵 犲狅 犳 狋 犺 犲犆 犲 狉 狋 犻 犳 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犃 犮 犮 狉 犲 犱 犻 狋 犪 狋 犻 狅 狀犃 犱 犿 犻 狀 犻 狊 狋 狉 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 狋 犺 犲
9、犘 犲 狅 狆 犾 犲狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻 犮狅 犳犆 犺 犻 狀 犪 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊犱 狉 犪 犳 狋 犲 犱犫 狔犎 狌 狀 犪 狀，犎 狌 犫 犲 犻 犪 狀 犱犣 犺 犲 犼 犻 犪 狀 犵犈 狀 狋 狉 狔 犈 狓 犻 狋 犐 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犙 狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲犅 狌 狉 犲 犪 狌狅 犳 狋 犺 犲犘 犲 狅 狆 犾 犲狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻 犮狅 犳犆 犺 犻 狀 犪 犜 犺 犲犿 犪 犻 狀犱 狉 犪 犳 狋 犲 狉 狊狅 犳狋 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犪 狉
10、犲 犠 犪 狀 犵 犕 犲 犻 犾 犻 狀 犵，犠 犪 狀 犵犘 犲 狀 犵，犠 犲 犻犢 犻 狀 犵，犆 犺 犲 狀 犡 犻 犪 狅 犿 犲 犻犪 狀 犱犇 犪 犻犎 狌 犪 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犻 狊犪狆 狉 狅 犳 犲 狊 狊 犻 狅 狀 犪 犾 狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狆 狉 狅 犿 狌 犾 犵 犪 狋 犲 犱犳 狅 狉 狋 犺 犲犳 犻 狉 狊 狋 狋 犻 犿 犲 犛 犖犜 犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳犮 犪 犳 犳 犲 犻 狀 犲 犻 狀狉 狅 狔 犪 犾 犼 犲 犾 犾 狔犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋犪 狀 犱犲
11、狓 狆 狅 狉 狋犔 犆 犕 犛犕 犛犛 犮 狅 狆 犲犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狊 狆 犲 犮 犻 犳 犻 犲 狊狋 犺 犲犿 犲 狋 犺 狅 犱 狊犱 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳犮 犪 犳 犳 犲 犻 狀 犲犮 狅 狀 狋 犲 狀 狋 狊 犻 狀狉 狅 狔 犪 犾 犼 犲 犾 犾 狔犫 狔犔 犆 犕 犛犕 犛犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犻 狊犪 狆 狆 犾 犻 犮 犪 犫 犾 犲狋 狅狋 犺 犲犱 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 犮 犪 犳 犳 犲 犻 狀 犲犮 狅 狀 狋 犲 狀 狋 狊 犻 狀狉 狅 狔
12、 犪 犾 犼 犲 犾 犾 狔犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋 犃 犫 狊 狋 狉 犪 犮 狋狅 犳犿 犲 狋 犺 狅 犱犜 犺 犲犮 犪 犳 犳 犲 犻 狀 犲 犻 狊犲 狓 狋 狉 犪 犮 狋 犲 犱 犳 狉 狅 犿狋 犺 犲 狋 犲 狊 狋 狊 犪 犿 狆 犾 犲狑 犻 狋 犺狑 犪 狋 犲 狉 犃 犳 狋 犲 狉 狆 狉 犲 犮 犻 狆 犻 狋 犪 狋 犻 狀 犵狆 狉 狅 狋 犲 犻 狀犪 狀 犱犮 犾 犲 犪 狀 犻 狀 犵狌 狆狑 犻 狋 犺犆 犛 犘 犈犮 狅 犾 狌 犿 狀 狊，犻 狋 犻 狊犱 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犲 犱犫 狔犔 犆
13、 犕 犛犕 犛犪 狀 犱狇 狌 犪 狀 狋 犻 犳 犻 犲 犱犫 狔犲 狓 狋 犲 狉 狀 犪 犾犿 犲 狋 犺 狅 犱犚 犲 犪 犵 犲 狀 狋 狊犪 狀 犱犿 犪 狋 犲 狉 犻 犪 犾 狊犃 犾 犾 狉 犲 犪 犵 犲 狀 狋 狊狑 犲 狉 犲狅 犳犪 狀 犪 犾 狔 狋 犻 犮 犪 犾 犵 狉 犪 犱 犲狌 狀 犾 犲 狊 狊狅 狋 犺 犲 狉 狑 犻 狊 犲狊 狆 犲 犮 犻 犳 犻 犲 犱犪 狀 犱犱 犻 狊 狋 犻 犾 犾 犲 犱狑 犪 狋 犲 狉狑 犲 狉 犲狌 狊 犲 犱 犃 犮 犲 狋 狅 狀 犻 狋 狉 犻 犾：犎 犘 犔 犆犵 狉 犪 犱 犲 犕 犲 狋 犺 犪 狀 狅
14、 犾：犎 犘 犔 犆犵 狉 犪 犱 犲 犉 狅 狉 犿 犻 犮犪 犮 犻 犱：犌 狌 犪 狉 犪 狀 狋 犲 犲 犱犵 狉 犪 犱 犲 犔 犲 犪 犱犪 犮 犲 狋 犪 狋 犲 犘 狅 狋 犪 狊 狊 犻 狌 犿狅 狓 犪 犾 犪 狋 犲 犇 犻 狊 狅 犱 犻 狌 犿犺 狔 犱 狉 狅 犵 犲 狀狆 犺 狅 狊 狆 犺 犪 狋 犲 犾 犲 犪 犱犪 犮 犲 狋 犪 狋 犲狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀：犠 犲 犻 犵 犺 狋 犵 犾 犲 犪 犱犪 犮 犲 狋 犪 狋 犲，狋 犺 犲 狀犱 犻 狊 狊 狅 犾 狏 犲狋 狅 犿 犔狏 狅 犾 狌 犿 犲狑 犻 狋 犺犱 犻 狊 狋 犻 犾 犾
15、犲 犱狑 犪 狋 犲 狉 犘 狅 狋 犪 狊 狊 犻 狌 犿狅 狓 犪 犾 犪 狋 犲 犱 犻 狊 狅 犱 犻 狌 犿犺 狔 犱 狉 狅 犵 犲 狀狆 犺 狅 狊 狆 犺 犪 狋 犲狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀：犠 犲 犻 犵 犺 狋犵狆 狅 狋 犪 狊 狊 犻 狌 犿狅 狓 犪 犾 犪 狋 犲犪 狀 犱犵犱 犻 狊 狅 犱 犻 狌 犿犺 狔 犱 狉 狅 犵 犲 狀狆 犺 狅 狊 狆 犺 犪 狋 犲，狋 犺 犲 狀犱 犻 狊 狊 狅 犾 狏 犲狋 狅 犿 犔狏 狅 犾 狌 犿 犲狑 犻 狋 犺犱 犻 狊 狋 犻 犾 犾 犲 犱狑 犪 狋 犲 狉 犛 犖犜 犿 犲 狋 犺 犪 狀 狅 犾 犪
16、狇 狌 犲 狅 狌 狊狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀：犿 犔犿 犲 狋 犺 犪 狀 狅 犾狑 犪 狊犱 犻 犾 狌 狋 犲 犱狋 狅 犿 犔狏 狅 犾 狌 犿 犲狑 犻 狋 犺犱 犻 狊 狋 犻 犾 犾 犲 犱狑 犪 狋 犲 狉 犿 犲 狋 犺 犪 狀 狅 犾 犪 狇 狌 犲 狅 狌 狊狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀：犿 犔犿 犲 狋 犺 犪 狀 狅 犾狑 犪 狊犱 犻 犾 狌 狋 犲 犱狋 狅 犿 犔狏 狅 犾 狌 犿 犲狑 犻 狋 犺犱 犻 狊 狋 犻 犾 犾 犲 犱狑 犪 狋 犲 狉 犳 狅 狉 犿 犻 犮犪 犮 犻 犱犪 狇 狌 犲 狅 狌 狊狊 狅 犾 狌 狋 犻 狅 狀：犿 犔狅 犳 犳 狅 狉 犿 犻 犮犪 犮 犻 犱狑 犪 狊犱 犻 犾 狌 狋 犲 犱狋 狅 犿 犔狏 狅 犾 狌 犿 犲狑 犻 狋 犺犱 犻 狊 狋 犻 犾 犾 犲 犱狑 犪 狋 犲 狉 犆 犪 犳 犳 犲 犻 狀 犲（犆犎 犖犗，犆 犃 犛犖 狅：，犕 狅 犾 犲 犮 狌 犾 犪 狉狑 犲 犻 犵 犺 狋：）：狆 狌 狉 犻 狋 狔 犛 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狊 狋 狅 狉 犲狊 狅 犾 狌 狋 犻
