1、第四章第四章 实验室检验技术实验室检验技术 血液检验血液检验 1、血液样本的采取、血液样本的采取 采血的部位和方法，根据检验的项目、所采血的部位和方法，根据检验的项目、所需血量和动物种类的不同，可分为毛细血需血量和动物种类的不同，可分为毛细血管采血、静脉采血和心脏采血。管采血、静脉采血和心脏采血。毛细血管采血法毛细血管采血法 除血沉测定和红细胞压积测定需除血沉测定和红细胞压积测定需较多量血液外较多量血液外，其他各项测定均可在耳尖其他各项测定均可在耳尖、耳缘耳缘及耳静脉处按毛细血管采血及耳静脉处按毛细血管采血。采血前先剪毛采血前先剪毛，酒酒精棉球消毒精棉球消毒，待酒精挥发后待酒精挥发后，用消毒的
2、干燥的针用消毒的干燥的针头迅速刺入头迅速刺入23mm深深，让血液自然流出让血液自然流出，且勿挤且勿挤压以免混入过多组织液压以免混入过多组织液。流出的第一滴血流出的第一滴血，可用于制作血片可用于制作血片，然后用干然后用干棉球擦去局部的剩余血液棉球擦去局部的剩余血液，用流出的第二滴血用流出的第二滴血液作红液作红、白细胞计数和血红蛋白测定白细胞计数和血红蛋白测定，若利用若利用第三滴血时第三滴血时，仍要将第二滴血擦干仍要将第二滴血擦干，否则流出否则流出的血不能形成滴状的血不能形成滴状，不易吸取不易吸取。静脉采血法静脉采血法 犬犬、猫可于小腿外侧跖背外侧静脉或前臂内侧猫可于小腿外侧跖背外侧静脉或前臂内侧
3、皮下静脉采血皮下静脉采血。局部剪毛消毒局部剪毛消毒，用止血带扎住采血部上端用止血带扎住采血部上端，使静脉怒张使静脉怒张，用消毒用消毒、干燥的注射器接上针头干燥的注射器接上针头，针头斜上面针头斜上面刺入静脉采血刺入静脉采血，待抽至所需量后待抽至所需量后，先放松止血带先放松止血带，再用消毒再用消毒棉球按住伤口棉球按住伤口，拔出针头拔出针头。除去针头除去针头，将血液缓缓注入清洁将血液缓缓注入清洁的试管内的试管内。需抗凝血液时需抗凝血液时，试管内加抗凝剂试管内加抗凝剂，并立即混匀并立即混匀，以免凝固以免凝固。第一节第一节 血液检验血液检验 1后肢外侧跗外静脉、内侧隐静脉、前肢 内侧皮下头静脉采血 2股
4、动脉采血 3.心脏采血同大、小鼠心脏采血 4耳缘静脉采血同兔耳缘静脉采血 采血方法的选择，决定于实验目的所需血量以及动物种类。凡用血量较少的检验如红、白细胞计数、血红蛋白的测定，血液涂片以及酶活性微量分析法等，可刺破组织取毛细血管的血。当需血量较多时可作静脉采血。静脉采血时，假设需反复屡次，应自远离心脏端开始，以免发生栓塞而影响整条静脉。研究毒物对肺功能的影响、血液酸碱平衡、水盐代谢紊乱、血液pH值以及 K+、Na+、Cl-离子浓度，必须采取动脉血液。采血场所有充足的光线；室温夏季最好保持在2528，冬季，1520为宜；采血用具有采用部位一般需要进行消毒；采血用的注射器和试管必须保持清洁枯燥；
5、假设需抗凝全血，在注射器或试管内需预先参加抗凝剂。采血时要注意 取少量血，犬猫耳静脉。取中量血：后肢外侧皮下小隐静脉 前肢内侧皮下头静脉 颈静脉 取大量血 股动脉、颈动脉 最多狗100ml、猫10ml 心脏 血液检验血液检验 血液的抗凝血液的抗凝 草酸钠草酸钠 是常用的抗凝剂，每是常用的抗凝剂，每1.52.0mg可抗凝可抗凝1.0ml血液，可用于血液常规检验。因对红细胞大小有影响血液，可用于血液常规检验。因对红细胞大小有影响，故不能用红细胞压积测定，如测定红细胞压积时，故不能用红细胞压积测定，如测定红细胞压积时，可用双草酸盐抗凝剂或乙二胺四乙酸二钠。可用双草酸盐抗凝剂或乙二胺四乙酸二钠。双草酸
6、盐抗凝剂双草酸盐抗凝剂 草酸钠草酸钠 0.8g 草酸铵草酸铵 1.2g 蒸馏水蒸馏水 加至加至100ml 溶解后吸取溶解后吸取0.5ml，参加供采血试管或小瓶中，置枯，参加供采血试管或小瓶中，置枯燥箱内燥箱内温度不超过温度不超过80烘干备用，可供烘干备用，可供5ml全血全血抗凝。抗凝。血液检验血液检验 乙二胺四乙酸二钠乙二胺四乙酸二钠EDTANa2每每10mg可使可使5ml全血抗凝；或配成全血抗凝；或配成10%的溶液的溶液，每每2滴可使滴可使5ml全血全血抗凝抗凝。可适用于一般的血液学检查可适用于一般的血液学检查，特别是血小板计特别是血小板计数数，但因为影响血小板聚集和白细胞吞噬功能但因为影响
7、血小板聚集和白细胞吞噬功能，不适不适合于血象及血小板功能检查合于血象及血小板功能检查。3.8%枸橼酸钠溶液枸橼酸钠溶液 每每0.5ml可使可使5ml全血抗凝全血抗凝。常用于血沉常用于血沉、凝血因子和血小板功能检查凝血因子和血小板功能检查。因因其毒性小又可作为血液保养液其毒性小又可作为血液保养液。但不适用于血但不适用于血液化学检验液化学检验。由于抗凝剂溶解缓慢由于抗凝剂溶解缓慢，故只能配故只能配成溶液成溶液，不能用粉剂不能用粉剂。血液的抗凝血液的抗凝 血液检验血液检验 肝素肝素 肝素价格最贵，其优点是抗凝作用强，不影响肝素价格最贵，其优点是抗凝作用强，不影响血细胞的体积，不致溶血等，可用于多种血
8、液生物化血细胞的体积，不致溶血等，可用于多种血液生物化学分析和红细胞压积测定。但过量的肝素可引起白细学分析和红细胞压积测定。但过量的肝素可引起白细胞聚集和血小板减少，故不适用于白细胞和血小板计胞聚集和血小板减少，故不适用于白细胞和血小板计数，也不适用于血涂片检查，因其在瑞氏染色时会出数，也不适用于血涂片检查，因其在瑞氏染色时会出现蓝色背景，更不能用于凝血象的检查。现蓝色背景，更不能用于凝血象的检查。血液的抗凝血液的抗凝 通常用肝素粉剂配成通常用肝素粉剂配成1g/L水溶液。取水溶液。取0.5ml置小瓶内置小瓶内，放于，放于3750中烘干后贮于冰箱内保存。能使中烘干后贮于冰箱内保存。能使5ml血液
9、不凝固，肝素抗凝剂应及时使用，放置过久易血液不凝固，肝素抗凝剂应及时使用，放置过久易失效。失效。疑心传染病时，采血应防止到处流散，检后剩余血疑心传染病时，采血应防止到处流散，检后剩余血液及所用器皿应进行消毒处理。液及所用器皿应进行消毒处理。血液检验血液检验 红细胞沉降率测定红细胞沉降率测定 魏氏法魏氏法 魏氏血沉管长魏氏血沉管长30cm，内径内径2.5mm管上有管上有0200的刻度的刻度，每一刻度每一刻度的距离为的距离为1mm，其溶积为其溶积为1ml。先向先向10ml刻度试管中参加刻度试管中参加3.8%枸橼酸枸橼酸1ml，再自静脉采血再自静脉采血4ml，颠倒混合数次颠倒混合数次，然后用魏然后用
10、魏氏血沉管吸取抗凝剂至刻度氏血沉管吸取抗凝剂至刻度0处处，擦去管外血擦去管外血液液，在室温条件下在室温条件下，垂直放于血沉管架上垂直放于血沉管架上，经经15、30、45、60min，分别观察并记录细胞分别观察并记录细胞沉降数值沉降数值。血液检验血液检验 红细胞沉降率测定红细胞沉降率测定“六五型血沉管法“六五六五”型血沉管法内径型血沉管法内径0.9cm，全长，全长1720cm，管上，管上有有100个刻度容积为个刻度容积为10ml。于血沉管中参加抗凝剂于血沉管中参加抗凝剂草酸钠草酸钠0.0150.02g，枸橼酸钠粉末枸橼酸钠粉末0.040.05g,自颈静脉直接采血自颈静脉直接采血至刻度至刻度“0处
11、，立即充分混合，于室温垂直处，立即充分混合，于室温垂直立于试管架上，镜立于试管架上，镜15、30、45、60min各观察各观察一次，并记录红细胞沉降的数值。一次，并记录红细胞沉降的数值。血液检验血液检验 血红蛋白测定血红蛋白测定 红细胞遇酸溶解，游离出血红蛋白，红细胞遇酸溶解，游离出血红蛋白，并被酸化为褐色的酸性血红素，稀释并被酸化为褐色的酸性血红素，稀释后与标准色柱比色，即可求得血红蛋后与标准色柱比色，即可求得血红蛋白的含量。白的含量。血红蛋白试纸测定法血红蛋白试纸测定法 器材应备有测定血红蛋白试纸器材应备有测定血红蛋白试纸和和4g%15g%血红蛋白标准比色板血红蛋白标准比色板。测定时测定时
12、，取试取试纸一条纸一条，吸附被检血液一小滴吸附被检血液一小滴，待血完全浸透后待血完全浸透后，立即置于所附标准色板的小孔下立即置于所附标准色板的小孔下，肉眼与色板色泽肉眼与色板色泽进行比较进行比较，选择颜色相同或近似者选择颜色相同或近似者，即得即得100ml血液血液所含血红蛋白的克数所含血红蛋白的克数。沙利氏血红蛋白测定法沙利氏血红蛋白测定法 沙利氏血红蛋白计由比色架沙利氏血红蛋白计由比色架、标准比色柱、血红蛋白测定管及血红蛋白吸管组成、标准比色柱、血红蛋白测定管及血红蛋白吸管组成。测定管有两个刻度标志，一侧的。测定管有两个刻度标志，一侧的224刻度表示刻度表示100ml血液中含有的血红蛋白克数
13、；另一侧有血液中含有的血红蛋白克数；另一侧有20160刻度，表示刻度，表示100ml血液中所含血红蛋白的百分数。血液中所含血红蛋白的百分数。血液检验血液检验 血红蛋白测定血红蛋白测定 血红蛋白增高血红蛋白增高 见于各种原因引起见于各种原因引起的血液浓缩，如腹泻、呕吐、大汗、的血液浓缩，如腹泻、呕吐、大汗、多尿及肠梗阻等。多尿及肠梗阻等。血红蛋白减少血红蛋白减少 见于各种贫血，见于各种贫血，血液检验血液检验 红细胞计数红细胞计数 红细胞计数是将一定量的供检血液经一定倍数红细胞计数是将一定量的供检血液经一定倍数稀释后稀释后，计数一定容积的红细胞数计数一定容积的红细胞数，并换算为并换算为每立方毫米血
14、液内含量每立方毫米血液内含量。血液检验血液检验 红细胞计数红细胞计数 健康动物红细胞数健康动物红细胞数万万/立方毫米立方毫米 红细胞增多红细胞增多 可见于因各种原因引起的血液浓缩，如大出汗、胸可见于因各种原因引起的血液浓缩，如大出汗、胸膜炎和腹膜炎的渗出期等。膜炎和腹膜炎的渗出期等。红细胞减少红细胞减少 多见于各种类型贫血多见于各种类型贫血 血液检验血液检验 白细胞计数白细胞计数 用冰醋酸将红细胞破坏后，计算用冰醋酸将红细胞破坏后，计算每立方毫米内白细胞总数。每立方毫米内白细胞总数。健康动物白细胞数健康动物白细胞数个个/立方毫米立方毫米 白细胞增多白细胞增多 可见于多数细菌性感染和炎症，如猪丹
15、毒、猪肺疫、可见于多数细菌性感染和炎症，如猪丹毒、猪肺疫、结核、马鼻疽、马腺疫、肺炎、胸膜炎、腹膜炎等。白血病时以结核、马鼻疽、马腺疫、肺炎、胸膜炎、腹膜炎等。白血病时以白细胞的显著增多为特征。白细胞的显著增多为特征。白细胞减少白细胞减少 主要见于某些病毒性传染病，某些重度疾病的后期；主要见于某些病毒性传染病，某些重度疾病的后期；长期应用某些药物长期应用某些药物如氯霉素等如氯霉素等。血液检验血液检验 白细胞分类计数白细胞分类计数 以百分率表示各种类型白细胞间以百分率表示各种类型白细胞间的数量关系的数量关系，称为白细胞分类计称为白细胞分类计数数。血液检验血液检验 白细胞增多白细胞增多 嗜中性白细
16、胞增多嗜中性白细胞增多：见于肺炎及化脓性感染等。：见于肺炎及化脓性感染等。嗜酸性白细胞增多嗜酸性白细胞增多：见于某些蠕虫病、过敏性疾病：见于某些蠕虫病、过敏性疾病及湿疹等。及湿疹等。淋巴细胞增多淋巴细胞增多：见于结核、鼻疽、布氏杆菌病。：见于结核、鼻疽、布氏杆菌病。单核细胞增多单核细胞增多：见于败血性疾病，某些梨形虫病及：见于败血性疾病，某些梨形虫病及李氏杆菌等。李氏杆菌等。白细胞减少白细胞减少 嗜中性白细胞减少：见于病毒性传染病、药物中毒嗜中性白细胞减少：见于病毒性传染病、药物中毒如长期服用抗生素如长期服用抗生素、各种疾病的垂危期。、各种疾病的垂危期。嗜酸性白细胞减少：见于败血症、某些病毒病及牛梨嗜酸性白细胞减少：见于败血症、某些病毒病及牛梨形虫病等。形虫病等。淋巴细胞减少：多为嗜中性白细胞增多而造成的相对淋巴细胞减少：多为嗜中性白细胞增多而造成的相对性变化。性变化。临床意义临床意义 尿尿 液液 检检 验验 第二节第二节 尿液常规检查尿液常规检查 尿常规检查内容尿常规检查内容 透明度透明度 盛尿液于玻璃容器内，透光观察。盛尿液于玻璃容器内，透光观察。尿液一般物理性状的检查，包括透明度
