1、临床病原体检测 芮勇宇 南方医科大学南方医院检验医学科南方医科大学南方医院检验医学科 某年某年9 9月某日晚上某院急诊科来一病人月某日晚上某院急诊科来一病人，突突然起病然起病，寒战寒战、剧烈头痛剧烈头痛、恶心呕吐恶心呕吐，面色面色潮红潮红、眼结膜充血眼结膜充血、咳嗽咳嗽，左耳红肿热痛左耳红肿热痛，体温体温4040。案例分析案例分析 医生及时抽血进行血液培养医生及时抽血进行血液培养，血常规白细血常规白细胞增高及核左移胞增高及核左移。初步诊断败血症初步诊断败血症，收入院收入院，使用泰能使用泰能。但是使用泰能但是使用泰能3 3天天，病人病症没有改善病人病症没有改善，血血液培养阴性液培养阴性，给家属下
2、病危通知书给家属下病危通知书。案例分析案例分析 请南方医院专家会诊请南方医院专家会诊，详细询问病史和仔细详细询问病史和仔细体查体查，得到重要线索得到重要线索，病人一周前爬过白云病人一周前爬过白云山山，并躺在草地上休息；病人左耳有似被蚊并躺在草地上休息；病人左耳有似被蚊虫叮咬后形成焦痂虫叮咬后形成焦痂。案例分析案例分析 疑心恙虫病疑心恙虫病，外裴试验阳性外裴试验阳性。恙虫病立克次恙虫病立克次对头孢菌素类耐药对头孢菌素类耐药，用四环素类抗生素用四环素类抗生素，1 1天天后退热后退热，继续用药继续用药1 1周周，病人康复出院病人康复出院。病原体检测重要性：明确临床诊断和指导临病原体检测重要性：明确临
3、床诊断和指导临床用药床用药。案例分析案例分析 免疫室：酶链免疫吸附试验免疫室：酶链免疫吸附试验ELISAELISA、胶胶体金层析试纸条体金层析试纸条、化学发光或电化学发光化学发光或电化学发光、乳胶凝集方法乳胶凝集方法。检测肝炎病毒检测肝炎病毒、性病性病、呼吸系统病原体抗原呼吸系统病原体抗原或抗体或抗体。检验科三个实验室合作进行病原体检查检验科三个实验室合作进行病原体检查 基因室：荧光定量基因室：荧光定量PCRPCR方法方法，定量检测病原定量检测病原体基因体基因。细菌室细菌室重点重点：涂片检查：涂片检查、培养鉴定和药培养鉴定和药敏试验敏试验，检测细菌真菌检测细菌真菌。检验科三个实验室合作进行病原
4、体检查检验科三个实验室合作进行病原体检查 第一局部第一局部 细菌真菌涂片检查及临床意义细菌真菌涂片检查及临床意义 第二局部第二局部 细菌真菌培养鉴定及临床意义细菌真菌培养鉴定及临床意义 第三局部第三局部 细菌真菌药敏检测及临床意义细菌真菌药敏检测及临床意义 第四局部第四局部 临床各科科研工作结合本次课临床各科科研工作结合本次课 Part 1 Morphological examinations of bacteria and fungi 1 non-stained.2 gram stain,bacteria and fungi.3 acid-fast stain,acid-fast bacil
5、lus.4 Indian ink stain,cryptococcus.single-celled,budding forms called yeast(spore).multicellular,filamentous forms called mold(spore and hypha).dimorphic fungi,exist in two distinct morphologic forms.1 Non-stained Skin scraping,nail scraping,and observation of hairs directly by microscopy are also
6、most helpful in diagnosing dermatophytic infections.Employing a drop of potassium hydroxide(15%)on a glass slide over the surface of the specimen.hairs Skin scraping Routine urine examination Basic principle？Procedure？Peptidoglycan.crystal violet,iodine,alcohol.carbofuchsin red.Results,G+or G-,cocci
7、 or bacilli bacteria,fungi,in oil immersion field.2 Gram-stained fungi in urine positive cultured blood positive cultured blood positive cultured blood positive cultured blood positive cultured blood positive cultured blood sputum sputum sputum sputum sputum Fungi in leukorrhea,vaginitis Diplococcus
8、 Neisseria gonorrhoeae Basic principle Procedure Lipid.carbolfuchsin red,hydrochloric acid 3%alcohol,methylene blue.Results,acid-fast bacteria red,other bacteria and background blue.3 acid-fast stain The result report mode Negative,acid-fast bacilli not found,Positive(1 or 2),1 or 2 whole visual fie
9、ld,Positive+,3 to 9 whole visual field,Positive+,10 to 99 whole visual field,Positive+,1 to 9 every visual field,Positive+,10 every visual field.acid-fast bacilli from sputum+Cryptococcus in cerebrospinal fluid.Basic principle,capsule.Procedure,sediment.Results.4 the Indian ink stain Cryptococcus ne
10、oformans germinative Advantages.cheap,rapid,diagnose primarily.Disadvantages.Not accurate.Part 1 Morphological examinations of bacteria and fungi 第二局部第二局部 细菌真菌培养鉴定及临床意义细菌真菌培养鉴定及临床意义 一、血液一、血液 二、中段尿二、中段尿 三、粪便三、粪便 四、痰液四、痰液 五、咽拭子五、咽拭子 六、穿刺液六、穿刺液 七、分泌物七、分泌物 八、器械八、器械 一、血液的病原体检查一、血液的病原体检查 Etiologic Examina
11、tion of Blood and Bone MarrowEtiologic Examination of Blood and Bone Marrow 目的和意义；目的和意义；采血指征；采血指征；采血本卷须知采血本卷须知;结果报告形式结果报告形式。目前我国社会老龄化日趋严重，慢性病及恶性肿目前我国社会老龄化日趋严重，慢性病及恶性肿瘤、器官移植、爱滋病和结核病病人不断增多，侵袭瘤、器官移植、爱滋病和结核病病人不断增多，侵袭性诊疗技术广泛应用，败血症发病率不断增加。性诊疗技术广泛应用，败血症发病率不断增加。败血症病死率败血症病死率30%30%以上；以上；早期病原学诊断和合理抗早期病原学诊断和合理抗
12、生素治疗，明显降低败血症病死率。生素治疗，明显降低败血症病死率。血液培养的送检指征：血液培养的送检指征：发热发热 3838或低温或低温 1010109109/L/L，“核左移核左移白细胞增多；白细胞增多；粒细胞减少粒细胞减少，成熟的多核白细胞成熟的多核白细胞 9090次次/分；呼吸频率分；呼吸频率 2020次次/分；分；二氧化碳分压二氧化碳分压 3232mmHgmmHg；昏迷；多器官衰竭昏迷；多器官衰竭。最好在抗生素使用前采集最好在抗生素使用前采集，假设已用抗菌药须假设已用抗菌药须，那么尽量避开血药浓度那么尽量避开血药浓度的顶峰期的顶峰期，最好在下次用药前最好在下次用药前。血液标本采集时间血液
13、标本采集时间 血液标本采集时间血液标本采集时间 理想状态：在发热顶峰期前半小时理想状态：在发热顶峰期前半小时，建议第一次可在病人发热初期或顶峰期采集建议第一次可在病人发热初期或顶峰期采集，根据病人发热情况根据病人发热情况，在在2424h h内再取内再取2 2-3 3次标本次标本，最好每次最好每次“双套双套“双瓶双瓶，“双套双套指不同指不同采血部位采血部位，“双瓶双瓶指树脂瓶和厌氧瓶指树脂瓶和厌氧瓶。血液标本采集时间血液标本采集时间 标准血培养瓶标准血培养瓶蓝色帽蓝色帽：帽子和标签纸左上方为蓝色帽子和标签纸左上方为蓝色，“StandardStandard 1010 Aerobic/FAerobi
14、c/F，用于成人需氧菌和真菌培养用于成人需氧菌和真菌培养，血液量血液量3 3-1010mlml ，8 8-1010mlml最正确最正确。中和抗生素的树脂瓶中和抗生素的树脂瓶灰色帽灰色帽：帽子和标签纸左上方为灰色帽子和标签纸左上方为灰色，“PLUS+Aerobic/FPLUS+Aerobic/F ，血液量血液量3 3-1010mlml ，8 8-1010mlml最正确最正确。厌氧瓶厌氧瓶黄色或橘红色帽黄色或橘红色帽：帽子和标签纸左上方为黄色帽子和标签纸左上方为黄色，“StandardStandard Anaerobic/FAnaerobic/F，血液量血液量3 3-7 7mlml ，5 5-7
15、7mlml最正确最正确。中和抗生素的儿童瓶中和抗生素的儿童瓶粉红色粉红色帽帽：帽子和标签纸左上方为粉红色帽子和标签纸左上方为粉红色，“PEDSPEDS PLUS/FPLUS/F,血液量血液量1 1-3 3mlml。采集标本前先开申请单采集标本前先开申请单，到检验科细菌室或门诊领到检验科细菌室或门诊领取血培养瓶；取血培养瓶；采血前先在培养瓶标签纸采血前先在培养瓶标签纸左侧空白处左侧空白处箭头所指处箭头所指处填写抽血时间和病人科别填写抽血时间和病人科别、床号和姓名；床号和姓名；不要在培养瓶条形码上涂不要在培养瓶条形码上涂写写，以免影响扫描以免影响扫描。将标签纸上条形将标签纸上条形码右侧局部码右侧局
16、部含含数字数字撕下贴于撕下贴于检查申请单上；检查申请单上；而其它标本均是而其它标本均是将申请单上双联将申请单上双联号码撕下贴于标号码撕下贴于标本上本上。注射器采血后注射器采血后，将血将血培养瓶帽子揭下培养瓶帽子揭下，橡橡皮由金属皮皮由金属皮围脖围脖固定于瓶上；固定于瓶上；将橡皮塞用将橡皮塞用7070%酒精消酒精消毒毒，注射器针头刺穿注射器针头刺穿橡皮塞将血注入培养橡皮塞将血注入培养瓶内；瓶内；橡皮塞裸露即可橡皮塞裸露即可。细菌室接到已采集血液的培养瓶后，细菌室接到已采集血液的培养瓶后，立即放入自立即放入自动血液培养检测仪，动血液培养检测仪，自动培养及实时检测。自动培养及实时检测。阳性初步结果报告：阳性初步结果报告：仪器阳性报警仪器阳性报警，9090%以上阳性标本以上阳性标本2424h h内检出；内检出；取出阳性瓶取出阳性瓶，对血液涂片及革兰氏染色；对血液涂片及革兰氏染色；立即将涂片结果立即将涂片结果G+G+、G G-细菌细菌，球菌或杆菌球菌或杆菌，或或真菌真菌 通知相应科室通知相应科室，并在网上发出；并在网上发出；利用阳性血液进行利用阳性血液进行K K-B B法药敏试验法药敏试验，第二
