1、名师大讲堂 2013 高考总复习生物 土壤中分解尿素、纤维素的细菌的别离与计数土壤中分解尿素、纤维素的细菌的别离与计数 名师大讲堂 2013 高考总复习生物 1筛选分离菌株的原理筛选分离菌株的原理 提供有利于目的菌株生长而抑制其它微生物生长的条件，提供有利于目的菌株生长而抑制其它微生物生长的条件，这些条件可以是营养、温度，也可以是这些条件可以是营养、温度，也可以是 PH 等。等。别离微生物的原理别离微生物的原理 名师大讲堂 2013 高考总复习生物 2实例实例(1)加入青霉素可以分离出混杂在细菌中的酵母菌和霉菌；加入青霉素可以分离出混杂在细菌中的酵母菌和霉菌；(2)加入高浓度的食盐可得到金黄色
2、葡萄球菌；加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌；(3)培养基中缺乏氮源时，可以分离固氮微生物；培养基中缺乏氮源时，可以分离固氮微生物；(4)培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物；培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物；(5)培养基中的氮源只有尿素时，理论上只有能合成脲酶的培养基中的氮源只有尿素时，理论上只有能合成脲酶的微生物才能在上面生长。微生物才能在上面生长。名师大讲堂 2013 高考总复习生物 实验测定链霉素对实验测定链霉素对 3 种细菌的抗生素效应，用种细菌的抗生素效应，用 3 种细菌种细菌在事先准备好的琼脂块平板上画在事先准备好的琼脂块平板上画 3 条等长的平行线条等
3、长的平行线(3 条线均与条线均与下图中的链霉素带接触下图中的链霉素带接触)，将平板置于，将平板置于 37条件下恒温培养条件下恒温培养 3天，结果如天，结果如图所示。从实验结果分析以下叙述，不正确的是图所示。从实验结果分析以下叙述，不正确的是()A链霉素能阻止结核菌的生长链霉素能阻止结核菌的生长 B链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效 C链霉素对结核菌比对伤寒菌更有效链霉素对结核菌比对伤寒菌更有效 D链霉素可以用于治疗伤寒病人链霉素可以用于治疗伤寒病人 名师大讲堂 2013 高考总复习生物【解析】【解析】该实验的目的是测定链霉素对该实验的目的是测定链霉素对 3 种细菌的作
4、用效果，种细菌的作用效果，由于三种细菌的实验条件完全一致由于三种细菌的实验条件完全一致(如培养基、温度、划线时均如培养基、温度、划线时均与链霉素带直接接触等与链霉素带直接接触等)，但结果却有明显差异：结核菌数量最，但结果却有明显差异：结核菌数量最少，离链霉素带最远，说明作用效果最好，因此少，离链霉素带最远，说明作用效果最好，因此 ABC 正确；正确；伤寒菌数量最多，在链霉素带附近也能生存，说明链霉素对伤伤寒菌数量最多，在链霉素带附近也能生存，说明链霉素对伤寒菌基本没有效果，寒菌基本没有效果，D 是错误结论。是错误结论。【答案】【答案】D 名师大讲堂 2013 高考总复习生物 1 通过配置特殊的
5、培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所通过配置特殊的培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。下列哪项操作最终不能达到分离出相应微生物需的微生物。下列哪项操作最终不能达到分离出相应微生物的目的的目的()A在无氮培养基上可从多种细菌中分离出圆褐固氮菌在无氮培养基上可从多种细菌中分离出圆褐固氮菌 B在缺乏有机碳源的培养基上可以从多种细菌中分离得到在缺乏有机碳源的培养基上可以从多种细菌中分离得到硝化细菌硝化细菌 C在培养基中加青霉素可以从混杂的真菌中分离到酵母菌在培养基中加青霉素可以从混杂的真菌中分离到酵母菌 D在培养基中加高浓度食盐可以分离得到金黄色葡萄球菌在培养基中加高浓度食盐可以分离得
6、到金黄色葡萄球菌 名师大讲堂 2013 高考总复习生物 答案：答案：C 解析解析：圆褐固氮菌可以利用空气中的：圆褐固氮菌可以利用空气中的 N2，硝化细菌可以利用空，硝化细菌可以利用空气中的气中的 CO2通过化通过化能合成作用合成含碳有机物，而青霉素能抑能合成作用合成含碳有机物，而青霉素能抑制原核生物合成肽聚糖，只能将酵母菌从原核生物中分离出制原核生物合成肽聚糖，只能将酵母菌从原核生物中分离出来。来。名师大讲堂 2013 高考总复习生物 一、分离土壤中分解尿素的细菌实验一、分离土壤中分解尿素的细菌实验 1 本实验的流程：土壤取样 本实验的流程：土壤取样样品稀释样品稀释取样涂布取样涂布微生物的微生
7、物的培养培养观察并记录结果观察并记录结果细菌计数细菌计数 土壤中分解尿素的细菌的别离实验土壤中分解尿素的细菌的别离实验 名师大讲堂 2013 高考总复习生物 2课题延伸课题延伸菌种的进一步鉴定菌种的进一步鉴定 (1)原因：由于分离分解尿素的细菌的选择培养基上可能生长原因：由于分离分解尿素的细菌的选择培养基上可能生长着以分解尿素的细菌的代谢产物为氮源的其它微生物。着以分解尿素的细菌的代谢产物为氮源的其它微生物。(2)原理：原理：CO(NH2)2H2O 脲酶脲酶 CO22NH3；由于；由于 NH3的的产生，培养基碱性增强，产生，培养基碱性增强，pH 升高，因此可通过检测升高，因此可通过检测 pH
8、的的变化来判断该化学反应是否发生。变化来判断该化学反应是否发生。(3)方法：以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培方法：以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌，若指示剂变红，则养某种细菌，若指示剂变红，则 pH 升高，说明该种细菌能升高，说明该种细菌能分解尿素。分解尿素。名师大讲堂 2013 高考总复习生物 3注意事项注意事项(1)要设置重复实验。主要目的是排除实验中人为因素对要设置重复实验。主要目的是排除实验中人为因素对实验实验结果的影响，增强实验结果说服力和准确性。统计某一稀释结果的影响，增强实验结果说服力和准确性。统计某一稀释度下平板上的菌落数时，要至少涂布度下平板
9、上的菌落数时，要至少涂布 3 个平板作重复组。个平板作重复组。(2)要设置对照实验：主要目的是排除实验组中非测试因素对要设置对照实验：主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。实验结果的影响，提高实验结果的可信度。判断培养基是否有杂菌污染，需将未接种的相同培养基同判断培养基是否有杂菌污染，需将未接种的相同培养基同条件下同时进行培养。条件下同时进行培养。判断该培养基是否具有筛选作用，需设立牛肉膏蛋白胨培判断该培养基是否具有筛选作用，需设立牛肉膏蛋白胨培养基接种相同样品后同条件下同时培养。养基接种相同样品后同条件下同时培养。名师大讲堂 2013 高考总复习生物 二、统
10、计微生物数目的方法二、统计微生物数目的方法 1显微镜直接计数法显微镜直接计数法 (1)原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。下计算一定容积的样品中微生物数量。(2)方法：用计数板计数。方法：用计数板计数。(3)缺点：不能区分死菌与活菌。缺点：不能区分死菌与活菌。名师大讲堂 2013 高考总复习生物 2间接计数法间接计数法(活菌计数法活菌计数法)(1)原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板个菌落，来
11、源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。(2)计算公式：每克样品中的菌株数计算公式：每克样品中的菌株数(C V)M，其中，其中 C 代表代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V 代表涂布平板时代表涂布平板时所用的稀释液的体积所用的稀释液的体积(mL)，M 代表稀释倍数。代表稀释倍数。名师大讲堂 2013 高考总复习生物(3)注意事项注意事项 设置重复组，增强实验的说服力与准确性。设置重复组，增强实验的说服力与准确性。为了保证结果准确，一般选择菌落数在为了保证结果准确
12、，一般选择菌落数在 30300 的平板进行的平板进行计数。计数。当菌落数目稳定时，才能进行计数，否则，会因培养时间不当菌落数目稳定时，才能进行计数，否则，会因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。足而导致遗漏菌落的数目。统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因此，统计结果一统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。般用菌落数而不是活菌数来表示。名师大讲堂 2013 高考总复习生物 用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为应稀释倍数为 106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的的培养基中，得
13、到以下几种统计结果，正确的是是()A涂布了一个平板，统计的菌落数是涂布了一个平板，统计的菌落数是 230 B涂布了两个平板，统计的菌落数是涂布了两个平板，统计的菌落数是 215 和和 260，取平均值，取平均值 238 C涂布了三个平板，统计的菌落数是涂布了三个平板，统计的菌落数是 21、212 和和 256，取平均，取平均值值 163 D涂布了三个平板，统计的菌落数是涂布了三个平板，统计的菌落数是 210、240 和和 250，取平均，取平均值值 233 名师大讲堂 2013 高考总复习生物【解析】【解析】在设计实验时一定要涂布至少在设计实验时一定要涂布至少 3 个平板作为重复组，个平板作为
14、重复组，才能增强实验的说服力与准确性，在分析实验结果时，一定要才能增强实验的说服力与准确性，在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否相差较大，如果出入较大，意考虑所设置的重复组的结果是否相差较大，如果出入较大，意味着操作有误，需重新实验，所以味着操作有误，需重新实验，所以 A、B 不正确。不正确。C 项虽然涂项虽然涂布了布了 3 个平板，但是其中一个平板的计数结果与另外两个相差个平板，但是其中一个平板的计数结果与另外两个相差太远，说明操作过程中可能出现了错误，因此不能简单的将太远，说明操作过程中可能出现了错误，因此不能简单的将 3个平板的计数值用来求平均值。个平板的计数值用来求平均
15、值。【答案】【答案】D 名师大讲堂 2013 高考总复习生物 2（2012 深圳一模）深圳一模）某学者欲研究被石油污染过的土壤中细菌某学者欲研究被石油污染过的土壤中细菌数并从中筛选出能分解石油的细菌。下列操作错误的是数并从中筛选出能分解石油的细菌。下列操作错误的是（）A.利用平板划线法对利用平板划线法对细菌细菌进行计数进行计数 B.以石油为唯以石油为唯一一碳源的培养碳源的培养基基筛选筛选 C.采用稀释涂布平板法分离菌种采用稀释涂布平板法分离菌种 D.称取和稀释土壤时应在火焰旁称取和稀释土壤时应在火焰旁 名师大讲堂 2013 高考总复习生物 答案：答案：A 解析解析：本试题考查细菌的分离和计数。
16、本试题考查细菌的分离和计数。平板划线法平板划线法只能用来分只能用来分离菌种，离菌种，稀释涂布平板法稀释涂布平板法既可用来既可用来分离菌种分离菌种，又能用来进行计，又能用来进行计数，数，A 错，错，C 正确；在分离菌种的整个操作过程中必须注意保正确；在分离菌种的整个操作过程中必须注意保持消毒或灭菌，持消毒或灭菌，D 正确。正确。名师大讲堂 2013 高考总复习生物 1纤维素酶纤维素酶 纤维素酶是一种复合酶，它包括纤维素酶是一种复合酶，它包括 C1酶、酶、CX酶和葡萄糖苷酶，酶和葡萄糖苷酶，具有催化分解纤维素的作用，其作用过程如下：具有催化分解纤维素的作用，其作用过程如下：纤维素纤维素 C1酶酶CX酶酶纤维二糖纤维二糖 葡萄糖苷酶葡萄糖苷酶葡萄糖葡萄糖 土壤中分解纤维素的细菌的别离实验土壤中分解纤维素的细菌的别离实验 名师大讲堂 2013 高考总复习生物 2纤维素分解菌的筛选原理纤维素分解菌的筛选原理 名师大讲堂 2013 高考总复习生物 3土壤中纤维素分解菌的筛选流程土壤中纤维素分解菌的筛选流程 土壤取样土壤取样选择培养选择培养梯度稀释梯度稀释将样品涂布到鉴别纤维将样品涂布到鉴别纤维素分
