1、 HIV抗体筛查试验体会及经验交流 宣武医院艾滋病筛查实验室 李秀玉 首都医科大学宣武医院艾滋病防治工作制度首都医科大学宣武医院艾滋病防治工作制度 工作小组及工作职责工作小组及工作职责 一一工作小组工作小组 组组 长：主管院长长：主管院长 副组长：门诊部主任、保健科主任副组长：门诊部主任、保健科主任 组组 员：皮肤性病科主任、妇产科主任、泌尿外科主任、检验科主员：皮肤性病科主任、妇产科主任、泌尿外科主任、检验科主任、医院感染管理科任、医院感染管理科副副主任、健康教育科负责人、门诊部护主任、健康教育科负责人、门诊部护士长士长 二二工作职责工作职责 负责我院艾滋病防治的管理工作。督导艾滋病诊断、登
2、记、报告、负责我院艾滋病防治的管理工作。督导艾滋病诊断、登记、报告、实验室初筛、宣传教育、专业培训等工作的落实。实验室初筛、宣传教育、专业培训等工作的落实。检验科 初筛初筛HIV阳性阳性 保健科 接到检验科通知 标本送至 市CDC 门急诊 初筛阳性病人 住院 初筛阳性病人 市CDC 确证确证HIV阳性阳性 皮肤性病科 流调、告知签字 保健科协助病房 流调、告知签字 检验科到市CDC 取报告、复印报告 保健科 接到检验科通知 门急诊 确证阳性病人 住院 确证阳性病人 病房主管医生 填报传染病卡 通知病人取 确证报告 保健科填报传染病卡（非皮科）皮肤性病科 填报传染病卡 通知所有门诊 病人取确证报
3、告 保健科 统一网报 宣武医院宣武医院HIV抗体初筛阳性流调抗体初筛阳性流调告知及确证阳性报告流程图告知及确证阳性报告流程图 样样 品品 初筛初筛 试验试验 一阴一一阴一阳阳 均阳性反应均阳性反应 报告阴性报告阴性 确证试验确证试验 复检试验复检试验 报告阴性报告阴性 均阴性反应均阴性反应 阳性阳性 反应反应 原有试剂另一原有试剂另一 不同原理（或厂家）不同原理（或厂家）试剂或另外两种不同试剂或另外两种不同 原理（或厂家）原理（或厂家）试剂试剂 选用筛查试剂选用筛查试剂 阴性反应阴性反应 HIVHIV抗体筛查检测流程图抗体筛查检测流程图 HIV筛查实验室的SOP文件 人类免疫缺陷病毒抗原抗体万
4、泰检查标准操作程序SOP 人类免疫缺陷病毒抗体丽珠检查标准操作程序SOP XD711酶标分析仪标准操作程序SOP Thermo Wellwash 4 MK型自动洗板机标准操作程序SOP 生物平安手册 艾滋病实验室平安防护和职业暴露预防程序(SOP)HIV标本接收 样本接收：每个检测标本均有唯一电子条码标识，经检验科扫码确认接收，信息经过LIS系统编辑，自动生成HIV检测信息名单，并在信息中心有备份。信息包括患者姓名，年龄，科室等，本筛查实验室已经取消手工登记，可随时打印电子版。HIV抗体筛查检测试剂盒 HIV抗体初筛试剂盒 万泰四代试剂盒 HIV抗体复检试剂盒 丽珠三代试剂盒 HIV抗体快速检
5、测试剂 雅培金标试剂 仅用于HIV初筛质评 万泰金标试剂 HIV初筛试剂盒万泰四代 HIV Ag检测检测:HIV Ag 固相固相 血清血清/血浆血浆 结合物结合物1/结合物结合物2 HIV 1 Ab:抗抗p24单克隆抗体单克隆抗体.生物素标记的抗生物素标记的抗HIV单克隆抗体单克隆抗体 过氧化物酶标记的亲和素过氧化物酶标记的亲和素 TMB/H2SO4 P 在同一孔中同时在同一孔中同时 检测检测HIV Ab:IgG,IgA,IgM 固相固相 血清血清/血浆血浆 结合物结合物1 HIV 1 Ag:gp 160 重组抗原重组抗原.过氧化物每标记的过氧化物每标记的gp 41肽段肽段 f功能性保守肽段功
6、能性保守肽段.过氧化物每标记的过氧化物每标记的f功能性保守肽段功能性保守肽段 HIV 2 Ag:gp36 肽段肽段.过氧化物每标记的过氧化物每标记的gp 36肽段肽段 TMB/H2SO4 P 第四代HIV酶免试剂的实验原理实验原理 HIV酶免四代诊断试剂的窗口期 3rd gen 1st-2nd gen HIV antigen IgM ab IgG ab Detection limit=window 4th 3周周 2周周 1个月个月 HIV抗原抗体联合检测万泰四代 1.按照所需数量在板架上放好酶标板条.2.设3孔阴性对照，2孔质控，1型、2型、抗原阳性对照共3孔 3.每孔加入20ul生物素试剂
7、.4.每孔加入100ul样品、对照或质控，轻轻震荡.4.37孵育60分钟.5.洗板5次.拍干.6.加入100ul酶标记物.7.37孵育30分钟.8.洗板5次.拍干.9.每孔加入显色剂A、B各50ul，轻轻震荡混匀 10.37孵育30分钟.11.每孔加入50ul终止液，10分钟内测结果 12.在450nm/620nm双波长下读数.13.计算界限值:界限值(Cut-off)=阴性对照平均值+0.12 14.判断结果：大于等于界限值判为阳性,小于界限值判为阴性.HIV抗体检测丽珠实验程序 1.按照所需数量在板架上放好酶标板条,撕去封条.2.设阴性对照3孔，HIV-1阳性对照2孔，HIV-2阳性对照2
8、孔,质控1孔 3.加入50ul样品、对照或质控.4.37孵育60分钟.5.洗板6次.6.每孔加入50ul酶标记物 7.37孵育30分钟.8.弃去孔内液体，洗板6次 9.加入底物缓冲液50ul，再加入底物液50ul，振荡混匀，37孵育30分钟 10.加入终止液50ul 9.在450nm/620nm波长下读数.10.计算界限值：界限值(Cut-off)=阴性对照平均值+0.15，阴性对照平均值小于0.08按0.08计算 11.判断结果：大于等于界限值判为阳性,小于界限值判为阴性.HIV抗体初筛阳性患者信息查询 根据北京市CDC预防控制中心所下发的新版HIV抗体复检化验单要求2022年7月1日开始实
9、行，更好的配合流行病学调查，填写HIV抗体初筛阳性患者信息 通过信息中心制作的软件，输入患者就诊的卡号，有权限的查询，姓名，性别，年龄，身份证号，籍贯，现住址，等。送检单位 首都医科大学宣武医院检验科 送检日期 2012年 3月5日 送检标本 血清 所属人群 内科门诊患者 姓名 李XX 性别 男 年龄 29 职业 不详 身份证号码 220204198302061XXX 手机号码 1352238XXX 现住址 吉林省吉林市船营区桃源路60-3-45号 户籍所在地 吉林 国籍或民族 汉 既往病史 不详 初 筛 试 验 复 检 试 验 第一次 第二次 检测日期 2012-03-05 2012-03-
10、05 2012-03-05 检测方法 ELISA ELISA ELISA 试剂厂家 万泰（四代）万泰（四代）珠海丽珠 批 号 H20111211 H20111211 2011040908 有 效 期 20121208 20121208 20120412 ELISA法 OD值 空 白 双波长无空白 双波长无空白 双波长无空白 阴性对照均值 0.001 0.008 0.005 阳性对照 3.129 2.627 3.12 临 界 值 0.121 0.128 0.23 送检标本 2.163 2.352 2.964 结 果 阳性 阴性 阳性 阴性 阳性 阴性 复检结论 HIV抗体待确认 阴性 检测者（签
11、字）：审核者（签字）：送检单位（公章）电话：83198361 邮编:100053 备注：HIV抗体复检化验单抗体复检化验单 秘密秘密 编编 号号2022030501 HIV阳性上报记录表阳性上报记录表 万泰四代酶免试剂进行初筛，发现初筛阳性标本后，先用相同试剂重复试验，结果如为阳性，再用丽珠酶免试剂重复试验，如结果仍为阳性，那么应先通知保健科，然后填好?HIV初筛阳性送检单?，由医务处联系专车送市CDC的HIV确证实验室进行确证试验。送到后领取回执，并按回执上的取报告时间,尽量由送检人领取确证报告。取回后通知保健科，门诊病人由病人本人或监护人领取确证报告，病房病人可由责任医生领取，其他人不得领
12、取确证报告。病人资料 初次试验结果 复检结果 二次复检结果 送检时间 送检人 取报告人 取报告时间 确证试验结果 领取人签名 HIV抗体检测阳性上报记录表抗体检测阳性上报记录表 HIV抗体检测质量控制 感染性疾病血清标志物系列C卫生部室间质评)每年三次 北京市艾滋病筛查实验室质控考评 每年两次 HIV抗体检测室内质控 每批次/每日 HIV抗体检测月质控图总结表 HIV抗体检测室内质控 试剂盒内的阴性、阳性对照质控品 外部质控品的选择：万泰康彻思坦HIV弱阳性质控品 规格0.5NCU/ml,1ml/支 每天每一批次都做质控条带包括3个阴性对照，两个质控，三个阳性HIV-1,HIV-2,P24对照
13、 ELISAELISA定性试验室内质控记录表定性试验室内质控记录表 日期 Level1（阴性对照）Level2（弱阳性对照）Level3（阳性对照）OD S/CO 定性 OD S/CO 定性 OD S/CO 定性 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 工程：HIV抗体 质控批号：日期：HIV抗体检测室内质控规那么 室内质控图是Levey-Jennings质控图 外部对照质控品的平均值和标准差采取实验室常规使用方法对质控品重复测定至少20次的根底上,取得至少20个数据.以光密度值OD与临界值(CUTTOFF)的商(SC0)为统计值。计算平均值()和标准差(s)，定出控制限。以2s为警告限(2s)，以3s为失控限(3s)，做成质控框架图。以后每次外部对照质控品的测定值，点入质控图。质控规那么 13S;22S;10X 实验室生物平安 进入实验室应穿隔离衣、戴手套。工作完毕，要对工作台面消毒。工作台面用0.1%次氯酸溶液消毒；每日工作完毕紫外线灯消毒2小时 工作完毕，脱去手套后洗手，再脱去工作衣，用肥皂和流动水洗手。HIV抗体阴性标本冷藏保存1周；HIV抗体初筛阳性血清样品送CDC,其余高压处理。谢 谢
