1、广西医科大学学报JOURNAL OF GUANGXI MEDICAL UNIVERSITY2023 Jan；40（1）紫花前胡苷经通过PI3K/AKT通路对结直肠癌细胞生物学行为的影响*岳峰，江旗琳，陈淼，徐媛媛（邯郸市中心医院胃肠外科，邯郸056001）摘要目的:探究紫花前胡苷（NK）经磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/丝氨酸/苏氨酸激酶（AKT）通路对结直肠癌（CRC）细胞生物学行为的影响。方法:将SW480细胞分为SW480组（SW480细胞未做任何处理）、NK低剂量组（L-NK组，40 mol/L NK）、NK中剂量组（M-NK组，60 mol/L NK）、NK高剂量组（H-NK组，80
2、mol/L NK）、H-NK+740Y-P组（80 mol/L NK+10 mol/L PI3K激活剂740Y-P处理SW480细胞）。平板克隆检测SW480细胞克隆能力；3-（4,5-二甲基噻唑-2）2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）法检测细胞增殖能力；流式细胞术和Hoechst 33258染色检测SW480细胞凋亡能力；细胞侵袭实验（Transwell）检测SW480细胞侵袭能力；MTT法检测SW480细胞黏附情况；蛋白质印迹法（Western blotting）检测黏附、凋亡以及通路相关蛋白水平。结果:与SW480组相比，L-NK组、M-NK组、H-NK组细胞核出现缩小、破碎现象，克隆数
3、、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、Twist相关蛋白1（Twist1）蛋白表达、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比例依次显著降低（P0.05），细胞生长抑制率、细胞凋亡率以及Bcl-2关联X的蛋白（Bax）、活化的半胱氨酸蛋白酶-3（cleaved-Caspase-3）、E-钙黏附蛋白（E-cadherin）蛋白表达以及细胞黏附抑制率依次显著升高（P0.05）；与H-NK组相比，H-NK+740Y-P组克隆数、Bcl-2、N-cadherin、Twist1蛋白表达、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比例显著升高（P0.05），细胞生长抑制
4、率、细胞凋亡率以及Bax、cleaved-Caspase-3、E-cadherin蛋白表达以及细胞黏附抑制率显著降低（P0.05）。结论:NK可能通过下调PI3K/AKT通路抑制SW480细胞增殖和侵袭，促进其凋亡。关键词结直肠癌；PI3K/AKT信号通路；SW480细胞；紫花前胡苷中图分类号：R735.3文献标志码：A文章编号：1005-930X（2023）01-0112-09DOI：10.16190/ki.45-1211/r.2023.01.018Influence of nodakenin on biological behavior of colorectal cancer cells
5、 through PI3K/AKTpathwayYue Feng,Jiang Qilin,Chen Miao,Xu Yuanyuan.(Department of Gastrointestinal Surgery,HanDan Central Hos-pital,Handan 056001,China)AbstractObjective:To investigate the influence of nodakenin(NK)on the biological behavior of colorectalcancer(CRC)cells through the phosphatidylinos
6、itol 3 kinase(PI3K)/serine/threonine kinase(AKT)pathway.Methods:SW480 cells were divided into SW480 group(SW480 cells were not treated),NK low-dose group(L-NK group,40 mol/L NK),NK medium-dose group(M-NK group,60 mol/L NK),NK high-dose group(H-NKgroup,80 mol/L NK),and H-NK+740Y-P group(SW480 cells t
7、reated with 80 mol/L NK+10 mol/L PI3K acti-vator 740Y-P).Plate clones were applied to test the cloning ability of SW480 cells.3-(4,5-dimethylthiazole-2)2,5-diphenyltetrazolium bromide(MTT)method was used to detect the proliferation of cells.The apoptosis ofSW480 cells was detected by flow cytometry
8、and Hoechst 33258 staining.The invasiveness of SW480 cells wasdetected by cell invasion test(Transwell).The adhesion of SW480 cells was detected by MTT method.Westernblotting was used to detect the levels of adhesion,apoptosis and pathway-related proteins.Results:Comparedwith SW480 group,the nuclei
9、of L-NK group,M-NK group and H-NK group were shrunk and fragmented,andthe number of clones,B-lymphoblastoma-2(Bcl-2),N-cadherin,Twist related protein 1(Twist1)protein expres-sion,p-PI3K/PI3K,and p-AKT/AKT ratio were sig-nificantly reduced in turn(P0.05);the cell growthinhibition rate,cell apoptosis
10、rate,and Bcl-2 associat-*基金项目：河北省医学科学研究课题计划项目（No.20202465）收稿日期：2022-09-29 112ed X protein(Bax),activated cysteine proteinase-3(cleaved Casase-3),E-cadherin expression and the inhibitionrate of cell adhesion significantly increased in turn(P0.05).Compared with the H-NK group,the clone num-ber,Bcl-2,N
11、-cadherin,Twist1 protein expression,p-PI3K/PI3K and p-AKT/AKT ratio in the H-NK+740Y-Pgroup significantly increased(P0.05).The cell growth inhibition rate,cell apoptosis rate,Bax,cleaved caspase-3,E-cadherin protein expression and cell adhesion inhibition rate significantly decreased(P0.05).Conclusi
12、on:NK may inhibit the proliferation and invasion of SW480 cells and promote their apoptosis by down-regulatingPI3K/AKT pathway.Keywordscolorectal cancer;PI3K/AKT signaling pathway;SW480 cells;Nodakenin结直肠癌（colorectal cancer，CRC）是世界上第三大最常见的癌症，也是癌症相关死亡的第二大原因1。CRC常见于50岁以下的患者，且其发病率一直在持续增长2。CRC在早期不易被发现，一
13、旦确诊通常处于晚期，目前治疗CRC的方法主要是手术以及放疗、化疗。CRC治疗方法在过去几年得到了迅速发展，但是CRC患者的5年生存率依然没有得到显著改善。越来越多的传统中药在抗肿瘤方面取得了巨大发展，寻找合适的中药治疗CRC是当前急需解决的难题3。紫花前胡苷（Nodakenin，NK）是一种从当归（伞形科）根中分离出来的呋喃香豆素糖苷，具有抗炎、抗氧化作用4。任璐等5研究发现，NK可以抑制宫颈癌细胞的侵袭及迁移，而NK是否可以对CRC细胞的生物学行为产生影响还未见报道。磷脂酰肌醇 3 激酶（Phosphatidylinositol 3 ki-nase，PI3K）/丝氨酸/苏氨酸激酶（Serin
14、e/threonine ki-nase，AKT）通路对细胞的增殖、凋亡以及侵袭具有重要作用，有研究发现，激活PI3K/AKT通路会减弱肺腺癌细胞凋亡，促进CRC细胞的增殖和转移6-7。相关报道显示，PI3K/AKT信号轴在CRC发展过程及耐药性中起重要作用，是 CRC 的靶点8。Duan等9发现激活PI3K/AKT信号通路可以促进CRC进展。因此，本研究对NK是否可以通过调控PI3K/AKT通路影响CRC细胞增殖、凋亡和侵袭行为进行分析，以期为挖掘治疗CRC的潜在药物提供依据。1材料与方法1.1细胞株、主要试剂及仪器NK（货号：YT64302）、KM12（货号：HTX2159C）、SW620（
15、货号：HT-X1675）、NCM460（货号：HTX1841C）购自深圳市豪地华拓生物科技有限公司；HCT116（货号：MY-K6340）购自上海酶研生物科技有限公司；SW480细胞（货号：YT800119）购自北京伊塔生物科技有限公司；PI3K 激活剂 740Y-P（货号：YS-RIBIO-C6010）购自上海研生实业有限公司；FBS（货号：76294-18017）购自北京泽平科技有限责任公司；RPMI-1640培养基（货号：RPMI-1640）购自广东环凯生物科技有限公司；Matrigel 基质胶（货号：354234）、Transwell小室（货号：354480）购自上海研卉生物科技有限公
16、司；3-（4,5-二甲基噻唑-2）2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）细胞增殖检测试剂盒（货号：QN1308-EQF）、Annexin-V-FITC/PI 试剂盒（货号：WK304）购自北京百奥莱博科技有限公司；Hoechst 33258染色试剂盒（货号：BES-21218CBR）购自上海博尔森生物科技有限公司；B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）抗体（货号：12789-1-AP）、兔抗人单克隆抗体（Bax）抗体（货号：50599-2-Ig）、E-钙黏附蛋白（E-cadherin）抗体（货号：20874-1-AP）、N-钙粘蛋白（N-cadherin）抗体（货号：22018-1-AP）、Twist相关蛋白1（Twist1）抗体（货号：25465-1-AP）、活化的半胱氨酸蛋白酶-3（cleaved-Caspase-3）抗体（货号：25546-1-AP）、PI3K抗体（货号：20584-1-AP）、AKT抗体（货号：10176-2-AP）购自 Proteintech；p-PI3K 抗体（货号：AF3241）购自 Affinity Biosciences；p-AKT 抗体（货号：13038）购自C
