1、DB12/T952-2020猪粪中抗生素残留量检测方法液相色谱-质谱/质谱法1范围本标准规定了猪粪中抗生素检测的原理、试剂耗材、仪器设备、试样制备、检测步骤、结果计算和精密度。本标准适用于生猪养殖场畜舍内以及堆粪场粪便中土霉素、强力霉素、四环素、去甲基金霉素、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺甲噁唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺多辛、洛美沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、二氟沙星、氟罗沙星、奥比沙星、氟甲喹、西诺沙星和依诺沙星残留量的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T66
2、82分析实验室用水规格和试验方法NY/T1896-2010兽药残留实验室质量控制规范3原理样品中抗生素残留物用甲醇-乙腈-柠檬酸缓冲溶液提取，用固相萃取小柱净化，用液相色谱-质谱/质谱测定，外标法定量。4试剂材料4.1水：GB/T6682规定的一级水。4.2乙腈：色谱级。4.3甲醇：色谱级。4.4甲酸：色谱级。4.5 EDTA-McIlvaine缓冲液：称取柠檬酸12.9 g,磷酸氢二钠5.45g,乙二胺四乙酸二钠37.2g,溶于水中，并稀释至1L。4.60.1%甲酸溶液：取甲酸(4.4)0.5mL溶于水稀释至500l.,当天配制。4.7标准储备溶液：分别称取适量标准品（精确到0.00001g
3、),分别用甲醇(4.3）溶解，配制成100mg/L,置于冰箱-20保存，保质期6个月。4.8标准工作溶液：准确称取抗生素标准储备液(4.7)适量，用甲醇水(v/v=50:50)配制成不同浓度系列的混合标准工作溶液（用时现配）。4.90asis HLB固相萃取小柱或者相：6mL,500mg。4.10滤膜：0.22m,有机。5仪器设备1DB12/T952-2020表1梯度洗脱程序步骤时间/min流速/(mL/min)组分A/%组分B/%11.50.39010280.3307038.10.390104120.390107.4.2质谱参考条件7.4.2.1离子源：电喷雾离子源(ESI)。7.4.2.2
4、扫描方式：正离子扫描。7.4.2.3检测方式：多反应监测(MRM)。7.4.2.4离子源温度：150。7.4.2.5脱溶剂气温度：500。7.4.2.6脱溶剂气和锥孔气：氮气。7.4.2.7碰撞气：高纯氩气。7.4.2.8多反应监测(MRM)离子对、锥孔电压及碰撞能量参见附录A。7.4.3定性测定在相同条件下进行样品测定时，如果样品中化合物质量色谱峰的保留时间与标准溶液相比在士2.5%的允许偏差之内，并且定性离子对的相对丰度与浓度相当的标准溶液相比，相对丰度偏差不超过表2的规定，则可判断样品中存在相应的目标化合物。表2定性确认时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度50%20%50%10%20%10%允许的相对偏差20%25%30%50%7.4.4定量测定取试样溶液和标准溶液上机测定，以色谱峰保留时间和离子对定性，读取试样色谱峰面积，依据标准曲线计算浓度。用外标法定量。在上述色谱-质谱条件下，目标抗生素标准溶液特征离子的质量色谱图参见附录B。试样溶液与基质匹配标准溶液中待测物的响应值均应在仪器检测的线性范围内，如超出线性范围，应重新试验或将试样溶液和基质匹配标准工作溶液作相应稀释后重新测定。7.4.5空白实验除不加试样外，均按上述操作步骤进行。8结果计算按公式(1)进行计算目标抗生素的残留量，计算结果需扣除空白值：X=CXvX1000m1000(1)3
