1、12Clinical Research,Mar.2023,Vol.31 No.03作者简介：刘云婧，女，临床医学检验技师，硕士研究生。研究方向：出凝血实验检测，贫血实验检测。论著重型血友病 A 患儿血清炎性因子、外周血 T 细胞表面 CD28与 CEC、vWF 的关系研究刘云婧，郭明发，栗春香，史利欢(郑州大学附属儿童医院，河南省儿童医院，郑州儿童医院 血液病实验室，河南 郑州 450000)摘要：目的 探讨重型血友病A患儿血清炎性因子、CD28与循环内皮细胞(CEC)、血管性血友病因子(vWF)的关系，为临床诊治该疾病提供依据。方法 选取郑州大学附属儿童医院 2020 年 6 月至 2022
2、 年 6 月收治的 50 例重型血友病 A患儿作为观察组，根据患儿是否出现急性关节出血分为出血组 21 例和未出血组 29 例，另选取同期在本院行常规体检的 50 例儿童作为对照组。比较两组研究对象 CD28、白介素-6、白介素-1、CEC、vWF 表达水平，并分析观察组上述指标之间的相关性。结果 观察组外周血 T 细胞表面 CD28 水平低于对照组，差异有统计学意义(P 0.05)，血清白介素-6、白介素-1、CEC、vWF 水平高于对照组，差异有统计学意义(P 0.05)；出血组外周血 T 细胞表面 CD28水平低于未出血组，差异有统计学意义(P 0.05)，血清白介素-6、白介素-1、C
3、EC、vWF 水平高于未出血组，差异有统计学意义(P0.05)；Pearson相关性分析结果显示，CEC、vWF与CD28呈负相关，差异有统计学意义(P0.05)，与白介素-6、白介素-1 呈正相关，差异有统计学意义(P 0.05)。结论 血清炎性因子、CEC、vWF 促使了重型血友病 A 病情发展，外周血 T 细胞表面 CD28 则抑制重型血友病 A 发展。关键词：重型血友病 A；炎性因子；血管内皮损伤指标；外周血 T 细胞表面 CD28；相关性中图分类号：R554.1文献标志码：A DOI：10.12385/j.issn.2096-1278(2023)03-0012-04Study on
4、the Relationship between serum inflammatory factors,peripheral blood T cell surface CD28,CEC,and vWF in children with severe hemophilia ALIU Yunjing,GUO Mingfa,LI Chunxiang,SHI Lihuan(Hematology Laboratory of Childrens Hospital Affiliated to Zhengzhou University,Henan Childrens Hospital,Zhengzhou Ch
5、ildrens Hospital,Zhengzhou Henan 450000,China)Abstract:Objective To investigate the relationship between serum infiammatory factor,CD28,circulating endothelial cell(CEC),and von Willebrand factor(vWF)in children with severe hemophilia A,and to provide evidence for clinical diagnosis and treatment of
6、 this disease.Methods A total of 50 children with severe hemophilia A admitted to the Childrens Hospital of Zhengzhou University from June 2020 to June 2022 were selected as the observation group.According to whether the children had acute joint bleeding,they were divided into the bleeding group(21
7、cases)and the non-bleeding group(29 cases).The expression levels of CD28,interleukin-6,interleukin-1,CEC,and vWF in the two groups were compared,and the correlation between the above indexes in the observation group was analyzed.Results The level of CD28 on peripheral blood T cells in the observatio
8、n group was lower than that in the control group,the difference was statistically significant(P 0.05).The levels of interleukin-6,interleukin-1,CEC,and vWF in serum were higher than those in the control group,the difference was statistically significant (P 0.05).The level of CD28 on peripheral blood
9、 T cells in the bleeding group was lower than that in the non-bleeding group,the difference was statistically significant(P 0.05);the levels of interleukin-6,interleukin-1,CEC,and vWF in serum were higher than those in the non-bleeding group,the difference was statistically significant(P 0.05);Pears
10、on correlation analysis showed that CEC and vWF were negatively correlated with CD28,with statistical significance(P 0.05),and positively correlated with interleukin-6 and interleukin-1,with statistical significance(P 0.05).Conclusion Serum inflammatory factors,CEC,and vWF promote the development of
11、 severe hemophilia A,while peripheral blood T cell surface CD28 inhibits the development of severe hemophilia A.Key Words:severe hemophilia A;infiammatory factors;vascular endothelial injury index;CD28 on peripheral blood T cells;correlation血友病 A 是常见遗传性凝血机制障碍性疾病，占所有血友病类型的 85%1。血友病 A 临床表现为自发性关节和组织出血，
12、除此之外还会出现消化道出血、泌尿道出血及中枢神经系统出血。血友病 A 根据血浆中因子(F )促凝成分水平分为重型(F：C 1%)、中 间 型(F：C 为 1%5%)、轻 型(F：C 5%且 40%)，其中重型血友病 A 患儿频繁出血，未经及时有效治疗可能会造成假肿瘤，关节炎及关节畸形，甚至危及患儿生命2。世界血友病联盟推荐预防治疗，降低出血发生率，但若患儿形成了关节病，则无法再逆转，会导致预防效果不全面。目前临床对此类患儿提倡综合关怀治疗模式，早期干预可避免患儿出现严重出血和关节损伤3。血友病患儿关节出血后会释放白介素-6、白介素-1 等细胞因子，导致血管内皮生长因子分泌增加，形成滑膜炎症，最
13、终造成关节软骨细胞损伤和死亡4。这些炎症性关节炎在发生发展过程中，细胞因子发挥着重要作用。CD28 属于免疫球蛋白超家族成员，对 T 细胞活化具有抑制作用。循环内皮细胞(CEC)和血管性血13临床研究 2023 年 03 月第 31 卷第 03 期友病因子(vWF)是临床常见血管内皮损伤指标5。目前临床尚未有重型血友病 A 患儿与血管内皮损伤关系报道。本研究旨在探讨重型血友病 A 患儿血清炎性因子、CD28与 CEC、vWF 的关系，为临床诊治该疾病提供依据，现报道如下。1资料与方法1.1一般资料选取郑州大学附属儿童医院 2020 年 6 月至 2022 年6 月收治的 50 例重型血友病 A
14、 患儿作为观察组，另选取同期在本院行常规体检 50 例儿童作为对照组。两组患儿均为男性，观察组年龄 3 14 岁，平均(8.222.12)岁；体质量指数 14 21kg/m2，平均(18.351.25)kg/m2。对照组年龄 3 13 岁，平均(8.172.10)岁；体质量指数 14 20kg/m2，平均(18.321.20)kg/m2。两组基线资料比较差异无统计学意义(t年龄=0.118，P=0.906；t体质量指数=0.122，P=0.903)，具有可比性。根据重型血友病 A 患儿是否出现急性关节出血分为出血组 21 例和未出血组 29 例，出血组年龄 3 14 岁，平均(8.232.15
15、)岁；体质量指数 13 20kg/m2，平均(18.291.23)kg/m2。未出血组年龄 4 13 岁，平均(8.262.10)岁；体质量指数 14 21kg/m2，平均(18.331.22)kg/m2。两组基线资料比较差异无统计学意义(t年龄=0.071，P=0.944；t体质量指数=0.163，P=0.871)，具有可比性。本研究经本院伦理委员会审核通过。患儿及研究对象家属均签署知情同意书。纳 入 标 准：符 合 中 国 儿 童 血 友 病 专 家 指 导 意见(2017 年)6中诊断标准：临床表现为关节、肌肉、深部组织出血，身体任何部位都可出血，APTT 明显延长，F 活性降低或缺乏，
16、患儿血浆 F 活性水平 1%；无危重部位出血；均经 X 线、MRI 检查确诊；年龄 3 14岁；无抑制物产生病史者；临床病理资料齐全者。排除标准：近期服用过抗炎镇痛药物者；合并急性感染者；轻型或中间型血友病 A；NBV、HIV 感染；既往服用过免疫制剂；病例资料不完整者。1.2方法(1)外周血 T 细胞表面 CD28 检测：采集两组研究对象空腹静脉血 2mL，肝素抗凝，外周血单个核细胞PBS 洗涤 3 次，取 100L 上述样品放入 4 支试管中，采用流式细胞仪检测并分析 CD28 阳性细胞百分率。(2)血清炎性因子检测：采集空腹静脉血 2mL，2500r/min 离心分离 10min，离心半径 15cm，低温环境下保存备用，使用 ELISA 法检测血清白介素-6、白介素-1 水平。(3)CEC、vWF 指标检测：血清采集方法同炎性因子，使用免疫磁珠分离法检测 CEC 数目，取(1)中静脉血用EDT 抗凝，洗涤 M-450 磁珠，低温条件下孵育 30min，PBS 洗涤 3 次，于显微镜下以细胞计数板计数。1.3观察指标比较两组研究对象 CD28、白介素-6、白介素-1、CEC、vWF
