1、ICS65.020B01DB37山东省地方标准DB37/T34982019谷类作物籽粒植酸含量测定方法Determination of phytic acid in cereal grains2019-01-29发布2019-03-01实施山东省市场监督管理局发布DB37/T34982019前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由山东省农业农村厅提出并监督实施。本标准由山东省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省农业科学院玉米研究所、山东省农业科学院作物研究所、山东省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所。本标准主要起草人：薛艳芳、李宗新、张慧、高英波、钱欣、刘
2、开昌、齐世军、张丙春、夏海勇、王竹。IIDB37/T34982019谷类作物籽粒植酸含量测定方法1范围本标准规定了谷类作物籽粒包括全籽粒粉、胚、胚乳、种皮等组织中植酸含量的测定方法。本标准适用于谷类作物籽粒中植酸含量的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理硫酸铁铵与双吡啶-巯基乙酸溶液反应生成一种粉红色的物质，在波长519m处吸光度最强。当植酸存在时，铁与磷酸酯结合，故而不能与双吡啶-巯基乙酸溶液反应，致
3、使粉红色消退，吸光度的下降与植酸的浓度成反比，进而通过测定显色反应的吸光度值，计算试样植酸含量。4试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯或以上的试剂，水为GB/T6682规定的三级水。4.1盐酸(HC1)。4.2硫酸铁铵FeNH(S0)212H,0。4.3双吡啶(CHN,优级纯)。4.4巯基乙酸(CH,0S,优级纯)4.5植酸钾标准品(CHK0,P,CS号：129332-03-7)，纯度99%。4.6盐酸溶液(0.2mol/L):量取17.2L盐酸，用水定容至1000mL。4.7盐酸溶液(2mo1/L)：量取17.2mL盐酸，水定容至100mL。4.8硫酸铁铵溶液(0.02%)：称
4、取0.20g硫酸铁铵溶了100mL2mo1/L盐酸溶液(4.7)溶解，用水定容至1000mL。4.9双吡啶-巯基乙酸溶液(1%)：称取10.00g双吡啶，加10ml巯基乙酸湿润、溶解，用水定容至1000mL,摇匀。4贮存，有效期2个月。4.10植酸钾标准溶液(1.30mg/mL):准确称取0.13g(确定至0.0001g)植酸钾(4.5)，溶解后定容至100mL。5仪器设备5.1可见分光光度计：带519nm。1DB37/T3498-20195.2天平：感量0.01g和0.0001g。5.3离心机：200r/min。5.4振荡器。5.5水浴锅。5.6粉碎机。6试样制备取经充分混匀的代表性样品不少
5、于500g,通风处自然风干或50烘干后，用粉碎机粉碎，过40目筛，混匀后储于塑料瓶或玻璃瓶保存备用。7分析步骤7.1试样提取称取经50烘箱内烘5h8h的全籽粒粉0.05g0.1g、胚或种皮0.02g0.03g或纯胚乳粉0.2g0.3g,均精确至0.0001g,于50mL塑料瓶中，分别加入0.2mo1/L盐酸溶液10mL(4.6),加盖旋紧后的塑料瓶室温振荡提取2h,转速200r/min,或不振荡4静置过夜。7.2标准曲线制作依次准确移取标准溶液(4.10)0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL、0.6mL、0.7mL、0.8mL、0.9mL和1.0mL于10支15mL试管中
6、，依次分别加入0.2mo1/L盐酸溶液(4.6)至10mL,配制成含有植酸磷3.3ug/mL、6.6ug/mL、9.9ug/mL、13.2ug/mL、16.5ug/mL、19.8ug/mL、23.1ug/mL、26.4ug/mL、29.7ug/mL和33.0ug/mL的标准系列溶液。混匀后，分别移取0.5mL上清液，加1mL0.02%疏酸铁铵溶液(4.8)，置于试管架上入沸水浴保温30m,取出后以流动水冷却至室温，分别加2mL1%双吡啶-巯基乙酸溶液(4.9)，混匀后，立即倒入1cm比色皿中，于519nm波长下测定吸光度，用水作为参比溶液，以吸光度为纵坐标，植酸磷含量为横坐标，制作标准曲线。7.3试样测定标准系列溶液测定完成后，分别移取0.5试样提取上清液(7.1)，按照上述操作步骤(7.2)加入反应溶液，于519m波长下测定吸光度，并通过标准曲线计算出试液中植酸磷含量。8分析结果的表述试样中植酸含量按公式(1)计算：Y=c3.5101000(1）0.5m0.28210001000式中：大一一试样中植酸含量，单位为毫克每克(mg/g):由标准工作曲线计算出植酸磷含量，单位为微克每毫升(4g/mL):0.5一一待测液提取体积，单位为毫升(mL):3.5一一待测液定容体积，单位为毫升(mL):10-提取液定容体积，单位为毫升(mL)：2
