1、LY/T2698-2016集前准备洁净干燥的玻璃瓶、镊子和取样针备用,采集时一只手小心将花朵唇瓣物上,另一只手去除唇瓣,然后用镊子小心朝唇瓣方向去掉药帽,用取样针顶端放到药室内轻轻将花粉粒粘起,送入准备好的授粉花朵或者干燥瓶内。5.2花粉保存将装有花粉的干燥瓶密封,并在4冰箱保存,存放时间不超过10d。5.3授粉授粉时间选择在母本开花第2d5d内进行,授粉前将取样针或牙签高温消毒备用,授粉时用取样针顶端将花粉粒粘起,送至丹本柱头窝内。同一支取样针只能给一朵花授粉,更换父丹本时都需要更换取样针。5.4标记授粉后及时挂牌做好标记和记录。5.5授粉后管理授粉后子房开始膨大时疏果,每株保留果实2个一3
2、个。其余管理事项参照4.2执行。5.6蒴果采收及保存5.6.1蒴果采收杂交后8个9个月,当蒴果表皮由绿色转为伍且尚米开裂时带柄采集。5.6.2蒴果保存采集后的蒴果放置在4冰箱保有常用。6F1代无菌苗培育6.1材料灭菌铁皮石斛蒴果表面用75%酒精消毒30s,无菌水冲洗3次,再用10%次氯酸钠溶液消毒30mi,无菌水漂洗3次。6.2培养基制备种子萌发培养基采用1/2MS培养基,添加NAA0.5mg/L,蔗糖3%,京脂0.7%,pH5.45.8。6.3无菌播种将消毒后蒴果置于无菌的培养皿中,用消毒的解剖刀切开葫果,将种子均匀分布于萌发培养基表面。6.4培养条件接种后的培养基置于温度25士2,光照12h/d,光强为10001x15001x培养室培养。