1、 血液生理实验 实验实验一一 血液的组成和红细胞比容的测定血液的组成和红细胞比容的测定 实验目的实验目的 了解血液的组成，学习和掌握测定红细胞比容 方法。实验原理实验原理 血液抗凝后，经离心，将出现分层。上面无色（或淡黄色）透明的部分为血浆，下面红色部分为红细胞，在红细胞之上有一薄层灰 白 色部分为白细胞和血小板。下部压紧 的血细胞占全血的体积比称为红 细胞压积，又叫红细胞比容。若不加抗凝 剂任血液自然凝固或去纤维蛋 白，就 可区别血清、血块及纤维蛋白。实验对象实验对象 哺乳动物（种类不限）实验材料实验材料 草酸盐抗凝剂、或10 g/L肝素，75%酒精，温氏分血管，酒 精灯，离心机，天平，注射
2、器，长针头，干棉球，带有开叉橡皮管的玻 棒，烧杯等。实验方法与步骤实验方法与步骤 1温氏分血管比容测定 草酸盐抗凝剂配成水溶液，取适量该溶液（根据取血量确定抗凝剂溶液用量，如草酸钾，每1 mL血需加1-2mg。配制10%水溶液，每管加0.1 mL则可使5-10 mL血液不凝固），放入大试管，烘干后备用。取血：可采取静脉取血或心脏取血，将血液沿大试管壁缓慢放入管内，用涂有凡仕林的大拇指堵住试管口，缓慢颠倒试管23次，让血液与抗凝剂充分混匀，并不使血细胞破碎，制成抗凝血。用带有长注针头的注射器，取抗凝血2 mL将其插入分血管的底部，缓慢放入，边放边抽出注射针头，使血液至刻度刻度10 cm10 cm
3、处处。离心：将分血管以3000 r/min离心30 min，取出分血管，读取红细胞柱的高度，再以同样的转速离心 5 min，第二次读取红细胞柱的高度，如果读数与前次相同，表明红细胞已被压紧。该读数即为红细胞比容值红细胞比容值。例如，读数为4.2 cm，即表示100 mL血液中红细胞容积占42 mL，或者以4.2乖以10即得到红细胞比容的数值。注意事项注意事项 1选择抗凝剂必须考虑到不使红细胞变形、溶解。草酸钾使红细胞皱缩，而草酸銨使红细胞膨胀，二者配合使用可互相缓解。2血液与抗凝剂混合时应避免剧烈振动而引起红细胞破裂。3操作过程应在2小时内完成，以免溶血和水分蒸发。抗凝血加入到分血管中应避免产
4、生气泡，影响读数的准确性。思考题思考题 1血液由哪些成分组成，各有什么生理作用。2血浆和血清有何区别，如何制备？3测定红细胞比容的实际意义是什么？实验目的实验目的 熟悉用比色法测定血红蛋白的方法。实验原理实验原理 血红蛋白测定的方法有多种，最常用而最简单的是比色比色 法法。由于血红蛋白的颜色，常随结合的氧量多少而改变，因而不利于比 色，但血红蛋白与稀盐酸作用后，能使亚铁血红素变成不易变色的棕色 的高铁血红蛋白，用水稀释后可与标准比色板比色，从而测得血红蛋白 含量。通常以每100毫升血液中血红蛋白的克数来表示。实验二实验二 血红蛋白的测定血红蛋白的测定 实验对象实验对象 哺乳动物（种类不限）实验
5、材料实验材料 沙里血红蛋白计、抗凝血、0.1 mol/L HCl、蒸镏水、棉球等。方法及步骤方法及步骤 用滴管加56滴0.1 mol/L HCl到刻度测定管内,至管下方刻度“2”或或10%处。用血红蛋白吸管吸取血液至20 L处，用脱脂棉仔细揩去吸管外的血液。将吸血管中的血液轻轻吹到测定管底部的盐酸中，反复以上清吸吹3次，使吸管壁上的血液全部进入测定管中。在吸吹时尽量避免产生气泡在吸吹时尽量避免产生气泡,以免影响比色以免影响比色。用细玻棒轻轻搅动，将血液与盐酸充分混合，静置10 min，使管内的盐酸和血红蛋白完全作用，形成棕色的高铁血红蛋白。把比色管插入标准比色箱，使无刻度的两面位于空格的前后方
6、向，便于透光和比色。用滴管向比色管内逐滴加入蒸馏水，并不断搅匀，同时对着自然光用肉眼进行比色，直至溶液的颜色与标准比色板的颜色相同为止。读出管内液体凹面所在的刻度，可以是相对值，也可以是绝对值，可参照血红蛋白计的使用说明书。国产沙里氏血红蛋白计通常100%相当于14.5 g，如液体表面在刻度70%处，要计算其绝对克数，可用下列比例求得：x:14.5=70:100,x=10.15。注意事项注意事项 1要准确用吸血管吸取和转移20 L血液至比色测定管中，若吸入过快，有盐酸或血液被吸入采血管的乳胶头，则应将吸管洗涤干净，重新吸血。洗涤过程是：先用清水将血迹洗去洗涤过程是：先用清水将血迹洗去，然后再依
7、次吸取蒸馏水然后再依次吸取蒸馏水、95%酒酒精精、乙醚洗涤采血管乙醚洗涤采血管12次次，使采血管内干净使采血管内干净、干燥干燥。2血液和稀盐酸的作用时间不能少于10 min，不然血红蛋白不能充分变成高铁血红蛋白，使结果偏低。3比色应在散射自然光下进行，避免在黄色灯光下进行比色，以免影响结果。4加蒸馏水时，开始可以多加几滴，随后逐滴加入，并用玻棒不断混匀，以防稀释过度。实验目的实验目的 学习测定红细胞渗透脆性的方法，理解细胞外液渗透张力对维持细胞正常形态与功能的重要性。实验原理实验原理 红细胞在高渗溶液内会因失去水分而皱缩；反之，在低渗溶液内，则水分进入红细胞，使红细胞膨胀。如溶液渗透压继续下降
8、，红细胞会膨胀而破裂，并释放血红蛋白，称之为溶血。红细胞膜对低渗溶液的抵抗力称为红细胞渗透脆性。实验三实验三 红细胞的脆性试验红细胞的脆性试验 实验对象实验对象 动物种类不限。实验材料实验材料 抗凝血，1%氯化钠溶液，蒸馏水，10 mL小试管，试管架，滴管，1 mL移液管。实验方法及步骤实验方法及步骤 1.先将试管分别排列在试管架上，按下表把1%NaCl，稀释成不同浓度的低渗溶液，每管溶液均为2ml。试管号试管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1%NaCl 1.40 1.30 1.20 1.10 1.00 0.90 0.80 0.70 0.60 0.50 蒸馏水蒸馏水 0.60 0
9、.70 0.80 0.90 1.00 1.10 1.20 1.30 1.40 1.50 NaCl 浓度浓度 0.70 0.65 0.60 0.55 0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25 2加抗凝血：用滴管吸取抗凝血，在各试管中各加一滴，轻轻摇匀（用拇指堵住试管口，顺序将试管缓慢倒置二次缓慢倒置二次。3在室温下静置1 12 h2 h。4观察结果：依据各管中液体颜色和浑浊度的不同，判断红细胞溶血程度。试管内液体下层为浑浊红色，上层为无色透明，表明无红细胞破裂，未发生溶血。试管内液体下层为浑浊红色，上层出现透明红色，表示部分红细胞破裂，称为不完全溶血。试管内液体完全变成透明红色，管底无红细胞沉淀，表明红细胞完全破裂，称为完全溶血。5红细胞渗透脆性范围：根据前述原理判断出开始溶血及刚开始完全溶血的试管，前者的NaCl浓度为红细胞的最小抗力，后者为红细胞的最大抗力。注意事项注意事项 小试管要干燥，加抗凝血的量要一致，滴管握持角度尽可能一致。血液滴入试管后，立即轻轻混匀，避免人为溶血。配制不同浓度的NaCl溶液必须准确。NaCl溶液的浓度梯度可根据畜禽特点进行调整。