1、 一、一、细菌形态检查法细菌形态检查法 一）不染色标本检查法一）不染色标本检查法 活菌轮廓活菌轮廓 动动 力力 单染色法单染色法 复染色法复染色法 鉴别染色法鉴别染色法 革兰染色革兰染色 抗酸染色抗酸染色 荚膜染色荚膜染色 鞭毛染色鞭毛染色 芽胞染色芽胞染色 特殊染色法特殊染色法 二）染色标本检查法二）染色标本检查法 原原 理：理：细胞壁结构学说细胞壁结构学说 等电点学说等电点学说 化学结构学说化学结构学说 革兰染色法（革兰染色法（Gram StainGram Stain）由丹麦医生由丹麦医生Hans Christian GramHans Christian Gram于于18841884年年创
2、立。创立。涂涂 片片 干干 燥燥 固固 定定 染染 色色 水洗、吸干水洗、吸干 镜镜 检检 一、制备涂片标本一、制备涂片标本 步步 骤骤 二、染二、染 色色 结晶紫初染结晶紫初染 碘液媒染碘液媒染 乙醇脱色乙醇脱色 复红复染复红复染 涂片固定涂片固定 紫色紫色革兰阳性（革兰阳性（G+G+）菌）菌 红色红色革兰阴性（革兰阴性（G G-）菌）菌 （1 1）鉴别细菌）鉴别细菌 （2 2）选择药物）选择药物 （3 3）与致病性有关）与致病性有关 意意 义义 结结 果果 细菌学诊断细菌学诊断 标本的采集和运送标本的采集和运送 避免杂菌污染避免杂菌污染 运送注意保存运送注意保存 不同期不同标本不同期不同标
3、本 抗菌素使用前抗菌素使用前 采集病变明显部位采集病变明显部位 标本必须新鲜标本必须新鲜 病原菌的检查程序病原菌的检查程序 药物敏感试验药物敏感试验 直接涂片镜检直接涂片镜检 分离培养分离培养 生化试验生化试验 血清学鉴定血清学鉴定 动物试验动物试验 明明确确诊诊断断 初步诊断初步诊断 分子生物学技术分子生物学技术 其他检测技术其他检测技术 观察菌落形态观察菌落形态 染色镜检染色镜检 原理原理 双份血清标本，恢复期血清中抗体效价比双份血清标本，恢复期血清中抗体效价比急性期血清中抗体效价升高急性期血清中抗体效价升高4 4倍者方有意义倍者方有意义 结结果果判判断断 血清学的诊断血清学的诊断 -已知
4、抗原检测未知抗体已知抗原检测未知抗体 -效价高低效价高低 -动态观察动态观察 种种 类类 凝集试验凝集试验 -肥达试验、外斐试验、显微镜凝集试验等肥达试验、外斐试验、显微镜凝集试验等 中和试验中和试验 -梅毒梅毒VDRLVDRL、RPRRPR试验等试验等 沉淀试验沉淀试验 -抗抗“O O”试验等试验等 补体结合试验补体结合试验 -Q Q热柯克斯体抗体检测等热柯克斯体抗体检测等 杀死物体上病原微生物的方法杀死物体上病原微生物的方法,并不一定并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物 消毒消毒 disinfection 灭菌灭菌 sterilization 无菌无菌
5、asepsis 防腐防腐 antisepsis 防止或抑制体外细菌生长繁殖防止或抑制体外细菌生长繁殖 不含活菌不含活菌 杀死物体上的所有微生物杀死物体上的所有微生物 无菌操作无菌操作 抹布上的细菌抹布上的细菌 菜板上的细菌菜板上的细菌 热力灭菌法热力灭菌法 一、物理消毒灭菌法一、物理消毒灭菌法 焚烧焚烧-最彻底的灭菌方法最彻底的灭菌方法 烧灼烧灼-直接用火焰灭菌方法直接用火焰灭菌方法 干烤干烤-加热加热160160-180 2180 2小时小时 杀菌机理：杀菌机理：高温使菌体蛋白凝固变性高温使菌体蛋白凝固变性 红外线红外线-热效应只在照射表面产生热效应只在照射表面产生 微波微波-热效应具有一定
6、的穿透性热效应具有一定的穿透性 加压蒸汽灭菌法加压蒸汽灭菌法 最有效的灭菌方法最有效的灭菌方法121121 煮沸消毒法煮沸消毒法 水煮水煮10051005分钟分钟(繁殖体繁殖体)-2 2小时小时(芽胞芽胞)流通蒸汽消毒法流通蒸汽消毒法 巴氏消毒法巴氏消毒法 间歇蒸汽灭菌法间歇蒸汽灭菌法 水蒸汽水蒸汽100 15100 15-3030分钟分钟(繁殖体繁殖体)反复多次流动蒸汽间歇加热灭菌反复多次流动蒸汽间歇加热灭菌 较低的温度（较低的温度（61306130分钟）杀灭致病菌分钟）杀灭致病菌 2020-3030分钟分钟 湿热灭菌与干热灭菌的比较湿热灭菌与干热灭菌的比较 同一温度下，湿热比干热灭菌效果好
7、同一温度下，湿热比干热灭菌效果好 原因原因 1 1、湿热中细菌菌体蛋白较易凝固、湿热中细菌菌体蛋白较易凝固 2 2、湿热的穿透力比干热大、湿热的穿透力比干热大 3 3、湿热的蒸汽有潜热、湿热的蒸汽有潜热 辐射杀菌法辐射杀菌法 紫外线紫外线 杀菌机理：杀菌机理：波长波长200200-300nm300nm的紫外线具有杀菌作用的紫外线具有杀菌作用 干扰干扰DNADNA的复制与转录的复制与转录 紫外线穿透力较弱紫外线穿透力较弱 特点：特点：应用范围：应用范围：空气及空气及不耐热物品的表面消毒不耐热物品的表面消毒 光复活作用及光复活酶光复活作用及光复活酶 杀菌机理：杀菌机理：应用范围：应用范围：电离辐射
8、电离辐射 包括高速电子、包括高速电子、X X射线和射线和 射线射线 产生游离基产生游离基,破坏破坏DNADNA。一次性医用塑料制品的消毒一次性医用塑料制品的消毒 食品的消毒不破坏其营养成分食品的消毒不破坏其营养成分 超声波杀菌法超声波杀菌法 超声波超声波 杀菌机理：杀菌机理：频率高于频率高于20kHz/s20kHz/s而不被人耳感觉到的声波而不被人耳感觉到的声波 过水时的空化作用（空穴效应）过水时的空化作用（空穴效应）特点：特点：应用范围：应用范围：粉碎细胞，提取细胞组分粉碎细胞，提取细胞组分 革兰阴性菌较为敏感革兰阴性菌较为敏感 滤过除菌法滤过除菌法 用机械性阻挡除去液体或空气中的细菌用机械
9、性阻挡除去液体或空气中的细菌 滤菌器滤菌器 含有微细小孔含有微细小孔0.220.22微米微米,只允许液体或气体只允许液体或气体通过通过,而大于孔径的细菌等颗粒不能通过而大于孔径的细菌等颗粒不能通过 适用范围适用范围 血清、毒素、抗生素以及空气等的除菌血清、毒素、抗生素以及空气等的除菌 滤菌过程滤菌过程 低温与干燥低温与干燥 在低温状态下真空抽去水分在低温状态下真空抽去水分 用途：用途：保存菌种保存菌种 冷冻真空干燥法：冷冻真空干燥法：二、化学消毒灭菌法二、化学消毒灭菌法 杀菌机理杀菌机理 使菌体蛋白凝固变性使菌体蛋白凝固变性 使细胞内酶失活，干扰细菌的正常代谢使细胞内酶失活，干扰细菌的正常代谢
10、 破坏细菌细胞壁、膜等结构，导致内含破坏细菌细胞壁、膜等结构，导致内含 物逸出物逸出 按杀菌能力分类按杀菌能力分类 可杀死包括芽胞在内的所有微生物可杀死包括芽胞在内的所有微生物 1、高效消毒剂高效消毒剂 适用于不耐热力，但要进入体内的物品适用于不耐热力，但要进入体内的物品 包括含氯消毒剂、过氧化物消毒剂包括含氯消毒剂、过氧化物消毒剂 醛类消毒剂、环氧乙烷等醛类消毒剂、环氧乙烷等 2、中效消毒剂中效消毒剂 适用于纤维内窥镜、喉镜、麻醉器材等适用于纤维内窥镜、喉镜、麻醉器材等 包括含碘消毒剂、醇类消毒剂等包括含碘消毒剂、醇类消毒剂等 不能杀死包括芽胞，可杀死繁殖体（包不能杀死包括芽胞，可杀死繁殖体
11、（包 括结核分枝杆菌）、真菌、多数病毒括结核分枝杆菌）、真菌、多数病毒 可杀死多数细菌繁殖体，不能杀死芽胞、可杀死多数细菌繁殖体，不能杀死芽胞、结核分枝杆菌、某些抵抗力强的真菌和病毒结核分枝杆菌、某些抵抗力强的真菌和病毒 3、低效消毒剂低效消毒剂 适用于皮肤、粘膜、物体表面和地面等适用于皮肤、粘膜、物体表面和地面等 包括季胺盐类消毒剂、氯乙定、高锰酸包括季胺盐类消毒剂、氯乙定、高锰酸 钾等钾等 龙胆紫 干扰氧化、抑制繁殖 染料染料 新洁而灭 蛋白变性，细胞膜损伤 表面活性剂 过氧乙酸、碘酒 氧化、蛋白沉淀 氧化剂 红汞、硫柳汞 氧化、蛋白酶变性 重金属盐 高锰酸甲 氧化、蛋白沉淀 氧化剂 乙醇
12、 蛋白变性 醇类 石炭酸 蛋白变性，细胞膜损伤 酚类 常用种类常用种类 作用机制作用机制 类别类别 常用消毒剂种类常用消毒剂种类 各种消毒剂的应用各种消毒剂的应用 消毒剂消毒剂 常用浓度常用浓度 适用范围适用范围 含氯消毒剂含氯消毒剂 有效氯量有效氯量4g/L4g/L 饮水饮水 过氧乙酸过氧乙酸 0.2%0.2%-1%1%皮肤、物体表面、空气皮肤、物体表面、空气 戊二醛戊二醛 2%2%医疗器械医疗器械 碘酒碘酒 2.5%2.5%皮肤、黏膜、物体表面皮肤、黏膜、物体表面 碘伏碘伏 2%2%皮肤、黏膜、物体表面皮肤、黏膜、物体表面 乙醇乙醇 75%75%医疗器械、皮肤医疗器械、皮肤 新洁尔灭新洁尔
13、灭 0.4%0.4%-1.6%1.6%皮肤、黏膜、物体表面皮肤、黏膜、物体表面 高锰酸钾高锰酸钾 1 1-10g/L10g/L 皮肤、黏膜、食具、蔬菜等皮肤、黏膜、食具、蔬菜等 影响消毒剂作用的因素影响消毒剂作用的因素 消毒剂消毒剂 细菌细菌 环境环境 种类种类 浓度浓度 作用时间作用时间 菌龄菌龄 种类种类 有机物有机物 温度温度 酸硷度酸硷度 1 1、试述常用热力灭菌法的作用机制及适用范围、试述常用热力灭菌法的作用机制及适用范围 2 2、试分析影响化学消毒剂作用效果的因素、试分析影响化学消毒剂作用效果的因素 3 3、简述革兰染色的原理、步骤、结果及意义、简述革兰染色的原理、步骤、结果及意义 4 4、据细菌的生物学性状，如何对一未知菌提出微据细菌的生物学性状，如何对一未知菌提出微 生物学的诊断方案？生物学的诊断方案？预习：预习：微生物的遗传与变异微生物的遗传与变异 思考题思考题
