1、收稿日期：2022-09-03基金项目：山东省农业科技资金（园区产业提升工程）项目（编号：2019YQ033）；山东省中医药科技项目（编号：2021M222）作者简介：张梦蛟，硕士研究生，研究方向：药物分析，E-mail:*通讯作者：贾献慧，副教授，研究方向为生药学，E-maill:；唐文照，教授，研究方向为天然药物化学，E-maill:山东菏泽产丹参中4种指标性成分的质量检测张梦蛟，李 军，张文超，贾献慧*，唐文照*（山东第一医科大学 药学与制药科学学院（药物研究所），山东 济南 250117）摘 要：目的 检测山东菏泽产丹参中指标性成分的含量是否符合药典标准。方法 选取山东菏泽不同采收时间
2、的丹参药材，利用HPLC测定药材中隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA和丹酚酸B的含量，同时与山东滨州、东营、莱芜，四川中江和陕西宝鸡等产地的丹参进行比较。结果 山东菏泽产丹参中隐丹参酮的含量为0.10%0.13%，丹参酮I的含量介于0.05%0.10%，丹参酮IIA的含量0.07%0.24%，3种丹参酮类成分的总量为0.26%0.43%，丹酚酸B的含量为3.02%5.23%。结论 山东菏泽产丹参药材中4种指标性成分的含量符合现行药典标准，可在山东菏泽地区推广种植丹参药材。关键词：丹参；山东菏泽；含量测定中图分类号：R284 文献标识码：A 文章编号：1672-979X（2023）01-0076-
3、05DOI：10.3969/j.issn.1672-979X.2023.01.015Quality Inspection of Four Representative Ingredients in Salvia Miltiorrhiza Cultivated in Heze City of Shandong ProvinceZHANG Meng-jiao,LI Jun,ZHANG Wen-chao,JIA Xian-hui,TANG Wen-zhao(College of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences,Shandong First Medical U
4、niversity&Shandong Academy of Medical Sciences,Jinan 250117,China)Abstract:Objective To determine the quantity of four representative ingredients in Salvia miltiorrhiza cultivated at Heze,Shandong province.Methods The contents of cryptotanshinone,tanshinone I,tanshinone II A and salvianolic acid B i
5、n the samples of different harvest time cultivated at Heze,Shandong province were determined by HPLC,compared with Salvia miltiorrhiza from Binzhou,Dongying,Laiwu of Shandong province,Zhongjiang of Sichuan province and Baoji of Shaanxi province.Results In the samples cultivated at Heze,Shandong prov
6、ince,the contents of cryptotanshinone,tanshinone I and tanshinone II A were 0.10%-0.13%,0.05%-0.10%and 0.07%-0.24%,respectively.The total content of three tanshinones was 0.26%-0.43%.Besides,the content of salvianolic acid B was 3.02%-5.23%.Conclusion The contents of four representative ingredients
7、in the samples cultivated at Heze,Shandong province meet the requirements of Chinese Pharmacopoeia(2020 edition),and Heze can be considered as the suited area for the cultivation of Salvia miltiorrhiza.Key Words:Salvia miltiorrhiza Bge.;Heze,Shandong province;content determination丹参（Salvia miltiorrh
8、iza Bge.）为唇形科鼠尾草属多年生草本植物，其棕红色根或根茎是一味传统中药材，具有祛瘀活血、通经止痛、清心除烦、凉血消痈之功效。现代药理研究表明，丹参药理活性广泛，具有对心血管作用（抑制动脉粥样硬化、抑制心肌细胞缺血和抑制心动频率异常）、抗炎、76 食品与药品 Food and Drug 2023年第25卷第1期抗肿瘤、抗氧化、抗病毒、保护肝肾、保护中枢神经系统、修复骨组织和免疫调节等药理作用1-8。丹参含多种化学成分9-11，其中隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮 IIa（脂溶性成分）和丹酚酸 B（水溶性成分）是丹参的主要有效成分12，也是中国药典2020年版规定的丹参质量检测的指标性成分。丹
9、参在我国分布广泛，河南、山东、湖北、山西被认为丹参药材的道地产区13-14。在山东省，泰山、沂蒙山区等丘陵地区产的丹参质量较好，栽培广、产量高。由于丹参为大宗药材，市场与临床需求量大，仅依靠道地产区的产量不能满足市场与临床的需求，急需扩大药材的种植。山东菏泽地区为黄河冲积平原，沙壤土为主，土质肥沃，气候温和，降水适中，适于农作物生长，但未有丹参药材的种植。在山东省农业科技资金（园区产业提升工程）项目的资助下，本文研究者尝试在该地区种植丹参药材，希望能扩大本省丹参药材的种植面积，为当地提供一种增产增收的经济作物。为了检验山东菏泽产丹参药材是否符合药典要求，本文利用高效液相色谱法（HPLC）对丹参
10、中4种指标性成分的含量进行测定，同时比较与不同产地的丹参药材有效成分的含量差异。结果表明，山东菏泽产丹参药材中4种指标性成分的含量符合现行药典标准，药材合格，可在山东菏泽地区推广种植丹参药材。1 仪器与试药1.1 仪器岛津高效液相色谱仪（DGU-20A5R脱气机；LC-20AD溶液输送单元；SPD-M20A光电二极管阵列紫外可见光检测器；SIL-20AXR自动进样器；CTO-10ASVP柱温箱，日本岛津）；KQ-500E超声波清洗器（昆山超声仪器公司，功率1300 W，频率40 kHz）；SL-300高速多功能粉碎机（浙江永康松青五金厂）；ME204E/02电子天平（梅特勒-托利多）；AG-2
11、45十万分之一天平（梅特勒-托利多）。1.2 试药丹参酮I对照品（批号：PS1083-0025MG，成 都 普 思 生 物）；丹 参 酮 I I A 对 照 品（批号：wkq21081912），隐丹参酮对照品（批号：wkq20021006），丹酚酸B对照品（批号：wkq20020705）（四川维克奇生物）；乙腈（色谱纯，安徽天地高纯溶剂）；甲酸（分析纯，天津化学试剂一厂）；市售纯净水（分析纯，杭州娃哈哈）。1.3 药材丹参药材样品采自不同产地，不同时间采收。药材晒干、粉碎，过三号筛，粉末备用。2 方法与结果2.1 对照品溶液的配制2.1.1 脂溶性对照品溶液的配制 精密称取隐丹参酮对照品、丹参
12、酮I对照品和丹参酮IIA对照品适量，置入25 ml棕色量瓶，加甲醇制成每1 ml含隐丹参酮15 g、丹参酮I 10 g和丹参酮IIA 40 g的混合对照品溶液。2.1.2 水溶性对照品溶液的配制 精密称取丹酚酸B对照品适量，置入25 ml棕色量瓶，加80%甲醇溶液制成每1 ml含丹酚酸B 100 g对照品溶液。2.2 供试品溶液的制备2.2.1 供试药材中脂溶性成分溶液的制备 将不同批次丹参药材粉末，精密称重0.3 g，置入具塞锥形瓶，精密加入50 ml甲醇溶液，密塞称重，超声处理30 min，放冷至室温，再次称重，用甲醇补足失重，摇匀，过滤，取续滤液，即得丹参脂溶性供试品溶液。2.2.2 供
13、试药材中水溶性成分溶液的制备 将不同批次丹参药材粉末，精密称重0.15 g，置入具塞锥形瓶，精密加入80%甲醇溶液50 ml，密塞称重，超声处理30 min，放冷至室温，再次称重，用80%甲醇溶液补足失重，摇匀，过滤，取续滤液稀释浓度1倍，即得丹参水溶性供试品溶液。2.3 色谱条件2.3.1 丹参脂溶性成分色谱条件 色谱柱：Inertsil ODS-3色谱柱（4.6 mm250 mm，5 m）；流动相A相为0.3%甲酸水，B相为乙腈，梯度洗脱（见表1）；流速1.0 ml/min；柱温：25；检测波长270 nm；进样量10 l。食品与药品 Food and Drug 2023年第25卷第1期
14、77表1 脂溶性成分梯度洗脱程序时间/min流动相A/%流动相B/%09010530703020802.3.2 丹参水溶性成分色谱条件 色谱柱：Inertsil ODS-3色谱柱（4.6 mm 250 mm，5 m）；流动相A相为0.3%甲酸水，B相为乙腈，梯度洗脱（见表2）；流速1.0 ml/min；柱温：25；检测波长286 nm；进样量10 l。表2 水溶性成分梯度洗脱程序时间/min流动相A/%流动相B/%090101501002.3.3 系统适用性试验 取丹参各对照品溶液和供试品溶液，分别进样10 l，按上述色谱条件测定，色谱图见图1。结果表明，此方法的系统适应性良好。A.脂溶性对照
15、品；B.丹参脂溶性成分色谱图；C.水溶性对照品；D.丹参水溶性成分色谱图1.隐丹参酮；2.丹参酮I；3.丹参酮IIa；4.丹酚酸B图1 丹参供试品的HPLC 色谱图2.4 方法学考察2.4.1 线性关系考察、检测限和定量限 精密吸取2.1.1项下隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA对照品混合溶液0.5，1，2，3，5 ml置入10 ml量瓶，加甲醇定容至10 ml，摇匀，配制成梯度浓度的脂溶性对照品溶液。取配制好的脂溶性混合对照品溶液，按2.3.1项下色谱条件测定。精密吸取2.1.2项下丹酚酸B对照品溶液1，2，3，5，8 ml置入10 ml量瓶，加甲醇定容至10 ml，摇匀，配制成梯度浓度的水溶
16、性对照品溶液。取水溶性对照品溶液，按2.3.2项下色谱条件测定。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得到回归方程。将上述混合对照品溶液成倍稀释后进样分析，分别在信噪比（S/N）为 3 和 10 时考察检测限和定量限。结果见表3。结果表明，丹参脂溶性与水溶性成分在线性范围内线性关系良好。2.4.2 精密度试验 取脂溶性成分混合对照品溶液与水溶性对照品溶液，分别按2.3.1与2.3.2项下色谱条件连续测定6次，得到隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA峰面积的RSD值分别为1.01%，1.43%和1.10%，丹酚酸B峰面积的RSD值为1.23%。结果表明，该方法的精密度良好。2.4.3 稳定性试验 取脂溶性供试品溶液，进样10 l，分别按2.3.1与2.3.2项下色谱条件，于0，2，4，6，8和10 h进行测定，得到隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA峰面积的RSD值分别为1.99%，2.21%和2.00%，丹酚酸B峰面积的RSD值为2.42%。结果表明，脂溶性供试品溶液在10 h内稳定性良好。2.4.4 重复性试验 精密称取同批次丹参样品6份，每份0.3 g，按2.2.1项下方法制得6
