1、GB/T24800.7-2009化妆品中马钱子碱和士的宁的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了化妆品中马钱子碱和士的宁的高效液相色谱测定方法。本标准适用于化妆品中马钱子碱和士的宁的测定。本标准的检出限和定量限：马钱子碱和士的宁的检出限为2.5mg/kg,定量限为8mg/kg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试脸方法(GB/T
2、6682一2008，IS03696:1987,M0D)3原理试样经溶剂提取，离心过滤后，用高效液相色谐测定，外标法定量，液相色谱-质谱确认。4试剂和材料除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1甲醇：色谱纯。4.2四氢呋喃：色谱纯。4.3甲酸铵溶液(0.01mo/L):准确称取0.6306g甲酸铵于1L容量瓶中，加入约980mL水溶解，用甲酸调节pH至3.0后，定容至1L各用。4.4甲醇水溶液：准确量取64mL甲醇和36mL水，混匀后备用。4.5马钱子碱和士的宁标准品：纯度不小于97%。4.6马钱子减和士的宁的标准储备液：准确称取马钱子碱和土的宁标准物质各100
3、mg,分别置于100mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，配制成浓度分别为1000g/mL的标准储备液，于4C避光保存，可使用三个月。4.7马钱子碱和土的宁的混合标准储备液：分别准确移取马钱子碱和士的宁的标准储备液各25mL于50mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，该溶液中马钱子碱和士的宁的浓度均为500g/mL。5仪器和设备5.1高效液相色谱(HPLC)仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器，5.2高效液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)仪：配有电喷雾离子源(ESI)。5.3分析天平：感量0.0001g和0.001g。5.4离心机：转速不低于5000r/min。5.5超声波水浴。5
4、.6具塞比色管：10mL5.7其塞塑料离心管：10mL。GB/T24800.7-20095.8微孔滤膜：0.45um,有机相。5.9pH计。6分析步骤6.1样品处理6.1.1膏霜、水剂、香波类样品称取1g(精确至0.001g)试样于10L具塞比色管中，加甲醇水溶液(4,4)至刻度，超声提取20min。取部分溶液转移至10mL具塞塑料离心管中，以不低于5000r/min离心15min,上清液经0.45m微孔滤膜过滤，滤液作为待测样液。注：如离心难以获得上清液可加适量氯化钠破乳，6.1.2散粉类样品称取1g(精确至0.001g)试样于10mL具塞比色管中，加人6mL甲醇，超声提取20min。取部分
5、溶液转移至10mL具塞塑料离心管中，以不低于5000r/min离心15min,上清液经0.45m微孔滤膜过滤，取滤液0.6mL,加入0.4mL水，混合液经0.45m微孔滤膜过滤，滤液作为待测样液。6.1.3唇膏类样品称取1.0g(精确至0.001g)试样于10mL具塞比色管中，加入2mL四氢呋喃和1mL甲醇，超声提取10min,再加水至10mL,超声提取10min。取部分溶液转移至10mL具塞塑料离心管中，以不低于5000r/min离心15min,上清液经0.45um微孔滤膜过滤，滤液作为待测样液。6.2测定条件高效液相色谱测定条件如下：a)色谱柱：Kromasil Cis,5um,250mm
6、4.6mm(内径)，或相当者，b)流动相：甲酸铵溶液(0.01mol/L)(4.3)-甲醇(64+36，v/v)。c)流速：1.0mL/min.d)柱温：25。ec)波长：264nm。D进样量：20L。6.3标准曲线的绘制用甲醇将马钱子碱和士的宁的混和标准储备液逐级稀释得到的0.1g/mL、0.5g/mL、1g/mL、5g/mL、10g/mL、20g/mL、50g/mL、100g/mL的混合标准工作液，按6.2的测定条件浓度由低到高进样测定，以峰面积-浓度作图，得到标准曲线回归方程。马钱子碱和土的宁的标准品色谱图参见附录A中的图A.1。6.4测定按6.2的测定条件对待测样液进行测定，用外标法定量。待测样液中马钱子碱和土的宁的响应值应在标准曲线的线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进样分析。必要时，阳性样品需用液相色谐质谱进行确认试验（参见附求B)。6.5空白试验除不称取样品外，均按上述测定条件和步骤进行。7结果计算结果按式(1)计算，计算结果保留两位小数：（计算结果应扣除空白值）。W=1000XcXYf33338835333n（1）12
