1、 化学工程与装备 2023 年 第 2 期 218 Chemical Engineering&Equipment 2023 年 2 月 高效液相色谱手性分离普瑞巴林杂质 光学异构体方法 高效液相色谱手性分离普瑞巴林杂质 光学异构体方法 赵 莉1，梅 华1,2（1江苏诺盟化工有限公司；2南京工业大学，江苏 南京 210009）摘 要：摘 要：本文涉及一种普瑞巴林杂质光学异构体的分离。本发明采用高效液相色谱法手性分析，以硅胶表面涂敷有纤维素-三（4-甲基苯甲酸酯）为固定相的手性色谱柱，其流动相由体积比 85:15 的水相和有机相组成，有机相为乙腈，水相为水，其自动进样量为 20L，上述流动相流速为
2、 0.3mL/min，检测波长为210nm，柱温为室温。本发明提供了一种条件温和、快速，检测灵敏度高、重复性好、易于标准化操作，可用定量的分析普瑞巴林杂质各光学异构体的含量，突破了普瑞巴林杂质分离效果不好和分离时间长以及痕量分析结果不准确，仪器要求高等缺点。在优选的色谱条件下，普瑞巴林杂质对映体间的分离度为 2.51。关键词：关键词：分离；手性色谱柱；异构体；杂质；流动相 引 言 引 言 普瑞巴林，化学名 (3S)-3-(Aminomethyl)-5-methylhexanoic acid，是一种新型钙离子通道调节剂非-氨基丁酸(GABA)受体激动剂或拮抗剂，能阻断电压依赖性钙通道，减少神经递
3、质的释放，临床主要用于治疗外周神经痛以及辅助性治疗局限性部分癫痫发作，该药是在开发的癫痫治疗药中最有希望的一个药物，疗效更好和给药更方便，也可以用于治疗疼痛 和焦虑如带状疱疹后遗神经痛1。普瑞巴林中含有反应残留 根据发明专利 CN1511043A 制备 的化合物 PD224378、PD0312236 和 PD0312237，准确定量地测定普瑞巴林中痕量的手性化合含量极具挑战性，很难采用常规的气相、液相色谱等对其进行痕量直接测定。目前，采用常规气相液相分析方法对普瑞巴林中痕量的手性化合物 PD224378、PD0312236和 PD0312237 分析中,其专一性、灵敏度、分离时间和重复性都存在
4、很大的缺陷，不能提供很好的分离效果和可靠的痕量分析结果。为了克服原方法的缺陷，本发明采用手性色谱柱分离直接测定普瑞巴林中痕量的手性化合物 PD224378、PD0312236 和 PD0312237 含量。该分析方法具有操作简单、专一性好、灵敏极高、分离时间短、重现性好，分离度2高等特点。1 实验器材及试剂 1 实验器材及试剂 1.1 试剂 普瑞巴林杂质（厂家提供）；乙腈（HPLC）；甲醇（HPLC）；醋酸（HPLC）；去离子水（HPLC）1.2 仪器 高效液相色谱仪（LC-100），上海伍丰公司；高效液相色谱分离条件为：（1）手性色谱柱：大赛璐 OJ-RH，5m，1504.6mm；（2）流动
5、相：水和乙腈的体积比为 8515；（3）流速：0.3mL/min，进样量：20L，柱温：室温；（4）采用 UV 检测器，检测波长为 210nm。2 普瑞巴林杂质含量的测定 2 普瑞巴林杂质含量的测定 2.1 标准溶液配制 取普瑞巴林 PD224378，PD0312236 和 PD0312237 各 2.5 mg，精密称量，置 10 mL 容量瓶中，乙腈定容至刻度，得普瑞巴林杂质标准品。2.2 样品处理 将普瑞巴林杂质（厂家提供）溶液精密称量 2.5 mg，置 10 mL 容量瓶中，乙腈定容至刻度放超声波处理 15min，使充分脱气，再经 0.45m 的滤膜进行过滤，移至容量瓶中，准备定量分析。
6、2.3 测定方法 根据产品的性质，采用保留时间和标准溶液对照法定性，外标法3定量分析测定。2.4 测定步骤 在选定的液相操作条件下，待机器稳定后，注入数针处理好的普瑞巴林杂质，直至各组分响应值大小基本不变，取平均值作为结果，得出相应组分的保留时间和峰面积，在同样的色谱条件下，分析待测样品，得出各组分的峰面积，即可计算出普瑞巴林杂质 PD224378，PD0312236 和 PD0312237的浓度。3 结果与讨论 3 结果与讨论 3.1 标准样品的测定 在选定的液相相操作条件下，待机器稳定后，注入数针配制好的普瑞巴林杂质 PD224378，PD0312236 和 PD0312237分析与测试
7、分析与测试 DOI:10.19566/35-1285/tq.2023.02.082 赵 莉：高效液相色谱手性分离普瑞巴林杂质光学异构体方法 219 标准样品以及将普瑞巴林杂质（厂家提供）样品，得到各组分峰面积与浓度，普瑞巴林杂质 PD224378，PD0312237 和PD0312236 相对保留时间分别为：9.00min、14.83min、17.33min。图谱（图 1），普瑞巴林杂质对映体各参数分析结果4参见表 1。表 1 普瑞巴林杂质对映体分析结果 表 1 普瑞巴林杂质对映体分析结果 ID 组分名 RT(min）峰面积 浓度 分离度 a 普瑞巴林杂质 PD224378 9.00 1803
8、.975 7.6367 3.30 b 普瑞巴林杂 PD0312237 14.83 17552.413 74.3042 3.29 c 普瑞巴林杂 PD0312236 17.33 4265.982 18.0591 2.51 图 1 标准样品色谱分析图 图 1 标准样品色谱分析图 3.2 样品的测定 在选定的液相相操作条件下，待机器稳定后，注入数针普瑞巴林杂质（厂家提供）样品，得到各组分峰面积与浓度，普瑞巴林杂质PD224378，PD0312237和PD0312236相对保留时间分别为：9.00min、14.83min、17.33min。图谱（图 2）图 2 普瑞巴林杂质色谱分析图 图 2 普瑞巴林
9、杂质色谱分析图 从表1中可见这些普瑞巴林杂质PD224378，PD0312236和 PD0312237 分离度分别为 3.30，3.29，2.51 完全满足HPLC 谱图分离度要求，图 2 普瑞巴林杂质和图 1 标准品保留时间相一致，表明了本研究结果表明本文所建立的分析方法是一个准确严格的色谱方法，可作为分离普瑞巴林杂质光学异构体反应体系的分析方法5。3.3 方法对照 3.3.1 色谱条件 检测仪器：伍丰 LC-100 型高效液相色谱系统；色谱柱：大赛璐手性柱（5m，1504.6mm）；检测波长：210nm；进样量：20L；进样物质：普瑞巴林杂质供试品，流动相：水：乙腈=90:10；流速：0.
10、35mL/min，结果如图 3。图 3 色谱分析图 图 3 色谱分析图 3.3.2 色谱条件 图 4 色谱分析图 图 4 色谱分析图 检测仪器：伍丰 LC-100 型高效液相色谱系统；色谱柱：220 赵 莉：高效液相色谱手性分离普瑞巴林杂质光学异构体方法 大赛璐手性柱（5m，1504.6mm）；检测波长：210nm；进样量：20L；进样物质：普瑞巴林杂质供试品，流动相：0.01%醋酸水溶液：甲醇=90:10；流速：0.25mL/min，结果如图 4。3.3.3 色谱条件 检测仪器：伍丰 LC-100 型高效液相色谱系统；色谱柱：大赛璐手性柱（5m，1504.6mm）；检测波长：210nm；进样
11、量：20L；进样物质：普瑞巴林杂质供试品，流动相：0.01%醋酸水溶液：甲醇=90:10，流速：0.3mL/min，结果如图 5。图 5 色谱分析图 图 5 色谱分析图 从图 3-图 5 与图 2 对照来看，图 3-图 5 中普瑞巴林杂质PD224378，PD0312236和PD0312237中3个峰完全分不开，分离度小，而图 2 能完全分离普瑞巴林杂质，满足 HPLC 谱图分离度要求，故此方法可用定量的分析普瑞巴林杂质各光学异构体的含量。4 结 语 4 结 语 本文研究一种普瑞巴林杂质 PD224378、PD0312236 和PD0312237 高效液相色谱的快速分离分析方法，其特点在于采用
12、一种硅胶表面涂敷有纤维素-三（4-甲基苯甲酸酯）为填料的手性色谱柱，高效液相色谱分离条件为：（1）手性色谱柱：大赛璐 OJ-RH，5m，150（或 250）4.6mm；（2）流动相：水和乙腈的体积比为 8020；（3）流速：0.250.5mL/min，进样量：1020L，柱温：室温；（4）采用 UV 检测器，检测波长为 210nm。与现有技术相比，本文的优点和效果如下：（1）能将普瑞巴林 3 个手性物杂质先后分开，并能准确测定其普瑞巴林杂质的含量，且杂质的出峰位置比较固定，分离度好，利于解决其定位的问题。（2）整个测试分析全过程仅约 20min，与原来分离(分析周期约为 30min 60min
13、)相比，缩短了分离时间。（3）能在普通高效液相色谱仪上进行操作，不需专门的制备设备就能对产品进行少量分离。参考文献 参考文献 1 沃尼尔.朗伯有限责任公司.坡加巴伯灵乳糖缀合物：02806750.9P.2004.2 广州研创生物技术发展有限公司.一种薄荷脑对映体手性色谱分离分析方法：201710692908.7P.2018.3 南京工业大学.一种头孢呋辛钠聚合物杂质的检测方法：200910025052.3P.2009.4 国家药典委员会.中国药典(2010 年版第二部)M.中国医药科技出版社,2010:194-195.5 计莹,韩凤云.HPLC 法测定普瑞巴林胶囊的有关物质J.广东化工,201
14、4,41(22):214.（上接第 234 页）_（上接第 234 页）_ 8 王晓彦,杜丽,李健军,等.PM2.5手工监测技术要点探讨J.中国环境监测,2014,30(4):146-150.9 杨琪琪,杨禹哲.如何保证环境颗粒物PM2.5手工监测法(重量法)中称量的准确性J.中国计量,2018(12):87-88.10 王龙,刘源,方维凯,等.PM2.5滤膜称重法技术问题分析J.计量与测试技术,2020,47(10):56-58.11 张国城,沈正生,赵红达,等.粉尘性质对光散射式粉尘仪测量结果的影响J.计量技术,2017(07):46-48.12 况彩菱,尚闽,崔海瑞,等.相对湿度对室内PM2.5浓度实时测量值的影响J.环境科学与技术,2017,40(01):107-111.13 张国城,赵红达,赵晓宁,等.湿度对光散射粉尘仪测量结果的影响J.计量技术,2018(05):7-9.
